一种鹿茸菇新纤溶酶及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种鹿茸菇新纤溶酶及其制备方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶由单亚基组成，所述新纤溶酶的分子量为30.9kDa；所述新纤溶酶N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，经NCBI数据库比对，为一种新纤溶酶。本发明专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶能够顺次降解人血纤维蛋白原的α、β和γ链，且降解时间短；同时，该新纤溶酶还能够溶解血凝块，具有良好的溶栓效果。此外，本发明专利技术提供的鹿茸菇纤溶酶安全性高、易于人体吸收、制作成本低廉，具有开发应用的前景。具有开发应用的前景。具有开发应用的前景。

【技术实现步骤摘要】
一种鹿茸菇新纤溶酶及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，尤其涉及一种鹿茸菇新纤溶酶及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]血栓性疾病一直在侵害着人类健康，发病率逐年增加，是导致当今人类死亡的主要原因之一。溶栓法是目前治疗和预防血栓性疾病的主要手段，目前应用于临床治疗的溶栓药物疗效显著，但还存在副作用大、价格昂贵等缺点。因此，研制高效、快速、防止再栓塞且副作用小的新型溶栓药物是现代医学的迫切需要，从自然界各种生物资源中开发新型溶栓物质是溶栓剂产品开发的重要途径。
[0003]鹿茸菇(Lyophyllumdecastes)，属担子菌亚门，伞菌目，白蘑科，离褶伞属。又名“路基蘑”“铁道蘑”“荷叶蘑”等。鹿茸菇口感脆滑，味道鲜美，其子实体和菌丝体均具有较高的营养价值，富含膳食纤维。子实体具有良好的生物活性，具有抗肿瘤、提高免疫功能、抗菌作用、降血糖、降血脂等功效，是传统的药食同源真菌，有着广阔的生物医药开发和保健食品应用前景，是一种亟待开发的重要资源。由于不同食用真菌的基因组成不同，所以并非是所有的食用真菌都具有纤溶酶，同时，不同食用真菌来源的纤溶酶其具有何种药用效果，也是无法预料的。而且由于不同食用真菌来源的纤溶酶具有不同的生物性质，所以无疑是给获得纯品酶带来了极大的困难。本领域目前尚未有关于从鹿茸菇中提取纤溶酶的报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鹿茸菇新纤溶酶及其制备方法与应用，本专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶在人体生理pH时具有高的纤溶活性且活性稳定，不仅具备良好的溶栓效果，而且安全性高、易于人体吸收、制作成本低廉的优势，具有开发应用的前景。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种鹿茸菇新纤溶酶，所述鹿茸菇新纤溶酶由单亚基组成，所述新纤溶酶的分子量为30.9kDa；所述新纤溶酶N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。经NCBI数据库比对，为一种新纤溶酶。
[0007]本专利技术还提供了一种上述鹿茸菇新纤溶酶的制备方法，包括如下步骤：用PBS缓冲溶液浸提鹿茸菇子实体，得到浸提液；固液分离后，将得到的粗酶液依次进行硫酸铵盐析、疏水相互作用色谱1、强阳离子交换色谱和疏水相互作用色谱2分离，得到鹿茸菇新纤溶酶；浸提所用PBS缓冲溶液的pH为7.4、浓度为0.02mol/L。
[0008]优选的，浸提所用PBS缓冲溶液与鹿茸菇子实体的体积重量比为8L
‑
12L：1kg。
[0009]优选的，所述浸提的温度为3℃
‑
5℃，所述浸提的时间为3h
‑
5h。
[0010]优选的，所述硫酸铵盐析的环境温度为3℃
‑
5℃，所述硫酸铵盐析的时间为22h
‑
26h。
[0011]优选的，所述疏水相互作用色谱1的色谱柱为Octyl
‑
SepharoseFastFlow疏水相互
作用色谱柱，所述疏水相互作用色谱1的分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为含有硫酸铵饱和度25％的0.01
‑
0.03mol/L的PBS缓冲溶液，洗脱液为0.01
‑
0.03mol/LPBS缓冲溶液，流速为1
‑
3mL/min；所述洗脱液的pH为7.4。
[0012]优选的，所述强阳离子交换色谱的色谱柱为SP
‑
SepharoseHigh Performance离子交换色谱柱，所述强阳离子交换色谱的分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为PBS缓冲溶液，洗脱液为含有0.3
‑
0.5mol/LNaCl的PBS缓冲溶液，流速为1
‑
3mL/min；强阳离子交换色谱所用的PBS缓冲溶液的pH为5.2、浓度为0.01
‑
0.03mol/L。
[0013]优选的，所述疏水相互作用色谱2的色谱柱为Source15PHE疏水相互作用色谱柱，所述疏水相互作用色谱2的分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为0.01
