一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法，包括下列步骤：(1)将曲霉菌在PDB培养基中培养得到发酵液；(2)将步骤(1)得到的发酵液进行离心，得到粗酶液，然后利用乙醇沉淀法得到酶制剂；(3)将步骤(2)得到的酶制剂加入绿毛茶中进行酶促发酵，即得藏茶。本发明专利技术利用曲霉胞外酶制剂生产的产品具有藏茶独特的风味，发酵的时间短于普通发酵的藏茶，提高了藏茶的生产效率和避免了藏茶在长时间的发酵过程中遭受真菌毒素的侵染。发酵过程中遭受真菌毒素的侵染。发酵过程中遭受真菌毒素的侵染。

【技术实现步骤摘要】
一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法


[0001]本专利技术属藏茶生产领域，具体涉及一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法。

技术介绍

[0002]藏茶是我国黑茶的典型代表，是边疆少数民族同胞的生活必需品。近年来，藏茶因其独特的保健功效而受到了广大消费者的青睐，内销市场不断扩大。渥堆是藏茶品质形成过程中的关键工序。渥堆过程中，原料茶中的多酚类物质、生物碱、氨基酸等物质在微生物复合胞外酶的作用下发生氧化、还原、聚合、降解和络合等一系列复杂的生化反应，形成雅安藏茶独有的醇和浓厚口感。
[0003]传统藏茶的渥堆过程为开放的微生物发酵系统，在藏茶生产过程中面临着诸多问题，渥堆周期长、堆表和堆芯品质转化不一致以及微生物代谢可能导致的真菌毒素等问题，已成为制约雅安藏茶产业发展的关键，利用现代生物学技术开发雅安藏茶清洁化生产新工艺已成为雅安藏茶行业关注的焦点。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题为：解决传统微生物发酵藏茶渥堆周期长、堆表和堆芯品质转化不一致以及微生物代谢可能导致的真菌毒素等问题。
[0005]本专利技术的技术方案为：一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法，包括下列步骤：
[0006](1)将曲霉菌在PDB培养基中培养得到发酵液；
[0007](2)将步骤(1)得到的发酵液进行离心，得到粗酶液，然后利用乙醇沉淀法得到酶制剂；
[0008](3)将步骤(2)得到的酶制剂加入绿毛茶中进行酶促发酵，即得藏茶。
[0009]进一步地，所述酶促发酵的方法为：将酶制剂均匀接入绿毛茶中于30
‑
60℃条件下培养24h，再于80℃烘箱中烘干即得到藏茶产品。优选为55℃条件下培养。
[0010]进一步地，酶制剂的加入量为50
‑
100U/30g。
[0011]进一步地，步骤(1)中，所述培养的条件为：35℃，150r/min条件下在PDB培养基中培养7d。
[0012]进一步地，所述曲霉菌为从雅安地区藏茶产品中分离出具有较高产酶能力的菌株，所述产酶能力是指产多酚氧化酶、纤维素酶、果胶酶、蛋白酶的能力。
[0013]进一步地，步骤(2)中，所述离心的方法为：发酵液于12000r/min离心机中离心20min后取上清液。
[0014]进一步地，所述乙醇沉淀法为：向粗酶液中加入无水乙醇至含醇量75％醇沉24h，沉淀经漂洗后再冷冻干燥制成酶制剂。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0016]利用曲霉胞外酶制剂生产的产品具有藏茶独特的风味，发酵的时间短于普通发酵
的藏茶，提高了藏茶的生产效率和避免了藏茶在长时间的发酵过程中遭受真菌毒素的侵染。
附图说明
[0017]图1不同温度条件下添加不同浓度的外源酶发酵24h审评图片。
具体实施方式
[0018]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。
[0019]实施例1
[0020](1)高产酶菌株的分离与筛选：用PDA培养基从雅安不同藏茶生产企业生产的藏茶产品中分离出曲霉属真菌菌株，利用多酚氧化酶、纤维素酶、果胶酶以及蛋白酶选择培养基再筛选出具有较高产酶能力的菌株，待用。
[0021](2)最佳产酶条件的确定：以产酶能力为指标通过单因素试验(接种量、培养时间、培养温度)来探究高产酶菌株的最佳产酶条件。
[0022](3)发酵液的制备：将分离筛选好的高产酶菌株刮入无菌水中震荡均匀以制得孢子悬浮液，调节孢子悬浮液浓度为107CFU/mL。吸取适量孢子悬浮液接入PDB培养基中，于35℃，150r/min恒温震荡培养箱中培养7d，获得发酵液。
[0023](4)粗酶液的提取：将发酵液离心后得到的发酵液用12000r/min离心机离心20min后取上清液得到粗酶液。
[0024](5)胞外酶制剂：向上清液中添加3倍体积的无水乙醇进行醇沉24h，醇沉后以6000r/min离心10min，将沉淀漂洗，然后冷冻干燥制成干粉，即为胞外酶制剂。分别检测胞外酶制剂的多酚氧化酶、纤维素酶、果胶酶和蛋白酶的酶活力。
[0025](6)工艺优化：将不同浓度的酶制剂(0、50U、100U)均匀接入含水量为35％的绿毛茶(30g)中进行酶促反应，于不同温度(35℃、45℃、55℃)条件下培养24h，然后将其于80℃烘箱中烘干即得到藏茶产品。不同条件下得到的藏茶的茶黄素、茶红素和茶褐素的含量如表1所示。
[0026]表1不同温度条件下添加不同浓度的外源酶发酵24h茶色素成分
[0027][0028]参照国标GB/T 32719.5
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2018中的审评方法，对汤色、香气、滋味、叶底逐项分析。通过对比添加不同浓度的外源酶发酵24h制作的藏茶产品汤色发现，通过添加外源酶可以
提升藏茶的发酵速度，并且汤色与酶活力呈正相关；添加酶制剂以后的香气渐显藏茶的独特风味，产品汤色橙红、滋味甜醇，香气陈香泛甜；叶底也随着酶活力的升高而逐渐加深。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)将曲霉菌在PDB培养基中培养得到发酵液；(2)将步骤(1)得到的发酵液进行离心，得到粗酶液，然后利用乙醇沉淀法得到酶制剂；(3)将步骤(2)得到的酶制剂加入绿毛茶中进行酶促发酵，即得藏茶。2.根据权利要求1所述的一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法，其特征在于，所述酶促发酵的方法为：将酶制剂均匀接入绿毛茶中于30
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60℃条件下培养24h，再于80℃烘箱中烘干即得到藏茶产品。3.根据权利要求2所述的一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法，其特征在于，在55℃条件下培养。4.根据权利要求2所述的一种利用曲霉菌胞外酶制剂生产藏茶的方法，其特征在于，酶制剂的加入量为50
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【专利技术属性】
技术研发人员：胥伟，赵以桥，蒋宇洋，何春雷，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：