一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒及其检测方法，采用猪血清、马血清、兔血清、猪血清白蛋白或马血清白蛋白作为校准品和质控品的基质，避免了牛血清或牛血清白蛋白对丙戊酸检测的干扰；在基质中添加乙二胺二邻苯基乙酸钠等作为抗氧化剂，并优选采用兔血清作为基质，显著提高校准品及质控品的稳定性；同时通过将内标储存在含乙二胺二邻苯基乙酸钠的沉淀剂中，用于样本前处理可一步操作实现内标校正、蛋白沉淀和目标物质提取，并且使内标液可长期储存，随取随用，达到延长试剂盒产品有效期的效果。达到延长试剂盒产品有效期的效果。达到延长试剂盒产品有效期的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术属于生物化学分析
，具体而言，涉及一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]在癫痫发作的治疗中，抗癫痫药物有特殊重要的意义。抗癫痫药物可通过两种方式来消除或减轻癫痫发作，一是影响中枢神经元，以防止或减少他们的病理性过度放电；其二是提高正常脑组织的兴奋阈，减弱病灶兴奋的扩散，防止癫痫复发。抗癫痫药物对人的记忆、运动速度等均有影响，血药浓度越高，影响越明显。因此抗癫痫药物血药浓度监测意义重大。
[0003]抗癫痫药物可以单独使用，也可联合使用以增强药物疗效或减轻药物毒副作用。卡马西平是一种亚氨基1,2
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二苯乙烯的衍生物，通常单独或与其它抗癫痫药物联合运用于精神运动性发作(癫痫大发作)、局限性、局限性
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混合型大发作的治疗。其同时可用于治疗三叉神经痛。卡马西平有时也用于治疗锂治疗无效的躁狂抑郁症患者。由于吸收和新陈代谢之间的不同，个体对卡马西平的反应存在着巨大的差异。
[0004]丙戊酸(VPA:2
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丙基戊酸；丙基戊酸钠)是种相对较新的抗惊厥类药物，主要用于原发和继发全身性癫痫发作，对不发作癫痫治疗也有效，尤其对肌阵挛治疗效果明显，是慢性光敏性癫痫的治疗药物。VPA常与其他抗癫痫药物联合使用，但最近有研究表明VPA单独使用也有良好疗效。另有研究提示VPA对情感失常治疗有用，尤其在对锂治疗不敏感的双相失常患者。通过β、ω氧化和结合作用，VPA转变为代谢复合物，一些代谢物具有明显的抗惊厥活性，而其他一些复合物可能与药物毒性副作用的产生有关。此外，同时使用的其他抗癫痫药物会对VPA代谢造成明显影响。
[0005]苯妥英通常被选择用于全身大运动性癫痫发作(癫痫大发作)和病灶性癫痫发作的治疗。其同样也能用于基本性治疗局部癫痫发作(病灶性)或复杂性局部癫痫发作(精神运动性，颞叶)。苯妥英与血浆蛋白的结合力高，未结合的苯妥英即处于游离形式的具有较高的药理学活性。在白蛋白水平正常和肾功能正常的个体中，未结合的苯妥英约占10％。苯妥英与众不同的代谢消除特性使得剂量/浓度关系的评价变得相对困难。据报道，不同个体之间对苯妥英的吸收、新陈代谢和消除有显著差异。药物给药剂量与药理学活性之间的关系会受到疾病状态、药物处理和患者并发症的影响而变得更为复杂。
[0006]可见丙戊酸、卡马西平和苯妥英都是非常常用，且可联用的抗癫痫药物，需要实现同时对丙戊酸、卡马西平和苯妥英的血药浓度进行监测，才能帮助医师根据患者对药物反应的个体差异来确定治疗剂量，调整药物剂量以减少毒副作用，从而控制癫痫发作，确保患者能达到较好的依从性。
[0007]目前国内外有关血清中抗癫痫药物的测定方法报道很多，常见的方法有：化学发光法和色谱法，在众多的方法中，液相串联质谱法为测定抗癫痫药物的首选方法。但是以往
方法普遍存在操作过程复杂、干扰因素多、特异性差、分析时间长、检测通量低的问题，这主要都是因为样品前处理过程繁琐、稳定性差所造成的。
