Tango6基因在促进细胞增殖中的应用以及方法技术

本发明专利技术涉及细胞扩增方法技术领域，具体涉及Tango6基因在促进细胞增殖中的应用以及方法。Tango6基因具有促进细胞增殖的作用，通过在各类细胞中过表达Tango6基因，可以促进细胞扩增。TANGO6蛋白(Tango6基因)作为一个全新的控制细胞增殖的因子，到目前为止还未见研究报道。通过包装敲降以及过表达Tango6基因的慢病毒，我们发现其可以调节细胞的扩增水平。我们发现了基于Tango6基因超表达的全新的促进干细胞扩增的方法，具有极大的临床应用潜力。Tango6基因作为细胞增殖的调控关键因子，可应用于相关药物筛选的实践操作中，为有效且简便地控制干细胞增殖创造条件。地控制干细胞增殖创造条件。地控制干细胞增殖创造条件。

【技术实现步骤摘要】
Tango6基因在促进细胞增殖中的应用以及方法


[0001]本专利技术涉及细胞扩增方法
，具体涉及Tango6基因在促进细胞增殖中的应用以及方法。

技术介绍

[0002]干细胞由于其具有分化成各类细胞的潜能，已经广泛应用于骨髓移植等多种领域，可用于治疗白血病等干细胞缺陷导致的疾病。但如何在体外对各类干细胞进行扩增，以满足临床需要一直是人们关注的重点。
[0003]中国专利CN110157736B提出了一种促进山羊毛囊干细胞增殖的方法，提供了一段可以特异性的降低山羊毛囊干细胞中CMTM3基因mRNA的表达水平的shRNA，该片段与载体pDC316
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ZsGreen
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shRNA连接组成干扰载体pDC316
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ZsGreen
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shRNA
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CMTM3，将该干扰载体导入到山羊毛囊干细胞中可以降低基因CMTM3 mRNA的表达水平，从而促进毛囊干细胞增殖。但是针对于人类胚胎干细胞等其他干细胞，目前还没有非常有效的基于基因调控的促进细胞增殖且不会引起细胞癌变(无限增殖)的方法，且相关调控基因尚不明确。由于干细胞资源的稀缺，极大地限制了干细胞在临床上的应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，以解决现有技术中缺少有效地促进干细胞增殖的方法的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本方案还提供了一种促进细胞增殖的方法，包括以下依次进行的步骤：
[0008]S1：构建用于表达Tango6基因的表达载体；
[0009]S2：对表达载体进行慢病毒包被，获得病毒液；
[0010]S3：使用病毒液感染待扩增的细胞。
[0011]本技术方案的原理以及有益效果在于：
[0012]专利技术人首先通过正向遗传学的手段，对野生型斑马鱼进行ENU介导的诱变，获得若干突变体，发现其中的cq72突变体的造血干/祖细胞(HSPCs)数目从3.5dpf(受精后3天)开始显著减少，5dpf基本消失。专利技术人通过图位克隆的方法对突变基因定位，最终通过测序证实突变基因为Tango6。为了进一步验证基因功能，专利技术人通过CRISPR/Cas9技术构建了基因敲除突变体，证实该基因对造血干/祖细胞增殖产生影响，进而将其作为提升细胞扩增水平的候选基因。专利技术人再通过基因敲除和过表达实验，进而证实了该基因与细胞扩增水平的相关性。
[0013]TANGO6蛋白(Tango6基因)作为一个全新的控制细胞增殖的因子，到目前为止还未见研究报道。通过包装敲降以及过表达Tango6基因的慢病毒，我们发现其可以调节细胞的扩增水平，敲降TANGO6蛋白可抑制细胞的扩增，相应的，过表达TANGO6可促进了细胞的扩
增。干细胞医疗成为研究热点，通过器官移植治疗各类干细胞缺陷导致的疾病，如白血病等。而在移植之前，如何获取足够数目的干细胞成为关注的重点。我们发现了基于Tango6基因超表达的全新的促进干细胞扩增的方法，具有极大的临床应用潜力。除了构建Tango6基因超表达的干细胞外，还可以研发针对Tango6基因抑制剂，从而促进干细胞扩增。
[0014]进一步，所述细胞为干细胞。实验结果显示，Tango6基因对促进干细胞扩增具有正向作用，所以可以用于干细胞的促增殖的操作中。
