自噬基因在制备诊断哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了自噬基因在制备诊断支气管哮喘寒饮蕴肺证试剂盒中的应用，自噬基因包括：Atg5基因和Atg10基因，将Atg5基因和Atg10基因应用于制备试剂盒中，包括：SYBR Premix Ex Taq

【技术实现步骤摘要】
自噬基因在制备诊断哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及医学诊断
，更具体地说是涉及自噬基因在制备诊断支气管哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]哮喘气道的基本病理改变是气道炎症和重塑，早期表现为支气管粘膜肿胀充血分泌物增多，气道内炎症细胞浸润，气道平滑肌痉挛等可逆性的病理改变。随着疾病发展和反复发作，病理变化逐渐加重，肉眼可见肺膨胀以及肺气肿。哮喘是一种气道高反应性疾病，目前不能根治，主要是通过药物控制症状。
[0003]现有的中医诊断方法“望闻问切”具有一定的主观意志性，辨别容易受到其他疾病因素的干扰，特异性明显不足。而且，目前主要的肺功能评判指标大多采用化学法检测，方法学上缺乏特异性，无法确切反应该损伤是否由寒饮蕴肺单独引起。
[0004]自噬又称“自我消化”，是除泛素
‑
蛋白酶体系统之外，细胞质内清除衰老、受损细胞器和蛋白以及有害大分子物质的一种自我调控机制，研究表明，自噬对支气管哮喘的发病具有重要作用，将细胞自噬调节在一个适宜的范围内，有助于抑制哮喘疾病。
[0005]因此，以自噬基因为诊断指标，并将其应用于制备诊断支气管哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种自噬基因在制备诊断哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中的应用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]自噬基因在制备诊断支气管哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中的应用，所述自噬基因包括：Atg5基因和Atg10基因。
[0009]一种诊断支气管哮喘和寒饮蕴肺证的试剂盒，包括：
[0010][0011]经由上述的技术方案可知，本专利技术首次发现了支气管哮喘和寒饮蕴肺在自噬基因Atg上存在显著差异，差异表达的自噬基因Atg对于治疗的选择和预后判断有重要的价值，
因此，本专利技术将自噬基因Atg5和Atg10基因应用于检测支气管哮喘和寒饮蕴肺证中，提高了诊断的准确性和客观性。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0013]图1附图为本专利技术各组大鼠体重变化示意图；
[0014]图2附图为本专利技术各组大鼠造模后IL
‑
14的表达水平结果图；
[0015]图3附图为本专利技术各组大鼠造模后IFN
‑
γ的表达水平结果图；
[0016]图4附图为本专利技术各组大鼠造模后TNF
‑
α表达水平结果图；
[0017]图5附图为本专利技术各组大鼠造模后Atg 5mRNA的表达水平图；
[0018]图6附图为本专利技术各组大鼠造模后Atg 10mRNA的表达水平图。
具体实施方式
[0019]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]本专利技术实施例公开了自噬基因在制备诊断支气管哮喘寒饮蕴肺证试剂盒中的应用，用到的材料如下：
[0021]动物
[0022]选用鼠龄7～8周SPF级Wistar雄性大鼠32只，体质量(200
±
20)g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物使用许可证号：北京SYXK(京)2016
‑
0006。饲养于山东中医药大学动物实验中心，动物房昼夜12小时光暗变替，相对湿度40％
‑
60％，温度23
±
2℃，食水自由摄取，动物适应环境1周后开始实验。研究用实验动物的使用与操作均符合山东中医药大学动物保护委员会(编号：SDUTCM20200615001)关于实验动物操作与动物福利的要求。
[0023]药物与试剂
[0024]小青龙汤(麻黄、桂枝、生白芍、干姜、五味子、法半夏、甘草各10g，细辛5g)；购自山东新中鲁中医院中药房。大鼠用药量按比例换算，计算出大鼠日服量为小青龙汤煎剂6.696g
·
kg
‑1·
d
‑1。
[0025]4％多聚甲醛溶液；戊巴比妥钠(Sigma，201912)；2.5％戊二醛固定液(电镜专用)；卵清白蛋白(Solarbio，A8040)；氢氧化铝(上海国药集团化学试剂有限公司，20200226)；大鼠IL
‑
13ELISA试剂盒(CUSA Bio,CSB
‑
E07454)；大鼠TNF
‑
αELISA试剂盒(ExCell Bio,ER006
‑
96)；大鼠IL
‑
4ELISA试剂盒(CUSABio,CSB
‑
E04635r
‑
96T)；大鼠IFN
‑
γELISA试剂盒(ExCell Bio,ER005
‑
96)；LC3A/B(D3U4C)XP Rabbit mAb(Cell Signaling Technology,12741s)；Anti
‑
Beclin 1antibody(abcam,ab62557)；Trizol(invitrogen,ERC29
‑
96)；
PrimeScript
TM
RT reagentKit with gDNA Eraser(PerfectReal Time)(Takara,RR0 47A)；Premix Ex Taq
TM
(Takara,RR420A)；taq酶(索莱宝，PC1100)；DNTP mix(索莱宝，PC2200)；氯仿；DEPC处理水(Solarbio,R1600)；无水乙醇；反转录试剂盒(TaKaRa)qPCR mix(依科赛)；qPCR 96孔板；
[0026]主要仪器：洗板机:芬兰(Thermo Labsystems)，型号为AC8；离心机:高速离心机(himac)，型号为CR21G；培养箱:隔水式恒温培养箱(国产)，型号为GNP
‑
9080型；电子体温计；AniRes2005动物肺功能分析系统(北京贝兰博科技有限公司)；压缩空气雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司，403K)；移液器(Eppendorf)；
‑
80℃冰箱(Thermo)；7300/7500实时定量PCR仪(Applied Biosystems)；Millipore超纯水制备系统Milli
‑
Q(Mil本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.自噬基因在制备诊断哮喘和寒饮蕴肺证试剂盒中的应用，其特征在于，所述自噬基因包括：Atg5...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜培正，范晓璇，张庆祥，刘庆银，孟庆岩，郑冰清，刘燕，孙千雯，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：