一种基于CRISPR系统反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法技术方案

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR系统反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及一种基于CRISPR系统反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法。

技术介绍

[0002]感染性疾病是临床上非常重要的、发病率最高的一类疾病，如猴痘病毒(Monkeypox virus，MPXV)是全长约197kb双链DNA病毒，属于痘病毒科正痘病毒属，猴痘病毒发病早期出现发热、寒战、头痛、嗜睡、乏力、背部疼痛和肌痛等前驱症状，90％患者出现明显的浅表淋巴结肿大。RT
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qPCR是目前核酸检测的金标准，该方法灵敏度高，特异性较强。但RT
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qPCR检测时间较长且仪器设备复杂，需要专业人员多步操作，限制其在现场进行快速检测。
[0003]近年，作为遗传操作工具，基因编辑技术发展迅速，受到广大科研工作者的青睐，在分子诊断中也展现中也展现出巨大的潜力。其中，Cas12蛋白具有独特的反式切割活性，近年来被广泛地应用于生物传感领域。目前，基于Cas12的高灵敏核酸检测方式主要依赖于核酸等温扩增本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR
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Cas反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，其特征在于，所述方法包括：使用石墨烯场效应晶体管放大溶液中Cas12b反式切割检测信号，检测猴痘病毒核酸。2.权利要求1所述的基于CRISPR
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Cas反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，其特征在于，所述方法包括石墨烯场效应晶体管制备步骤、报告分子修饰步骤以及核酸检测步骤。3.根据权利要求2所述的基于CRISPR
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Cas反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，其特征在于，所述石墨烯场效应晶体管制备步骤包括：定制商业化石墨烯场效应晶体管芯片，经引线后，构建聚二甲基硅氧烷微流控腔室，将微流控腔室用环氧树脂胶固定于芯片上，并将进液管和出液管道插入腔室及进行胶封，出液管另一端与泵相连，得到石墨烯场效应晶体管。4.根据权利要求2或3所述的基于CRISPR
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Cas反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，其特征在于，所述报告分子修饰步骤包括：将PBASE溶液在石墨烯场效应晶体管的石墨烯通道表面孵育，将氨基修饰的ssDNA在石墨烯表面孵育，并进行封闭。5.根据权利要求4所述的基于CRISPR
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Cas反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，其特征在于，所述ssDNA为20～40nt的随机序列；优选地，所述报告分子修饰步骤包括：将PBASE溶液在石墨烯场效应晶体管的石墨烯通道表面孵育1～3h，将氨基修饰的ssDNA在石墨烯表面孵育3～9h，并进行封闭1～3h；优选地，所述PBASE溶液的溶剂选自乙醇和/或DMF；优选地，所述封闭的试剂包括乙醇胺。6.根据权利要求2
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5任一项所述的基于CRISPR
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Cas反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，其特征在于，所述核酸检测步骤包括：将Cas12b与sgRNA形成Cas12b
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sgRNA复合物，将待检测样本与Cas12b
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sgRNA复合物混合后加入石墨烯场效应晶体管中进行反应，反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘权，罗迪贤，张晗，王丽，张少辉，徐唱，陈尚，廖珂，邱爱林，文小莎，张家宜，潘银龙，
申请(专利权)人：深圳万物传感科技有限公司，
类型：发明
国别省市：