‑
0.03mol/L的PBS缓冲溶液，洗脱液为含有硫酸铵饱和度10％的0.01
‑
0.03mol/LPBS缓冲溶液，流速为1
‑
3mL/min，疏水相互作用色谱2所用的PBS缓冲溶液的pH值为7.4。
[0014]本专利技术还提供了一种上述鹿茸菇新纤溶酶或上述制备方法在制备溶栓食品和/或药物中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术首次获得了一种具有纤溶作用的鹿茸菇新纤溶酶，经NCBI数据比对，为一种新纤溶酶。本专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶在人体生理pH时具有高的纤溶活性且活性稳定，不但可以直接降解血纤维蛋白，还可以激活纤溶酶原间接降解血纤维蛋白。本专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶能够顺次降解人血纤维蛋白原的α、β和γ链，且降解时间短；还能够溶解血凝块，具有良好的溶栓效果。另外，本专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶安全性高、易于人体吸收、制作成本低廉，具有开发应用的前景。
附图说明
[0017]图1为不同pH条件下鹿茸菇新纤溶酶活力变化；
[0018]图2为不同温度条件下鹿茸菇新纤溶酶活力变化；
[0019]图3为不同金属离子对鹿茸菇新纤溶酶活性的影响；
[0020]图4为鹿茸菇新纤溶酶对血纤维蛋白的溶解性；
[0021]图5为鹿茸菇新纤溶酶降解人血纤维蛋白原的降解图谱；
[0022]图6为鹿茸菇新纤溶酶对血凝块的降解率。
具体实施方式
[0023]本专利技术提供了一种鹿茸菇新纤溶酶，所述鹿茸菇纤溶酶由单亚基组成，所述单亚基的分子量为30.9kDa；所述单亚基的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，经NCBI数据库比对，为一种新纤溶酶。
[0024]本专利技术提供的鹿茸菇新纤溶酶的相对分子质量为30.9kDa左右，本专利技术鹿茸菇新纤溶酶的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID NO.1：G
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A
‑
V
‑
T
‑
Q
‑
C
‑
N
‑
A
‑
P
‑
W
‑
G
‑
L所示。
[0025]本专利技术还提供了一种上述鹿茸菇新纤溶酶的制备方法，包括如下步骤：用PBS缓冲溶液浸提鹿茸菇子实体，得到浸提液；固液分离后，将得到的粗酶液依次进行硫酸铵盐析、疏水相互作用色谱1、强阳离子交换色谱和疏水相互作用色谱2分离，得到鹿茸菇新纤溶酶；浸提所用PBS缓冲溶液的pH为7.4、浓度为0.02mol/L。
[0026]本专利技术对于鹿茸菇子实体优选购置于古田县天鲜农产品有限公司，地址为古田县凤都镇双珠村凤林路75号，商品条形码为6951370171033。在本专利技术中，优本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鹿茸菇新纤溶酶，其特征在于，所述鹿茸菇新纤溶酶由单亚基组成，所述新纤溶酶的分子量为30.9kDa；所述新纤溶酶N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述鹿茸菇新纤溶酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：用PBS缓冲溶液浸提鹿茸菇子实体，得到浸提液；固液分离后，将得到的粗酶液依次进行硫酸铵盐析、疏水相互作用色谱1、强阳离子交换色谱和疏水相互作用色谱2分离，得到鹿茸菇新纤溶酶；浸提所用PBS缓冲溶液的pH为7.4、浓度为0.02mol/L。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，浸提所用PBS缓冲溶液与鹿茸菇子实体的体积重量比为8L
‑
12L：1kg。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述浸提的温度为3℃
‑
5℃，所述浸提的时间为3h
‑
5h。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述硫酸铵盐析的环境温度为3℃
‑
5℃，所述硫酸铵盐析的时间为22h
‑
26h。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述疏水相互作用色谱1的色谱柱为Octyl
‑
Sepharose Fast Flow疏水相互作用色谱柱，所述疏水相互作用色谱1的分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为含有硫酸铵饱和度25％的0.01
‑
0.03mol/L的PBS缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓永平，刘晓兰，陈嘉欣，李冠龙，郑喜群，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：