蛋白的制造方法技术

本发明专利技术提供蛋白的制造方法。本发明专利技术中，通过将以使得Pep4蛋白的活性降低的方式进行了修饰并且具有靶蛋白生产能力的Talaromyces cellulolyti cus用培养基进行培养，而制造靶蛋白。蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白的制造方法


[0001]本专利技术涉及蛋白的制造方法。

技术介绍

[0002]作为蛋白的制造方法，报道了：使用了棒状细菌、芽孢杆菌属细菌、酵母、丝状菌等各种微生物的方法。
[0003]例如，在非专利文献1中公开了：使用了丝状菌Talaromyces cellulolytic us(旧名：Acremonium cellulolyticus)的宿主来源的纤维素酶的生产。此外，专利文献1中公开了：使用了丝状菌的抗体的生产。此外，在专利文献2中，公开了：使用了Talaromyces cellulolyticus等丝状菌的具有内腔的多聚体蛋白的生产。
[0004]此外，专利文献3～4中公开了：使用了内源性蛋白酶的活性弱化了的丝状菌的异源蛋白的生产。此外，专利文献5中公开了：使用了内源性碱性蛋白酶的活性弱化了的丝状菌的异源蛋白的生产。
[0005]此外，专利文献6中公开了：使用了缺乏羧肽酶yscα活性的酵母的异源蛋白的生产。该文献中还描述了：该酵母还可缺乏选自yscA、yscB、yscY和yscS的肽酶活性。
[0006]此外，在专利文献7中公开了：使用了以使得蛋白酶YscB的活性降低的方式进行了修饰的Talaromyces cellulolyticus的蛋白的生产。
[0007]然而，Talaromyces cellulolyticus中的Pep4蛋白与蛋白生产的关系尚不清楚。
[0008]现有技术文献
[0009]专利文献
[0010]专利文献1：日本特表2006
‑
512891
[0011]专利文献2：日本特开2016
‑
158599
[0012]专利文献3：日本特表2015
‑
512611
[0013]专利文献4：日本特表2016
‑
523552
[0014]专利文献5：日本特表2000
‑
507106
[0015]专利文献6：日本特开1990
‑
104279
[0016]专利文献7：WO2019/073954
[0017]非专利文献
[0018]非专利文献1：Inoue H,et al.,Construction of a starch
‑
inducible homol ogous expression system to produce cellulolytic enzymes from Acremonium cellulolyticus.J Ind Microbiol Biotechnol.2013Aug；40(8)：823
‑
30.

技术实现思路

[0019]专利技术所解决的技术问题
[0020]本专利技术的目的在于：提供蛋白的制造方法。
[0021]解决问题的技术手段
[0022]本专利技术人为了解决所述问题而进行了深入研究，结果发现通过以使得Pep4蛋白的活性降低的方式而对Talaromyces cellulolyticus进行修饰，而能够提高Talaromyces cellulolyticus的蛋白生产能力，从而完成了本专利技术。
[0023]即，本专利技术如下所述。
[0024][1]一种靶蛋白的制造方法，其包含：
[0025]通过培养基培养具有靶蛋白的生产能力的Talaromyces cellulolyticus，
[0026]与未修饰菌株相比，所述Talaromyces cellulolyticus以使Pep4蛋白的活性降低的方式进行了修饰。
[0027][2]所述方法，其中，
[0028]所述Pep4蛋白的活性通过使pep4基因的表达降低或通过破坏pep4基因而降低。
[0029][3]所述方法，其中，
[0030]所述Pep4蛋白的活性通过pep4基因的缺失而降低。
[0031][4]所述方法，其中，
[0032]所述Pep4蛋白为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白：
[0033](a)包含SEQ ID NO.71表示的氨基酸序列的蛋白；
[0034](b)包含在SEQ ID NO.71表示的氨基酸序列中包含1～10个氨基酸残基的替换、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且，具有蛋白酶活性的蛋白；
[0035](c)包含相对于SEQ ID NO.71表示的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，并且，具有蛋白酶活性的蛋白。
[0036][5]所述方法，其中，
[0037]与未修饰菌株相比，所述Talaromyces cellulolyticus还以使YscB蛋白和/或CreA蛋白的活性降低的方式进行了修饰。
[0038][6]所述方法，其中，
[0039]所述YscB蛋白和/或所述CreA蛋白的活性通过使yscB基因和/或creA基因的表达降低或通过破坏yscB基因和/或creA基因而降低。
[0040][7]所述方法，其中，
[0041]所述YscB蛋白和/或所述CreA蛋白的活性通过yscB基因和/或creA基因的缺失而降低。
[0042][8]所述方法，其中，
[0043]所述Talaromyces cellulolyticus为来源于Talaromyces cellulolyticus S6
‑
25菌株(NITE BP
‑
01685)的修饰菌株。
[0044][9]所述方法，其进一步包含回收靶蛋白。
[0045][10]所述方法，其中，
[0046]通过所述培养，在所述培养基中积蓄靶蛋白。
[0047][11]所述方法，其中，
[0048]靶蛋白作为与在Talaromyces cellulolyticus中发挥功能的信号肽的融合蛋白而进行表达。
[0049][12]所述方法，其中，
[0050]靶蛋白为异源蛋白。
[0051][13]所述方法，其中，
[0052]靶蛋白为来源于人的蛋白。
[0053][14]所述方法，其中，
[0054]靶蛋白为抗体相关分子。
附图说明
[0055][图1]表示基于T.cellulolyticus对照菌株和Δpep4菌株的培养液上清的曲妥珠单抗(Trastuzumab)分解的结果的图(照片)。
[0056][图2]表示基于来源于T.cellulolyticus F09ΔyscB菌株的曲妥珠单抗表达菌株及其pep4基因破坏菌株的曲妥珠单抗生产的结果的图(照片)。
具体实施方式
[0057]以下，对于本专利技术详细地进行说明。
[0058]本专利技术的方法为利用了Talaromyces cellulolyticus的靶蛋白的制造方法。该方法中利用的Talaromyces 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种靶蛋白的制造方法，其包含：通过培养基培养具有靶蛋白的生产能力的Talaromyces cellulolyticus，与未修饰菌株相比，所述Talaromyces cellulolyticus以使Pep4蛋白的活性降低的方式进行了修饰。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述Pep4蛋白的活性通过使pep4基因的表达降低或通过破坏pep4基因而降低。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述Pep4蛋白的活性通过pep4基因的缺失而降低。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述Pep4蛋白为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白：(a)包含SEQ ID NO.71表示的氨基酸序列的蛋白；(b)包含在SEQ ID NO.71表示的氨基酸序列中包含1～10个氨基酸残基的替换、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且，具有蛋白酶活性的蛋白；(c)包含相对于SEQ ID NO.71表示的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，并且，具有蛋白酶活性的蛋白。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，与未修饰菌株相比，所述Talaromyces cellulolyticus还以使YscB蛋白和/或CreA蛋白的活性降低的方式进行了修饰。6.根据权利要求5所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：新田畅久，深田宽朗，新保和高，松平晶子，渡部俊树，臼田佳弘，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：