从草菇子实体中提取纯化蛋白酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种从草菇子实体中提取纯化蛋白酶的方法。所述方法先将草菇子实体在15℃下处理36

【技术实现步骤摘要】
从草菇子实体中提取纯化蛋白酶的方法


[0001]本专利技术属于蛋白质的提取纯化领域，具体涉及一种从草菇子实体中提取纯化蛋白酶的方法。

技术介绍

[0002]由于蛋白酶的底物特异性、结构及作用机制的不同，其在洗涤剂、医药、食品和皮革等生产过程中均有应用，而来自微生物的蛋白酶比植物蛋白酶应用更为广泛。与动物蛋白酶、植物蛋白酶和细菌蛋白酶对比，真菌分泌的蛋白酶具有多样性，包括胞外蛋白酶、膜结合蛋白酶和胞内蛋白酶，且其在下游工业中明显优于细菌蛋白酶。为得到更多种类的真菌蛋白酶，蘑菇也成为了许多蛋白酶的来源，如从真姬菇(Hypsizigus marmoreus)中得到丝氨酸蛋白酶和从雷丸菌(Laccocephalum mylittae)中得到的金属蛋白酶，这两种的蛋白酶均为中性蛋白酶。中性蛋白酶因其反应条件温和，有较高的催化效率，被广泛应用于食品、医药、饲料等行业。
[0003]草菇(Volvariella volvacea(Bull.ex.Fr.)Sing)别名苞脚菇、兰花菇，是一种热带亚热带高温型食用菌，其子实体在低温下存在自溶现象，宜在15本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.从草菇子实体中提取纯化蛋白酶的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)草菇子实体在15℃下处理36
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96h后，将草菇子实体加入蒸馏水，匀浆，4℃下，离心，保留上清，得到粗蛋白酶液，再在粗蛋白酶液中加入硫酸铵达到80％的饱和度，4℃下静置，离心，去除上清液后，用蒸馏水对沉淀进行溶解，然后用10kDa的透析袋进行透析，最后将透析后的液体冻干并保存；(2)将步骤(1)冻干后的固体溶于20mM、pH7.0的磷酸缓冲液中，得到草菇子实体中性蛋白酶液，酶液经微孔膜过滤后上样，用20mM、pH7.0的Tris
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HCl缓冲液平衡DEAE FF离子柱，用1M NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，在得到主要吸收峰分离梯度后，调整洗脱梯度，依次用20％、60％和100％的1M NaCl溶液进行洗脱，最后得到吸收峰，并对吸收峰进行蛋白含量与酶活性的测定，通过比酶活确定主要吸收峰1；(3)对主要吸收峰1用Superdex 75 10/300GL的凝胶柱进行纯化，先用20mM、pH7.0的磷酸缓冲液对凝胶柱进行平衡，上样后用含0.1M NaCl的20mM、pH7.0的磷酸缓冲液进行洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵妍，李治平，陈明杰，余昌霞，李正鹏，仝宗军，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：