[0015]进一步，所述干细胞为胚胎干细胞或者造血干/祖细胞。实验显示，Tango6基因对多种干细胞均有较为理想的促进增殖的效果，这些干细胞包括胚胎干细胞、造血干/祖细胞。
[0016]进一步，所述细胞为神经元细胞或者白细胞。除了干细胞外，Tango6基因还可以促进其他细胞的增殖。实验结果显示，过表达Tango6后促进了细胞增殖水平，使得造血干/祖细胞(cmyb标记)数目增加，并由此导致红细胞前体(gata1标记)，淋巴细胞前体(irf4a标记)，粒细胞(lyz标记)以及巨噬细胞(mfap4标记)等下游谱系细胞数目增加。除此之外，神经元细胞中过表达Tango6后也会导致细胞数目增加，与血液细胞表型一致。
[0017]进一步，Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，包括提高Tango6基因在细胞中的表达水平的步骤。通过提高Tango6基因的转录水平，可以促进该细胞的增殖。
[0018]进一步，在S1中，先通过PCR扩增所述Tango6基因，获得扩增产物；再将扩增产物整合在空载体上，获得表达载体。上述过程为获得过表达载体的现有技术的常规过程，操作过程简单且能获得稳定的表达载体。
[0019]进一步，在S1中，PCR扩增的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，PCR扩增的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。采用上述引物可以实现对Tango6基因的高效扩增。
[0020]进一步，Tango6基因在筛选促进干细胞增殖的药物中的应用。
[0021]进一步，所述药物用于提升Tango6基因的转录水平，或者提升Tango6蛋白的表达水平，或者提升Tango6蛋白的活性。
[0022]TANGO6蛋白(Tango6基因)作为一个全新的控制细胞增殖的因子，到目前为止还未见研究报道。通过包装敲降以及过表达Tango6基因的慢病毒，我们发现其可以调节细胞的扩增水平。因此，TANGO6蛋白(Tango6基因)为控制细胞扩增水平的关键因子(靶点)。通过对关键因子(靶点)的控制，我们可以实现对细胞增殖的调控，进而筛选出作用于该靶点的药物。在与干细胞增殖相关的药物筛选过程中，我们可以测试候选药物对于Tango6基因的表达促进或者抑制情况，进而评价药物对于干细胞增殖的作用效果。以Tango6基因作为药物靶点，我们可以研发针对Tango6基因的激动剂、提升Tango6基因的转录水平的试剂等，进而获得用于提升Tango6基因的转录水平、或者提升Tango6蛋白的表达水平、或者提升Tango6蛋白的活性的药物，为更为简便地控制干细胞增殖创造条件。
附图说明
[0023]图1为实施例1的cq72突变体和野生型斑马鱼的CHT区域原位杂交图像。
[0024]图2为实施例1的cq72突变位置的遗传和物理图谱。
[0025]图3为实施例1的三种Tango6突变体斑马鱼品系的突变位点。
[0026]图4为实施例2的慢病毒包被示意图。
[0027]图5为实施例2的通过Western blot检测敲降以及过表达TANGO6的效率的实验结果。
[0028]图6为实施例2的通过宽场显微镜拍摄H1细胞密度。
[0029]图7为实施例2的细胞密度的统计图。
[0030]图8为实施例3的coro1a
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tango6表达载体结构示意图。
[0031]图9为实施例3的初步筛选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，其特征在于，所述细胞为干细胞。3.根据权利要求2所述的Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，其特征在于，所述干细胞为胚胎干细胞或者造血干/祖细胞。4.根据权利要求1所述的Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，其特征在于，所述细胞为神经元细胞或者血细胞。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的Tango6基因在促进细胞增殖中的应用，其特征在于，包括提高Tango6基因在细胞中的表达水平的步骤。6.一种促进细胞增殖的方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：S1：构建用于表达Tango6基因的表达载体；S2：...

【专利技术属性】
技术研发人员：李礼，冯智，刘胜男，苏明，宋春雨，林宸宇，赵从健，罗凌飞，
申请(专利权)人：中国科学院重庆绿色智能技术研究院，
类型：发明
国别省市：