一类酸激活抗肿瘤肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一类酸激活抗肿瘤肽，属于生物医药技术领域。该类抗肿瘤肽结构中富含亮氨酸和组氨酸，同时含有少量谷氨酸和赖氨酸。其结构通式为K

【技术实现步骤摘要】
一类酸激活抗肿瘤肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一类酸激活抗肿瘤肽，本专利技术还包括该类酸激活抗肿瘤多肽在制备临床抗肿瘤药物以及在制备抗肿瘤多药耐药菌药物中的应用。

技术介绍

[0002]癌症由于具有高发病率和高致死率，一直严重威胁着人们的生命健康[CA.Cancer J.Clin.2021,71,209
‑
249；CA.Cancer.J.Clin.2021,71,7
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33]。化疗仍是目前治疗癌症的主要方法之一，但是大多数化疗药在应用过程中缺乏选择性，毒副作用较大，且易诱导癌细胞产生多药耐药性，严重降低了癌症治疗的效果[CA.Cancer J.Clin.2014,64,252；Nature.2019,575,299]。因此，寻求选择性高、不易诱导耐药且能有效杀死多种肿瘤细胞的抗肿瘤药迫在眉睫。
[0003]抗癌肽是一类两亲性的阳离子短肽，由于具有高活性、低免疫原性、好生物相容性等优点而受到广泛关注。阳离子抗癌肽能通过静电相互作用选择性地绑定在带负电荷的癌细胞膜上，进而通过快速破膜机制杀死癌细胞，并且不易诱导癌细胞产生多药耐药性[J Drug Target.2021,651
‑
659；Adv Mater.2020,32(36):e2001108]。虽然抗癌肽具有巨大的应用潜能，但是其对癌细胞的选择性较差，在杀死肿瘤细胞的同时也会杀死正常细胞，这严重阻碍了其临床应用[Future Microbiol.2011,6(6):635r/>–
651；J Pept Sci.2009,15(11):790
–
795]。
[0004]肿瘤组织由于异常代谢使得肿瘤周围的pH值略低于正常组织，并且这一弱酸性环境稳定存在于肿瘤周围[J Control Release.2021,10；330:898
‑
906]，这为设计酸激活的抗癌药或抗癌药物递送系统提供了可能。组氨酸中咪唑环的pKa≈6，一旦暴露在弱酸性环境中，组氨酸的咪唑环就会质子化带正电荷，而在正常生理条件下，组氨酸不带电[J Control Release.2012,158(3):357
‑
61]。研究者们利用组氨酸的这一特点，设计了很多酸激活的抗癌肽、穿膜肽以及药物递送系统[Bioconjug Chem.2018,19；29(9):2936
‑
2944；Chem Biol Drug Des.2019,94(5):1884
‑
1893；J Control Release.2021,10；330:898
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906]。但现有的酸激活的抗癌肽尚存在结构复杂，合成工艺繁琐、成本高昂等技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一：提供一类结构简单、制造成本低、低毒、具有肿瘤微酸性环境激活特性的抗肿瘤肽。
[0006]本专利技术的目的之二：提供上述酸激活抗肿瘤肽在抗肿瘤药物制备中的应用。
[0007]本专利技术目的之三：提供上述酸激活抗肿瘤肽在制备抗肿瘤多药耐药菌药物中的应用。
[0008]为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0009](一)一类酸激活抗肿瘤肽的结构设计
[0010]本专利技术涉及的一类酸激活抗肿瘤肽，其碳末端是疏水性氨基酸及类似物(本专利技术
以L、W、F、I为代表)。肽链中富含亮氨酸、组氨酸以及少量谷氨酸和赖氨酸，其结构通式为：K
x
L7H
n
E
m
X。其中，
[0011]x＝0、1、2；
[0012]m＝0、1、2；
[0013]n＝4、5、6；
[0014]X为L、W、F、I，位于肽链碳末端。
[0015]具体地，本专利技术所述的一类酸激活抗肿瘤肽，其结构通式为:Lys
x
Leu7His
n
Glu
m
X，其中，
[0016]x＝0、1、2；
[0017]m＝0、1、2；
[0018]n＝4、5、6；
[0019]X为Leu、Trp、Phe、Ile，位于肽链碳末端。
[0020]作为本专利技术技术方案的优选，上述酸激活抗肿瘤肽包括L7H6L(L8H6)，L7H6W(LH
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W)，L7H6F(LH
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F)，L7H6I(LH
‑
I)，KL7H5EW(E
‑
K)，K2L7H5EW(E
‑
2K)和KL7H4E2W(2E
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K)其氨基酸序列分别如SEQ ID No.1至SEQ ID No.7所示。
[0021]上述酸激活抗肿瘤肽均采用经典固相合成法制备得到。
[0022]二、酸激活抗肿瘤肽在制备抗肿瘤药物中的应用
[0023]1、体外抗肿瘤实验
[0024]用MTT法评估上述抗肿瘤肽的酸激活抗肿瘤活性。所选用的肿瘤细胞包括MCF
‑
7、H1975、HepaRG和B16
‑
F10细胞。具体方法为：将Hela细胞接种在96孔板中，10000/孔，孵育24h。用含不同浓度肽的pH7.4或pH6.0的无血清培养液作用于细胞1h，每孔中加入10μL MTT，孵育4h，然后吸出孔中液体，每孔中加入150μL DMSO，将细胞板置于微量振荡器上震10min，用酶标仪测490nm处的吸光值，计算细胞存活率。只加培养基的孔作为空白对照。重复三次独立平行实验。结果如图1和图2所示。
[0025]图1和图2结果表明该类抗肿瘤肽对多种肿瘤细胞均具有明显的酸激活抗肿瘤活性。
[0026]2、溶血实验
[0027]取小鼠新鲜血液，800rpm离心5min，弃掉上清，用PBS将红细胞洗三次后，将其制成含8％红细胞的悬浮液，接种在96孔板中，100μL/孔。将用PBS配制的不同浓度的肽溶液加入到含有红细胞的96孔中，100μL/孔。将细胞板于微量振荡器上震1min混匀后，将细胞板置于37℃的培养箱中孵育1h，然后将细胞板1200g离心15min，将每孔中100μL上清液转移到另一新的96孔板中，用酶标仪测上清液在490nm处的吸光值。计算肽的溶血率。2％Triton X
‑
100作用的孔作为阳性对照，PBS作用的孔作为阴性对照。重复三次独立平行实验。结果如图3所示。
[0028]图3结果表明，本专利技术酸激活抗肿瘤肽溶血毒性浓度均高于抗肿瘤活性有效浓度，尤其是E
‑
K和2E
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K表现出低的溶血毒性，其溶血毒性浓度远高于抗肿瘤活性有效浓度，显示出较高的治疗指数。
[0029]3、扫描电镜实验
[0030]将MCF
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7细胞接种在放有圆形盖玻片的24孔板中，20万/孔。培养24h后，吸出孔中
液体，将含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一类酸激活抗肿瘤肽，其特征是，所述抗肿瘤肽结构通式为：K
x
L7H
n
E
m
X；其中，x＝0、1、2；n＝4、5、6；m＝0、1、2；X为疏水性氨基酸L、W、F或I，位于肽链碳末端。2.如权利要求1所述的一类酸激活抗肿瘤肽，其特征是，所述酸激活抗肿瘤肽包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪京满，王锐，张云，常琳琳，
申请(专利权)人：王锐，
类型：发明
国别省市：