【技术实现步骤摘要】
一种高分辨染色体制备方法
[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种高分辨染色体制备方法。
技术介绍
[0002]高分辨染色体核型分析在染色体疾病的诊断中尤为重要，能否成功制备出供核型分析的染色体片是关键。在正常情况下，人外周血中是没有分裂相的，只有在异常情况下才能发现。在有丝分裂的刺激剂(PHA)作用下，原处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂。利用这一特性，淋巴细胞经过培养，在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群，当细胞增殖到一定数量时，加入5
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氟尿嘧啶和尿嘧啶核苷从而阻断DNA的合成，使大多数淋巴细胞同步进行到S、G1/S期，17个小时后加入胸腺嘧啶核苷(TDR)释放细胞，使细胞有丝分裂继续，进入分裂期后加入染色体缩短抑制剂溴乙锭(EB)，并加入秋水仙胺破坏纺锤丝的形成，从而阻止到较多具有550条带或以上条带的分裂相，显现染色体本身更细微的结构，便于进行人类染色体高分辨分析。
[0003]目前常规的高分辨染色体制备方法有如下缺陷：
[0004]1、...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高分辨染色体制备方法，其特征在于：包括以下步骤：a)接种：在无菌条件下，抽取抗凝血并垂直接种至人体外周血培养瓶中；b)培养：将培养瓶在37℃恒温培养箱中总共静置培养70
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72h，其中在培养48h后，无菌状态下向培养瓶中的培养液内加入80
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150μlSC
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A试剂，摇匀，继续37℃恒温培养，再培养17h后，无菌状态下向培养液中加入80
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150μlSC
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B试剂，摇匀，继续37℃恒温培养，再培养5
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7h，终止培养前10
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15min无菌状态下向培养液加入一定量的秋水仙胺摇匀；c)收获：收集细胞：将所述培养瓶中的培养液移至离心管中，1800
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2000g离心处理，弃上清液；低渗处理：加入37℃的0.075M氯化钾溶液，立刻充分吹打若干次，吹打结束后37℃恒温水浴处理；预固定：加入固定液，充分混匀；离心处理，弃上清液；一次固定：加入固定液，充分混匀；离心处理，弃上清液；二次固定：加入固定液，充分混匀；离心处理，弃上清液；制细胞悬液：加入固定液，配置细胞悬液；d)滴片：在环境温度21
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26℃、湿度40
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55％、玻片湿度50
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100％环境下，吸取细胞悬液，并在8
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10cm高度进行滴片，滴片结束后置于室外自然晾干，95℃恒温烘烤70min制备染色体成片；e)染色：通过胰酶消化，吉姆萨染液染色，染色结束后自来水清洗干净，晾干；完成制备。2.如权利要求1所述的一种高分辨染色体制备方法，其特征在于：在步骤b)培养中，加入的SC
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A试剂和SC
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B试剂均为...
【专利技术属性】
技术研发人员：耿丹，潘璠，李雨虹，赵利伟，杨苗，杜荷香，栗二娇，
申请(专利权)人：太原金域临床检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
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