本发明专利技术公开了一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物，包括SEQ ID No.1所示的hsa_circRNA_0003998。本发明专利技术的circINPP4B不仅通过调节Th17细胞的分化参与EAE的发生发展过程，而且其表达水平与临床MS患者的病程密切相关，表明circINPP4B的发现为Th17介导的MS疾病诊断和治疗提供了潜在的靶点。疾病诊断和治疗提供了潜在的靶点。疾病诊断和治疗提供了潜在的靶点。
【技术实现步骤摘要】
一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物及其应用
[0001]本专利技术涉及多发性硬化治疗
，具体为一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物及其应用。
技术介绍
[0002]多发性硬化（MS）是一种影响全球数百万人的慢性炎症性自身免疫疾病，其特征是由于髓鞘和少突胶质细胞损伤而在中枢神经系统（CNS）中形成脱髓鞘斑块。目前的研究表明：MS的发生和发展是多种因素的结果，如自身免疫、病毒感染、遗传倾向、环境效应和个体易感性，其中自身免疫起着关键作用。CD4
+
T辅助细胞（Th），尤其是分泌IL
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17的Th细胞17（Th17），是导致MS和实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）（MS的小鼠模型）的主要发起者和参与者。目前，临床上缺乏有效的快速诊断和预后的生物标志物，是预防和治疗MS亟待解决的关键问题。
[0003]当前研究表明，由于结构稳定性、序列保守性和细胞组织特异性， circRNAs及其功能受到越来越多的关注。目前，人类转录组中已鉴定出超过10000个候选circRNAs，这些circRNAs通过调节细胞增殖、分化、凋亡、侵袭和转移参与癌症、心肌梗死和神经退行性疾病的进展，并逐渐成为诊断肿瘤和神经炎性疾病的生物标志物和预后指标之一。研究表明，circRNAs与自身免疫性MS疾病的发生和发展密切相关。
[0004]综合上述内容，我们提出一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物及其应用。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物及其应用，解决了现有的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物，包括SEQ ID No .1所示的hsa_circRNA_0003998。
[0007]一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物在制备诊断多发性硬化患者的试剂盒、试剂或芯片中的应用。
[0008]一种用于多发性硬化诊断的circRNA标志物的引物组合，针对hsa_circRNA_0003998的特异性引物组合包括：上游引物序列CACCGGACTACCCCATCTAT；下游引物序列TGGATCCTATGATCGGCACA。
[0009]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术的circINPP4B不仅通过调节Th17细胞的分化参与EAE的发生发展过程，而且其表达水平与临床MS患者的病程密切相关，表明circINPP4B的发现为Th17介导的MS疾病诊断和治疗提供了潜在的靶点。
附图说明
[0010]图1为本专利技术PCR产物测序结果示意图；图2为本专利技术敲减circINPP4B缓解EAE症状示意图。
具体实施方式
[0011]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0012]本专利技术使用MOG
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55
多肽免疫小鼠构建EAE模型，通过一系列细胞和分子生物学实验发现circINPP4B不仅通过调节Th17细胞的分化参与EAE的发生发展过程，而且其表达水平与临床MS患者的病程密切相关，表明circINPP4B的发现为Th17介导的MS疾病诊断和治疗提供了潜在的靶点。
[0013]实施案例11实验方法选择6
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8周龄的C57BL/6小鼠（体重16
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18g），并在背部皮下四点注射MOG
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（2mg/ml），每只200ul，腹腔注射百日咳毒素PTX（1mg/ml），每只200ul；48小时后，再次腹腔注射百日咳毒素PTX，每只200ul；10天小鼠开始发病，根据以下标准对EAE鼠进行神经功能评估：0：未发病1：尾部瘫痪2：后肢无力或偏瘫3：完整的后肢瘫痪4：前肢和后肢瘫痪5：垂死或死亡2实验验证通过微阵列数据和生物信息学分析，circ_3998位于第8号染色体上，由INPP4B基因的6个外显子（外显子3
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8）组成，长度为684bp；为了验证在CD4
+
T细胞的表达，针对circ_3998（circINPP4B）通过上游引物序列CACCGGACTACCCCATCTAT；下游引物序列GGATCCTATGATCGGCACA进行PCR分析，然后对PCR产物进行Sanger测序证实了在cicrINPP4B中存在反向剪切位点（图1），其中，PCR反应程序：Stage1：94℃10min；Stage2：（cycle：35）94℃30sec，55℃30sec，72℃40sec；Stage3：72℃10min，4℃保存。
[0014]3实验结果分析通过siRNA敲减小鼠CD4
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淋巴细胞中circINPP4B的水平（图2A）；MOG
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免疫后，circINPP4B敲减的小鼠EAE发病延迟和EAE峰值评分降低（图2B）；脊髓组织学检测显示，circINPP4B敲减的EAE小鼠炎症浸润（图2C1）和脱髓鞘病变减轻（图2C2），髓磷脂碱性蛋白（MBP）表达上调（图2C3），髓鞘厚度增大（图2C4）；circINPP4B敲减的EAE小鼠外周血、脊髓和淋巴结IL
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17
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淋巴细胞比例明显降低（图2D，E），外周血血清中Th17相关细胞因子的浓度显著下降（图2F）；
将circINPP4B敲减的CD4
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Tn细胞移植到年龄匹配的Rag1
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/
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免疫缺陷小鼠体内，然后行MOG
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免疫诱导EAE，敲减circINPP4B不影响外周血中CD4
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细胞数量（图2G）；移植circINPP4B敲减的CD4
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Tn细胞的Rag1
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小鼠表现出较低的EAE评分（图2H）和较少的IL
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17
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淋巴细胞（图2I），IFN
‑
γ
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淋巴细胞的比例没有明显变化（图2J）；结合上述研究数据表明敲减circINPP4B可在体内抑制Th17细胞分化，缓解EAE症状。
[0015]如图2所示，A.MOG免疫18天后，阴性对照（NC）或circINPP4B siRNA（siRNA）感染的小鼠CD4
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外周血淋巴细胞（PBL）、脾细胞（SP）和淋巴结淋巴细胞（LN）中circINPP4B表达分析。B.EAE小鼠的临床评分（每组试验n=5）；C1–
C4.MOG免疫18天后，不同组小鼠脊髓切片的H&E染色、LFB染色、MBP免疫荧光染色和TEM观察本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物，其特征在于，包括SEQ ID No.1所示的hsa_circRNA_0003998。2.如权利要求1所述的一种用于预测多发性硬化不同病程的circRNA标志物在制备诊断多发性硬化患者的试剂盒、试剂或芯片中的应用。3...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩晶晶，曲学彬，梁晓雷，杨留才，王萱若，张欣怡，高涵，
申请(专利权)人：江苏医药职业学院，
类型：发明
国别省市：
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