[0008]现有的抗癫痫药物样品前处理方法主要有蛋白沉淀、液液萃取等，如CN111812216A，采用甲醇和乙腈混合溶液作为蛋白沉淀剂对血清样本进行前处理，从而进行样本抗癫痫药物的检测，但由于其样本前处理过程存在稳定性差的问题，导致检测结果容易受干扰，误差大，检测灵敏度不高。
[0009]因此迫切需要一种操作简单、处理效率高、检测通量高、检测准确度和灵敏度高、成本低、人工工作量小等优点的抗癫痫药物样品前处理方法，使其可以克服现有方法的以上不足和缺陷。

技术实现思路

[0010]为解决上述问题，本专利技术提供一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒及其检测方法，采用猪血清、马血清、兔血清、猪血清白蛋白或马血清白蛋白作为校准品和质控品的基质，避免了牛血清或牛血清白蛋白对丙戊酸检测的干扰；在基质中添加乙二胺二邻苯基乙酸钠等作为抗氧化剂，并优选采用兔血清作为基质，显著提高校准品及质控品的稳定性；同时通过将内标储存在含乙二胺二邻苯基乙酸钠的沉淀剂中，用于样本前处理可一步操作实现内标校正、蛋白沉淀和目标物质提取，并且使内标液可长期储存，随取随用，达到延长试剂盒产品有效期的效果。
[0011]一方面，本专利技术提供了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒，所述试剂盒含有标准品和/或质控品，所述标准品和/或质控品中含有添加剂，所述添加剂为乙二胺二邻苯基乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠、葡萄糖酸钠、柠檬酸钠中的任意一种或多种。
[0012]本专利技术所述的抗癫痫药物包括丙戊酸、卡马西平和苯妥英。
[0013]专利技术人经过大量实验证明，溶液基质中的抗癫痫药物，尤其是其中的丙戊酸，在氧化、碱性环境下稳定性较差，比如检测试剂盒中的标准品、质控品和内标，其中含有的丙戊酸含量非常不稳定，常温下放置几天就会出现含量严重下降的问题，从而会显著影响检测的准确性和灵敏度，导致用于检测抗癫痫药物的所有样品、标准品、内标、质控品等全都需要现用现配，给实际操作带来非常大的麻烦，检测成本高。因此，为了更加精准地检测血清中丙戊酸、卡马西平和苯妥英3种抗癫痫药物的含量，首先必须克服溶液基质中丙戊酸的稳定性问题。
[0014]丙戊酸稳定剂的筛选需综合考虑其抗氧化能力、酸碱性，选择合适的浓度，才能达到较好的稳定效果。也就是说，在同时含有丙戊酸、卡马西平和苯妥英的标准品或质控品中，必须添加一种添加剂，能使丙戊酸不被氧化，同时保持最合适的酸碱性和浓度，才能尽最大可能使丙戊酸的含量保持稳定。
[0015]专利技术人令人惊喜地发现，在标准品或质控品中添加乙二胺二邻苯基乙酸钠(EDDHA)、乙二胺四乙酸二钠、葡萄糖酸钠或柠檬酸钠可显著提高抗癫痫药物的稳定性，尤其是丙戊酸的稳定性。
[0016]进一步地，所述添加剂为乙二胺二邻苯基乙酸钠。
[0017]研究证明，当添加剂为乙二胺二邻苯基乙酸钠(EDDHA)时，提高稳定性的效果最
好。
[0018]进一步地，所述标准品和/或质控品采用基质配制，所述基质为动物血清或动物血清白蛋白，所述动物血清不是牛血清，所述动物血清白蛋白不是牛血清白蛋白。
[0019]由于人血清不易获得，不能作为基质用于制备批量生产的试剂盒产品，因此需要找到合适的动物血清作为基质。
[0020]专利技术人发现，牛血清或牛血清白蛋白对丙戊酸的检测存在明显干扰，会导致丙戊酸的检测结果非常不稳定；因此标准品和质控品的基质都不能采用牛血清或牛血清白蛋白来配制。
[0021]进一步地，所述基质为猪血清、马血清、兔血清、猪血清白蛋白或马血清白蛋白中的任意一种或多种，所述乙二胺二邻苯基乙酸钠的浓度为0.02
‑
0.1mg/mL。
[0022]采用猪血清、马血清、兔血清、猪血清白蛋白或马血清白蛋白作为基质，基质中添加剂包括乙二胺二邻苯基乙酸钠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱串联质谱检测血清中抗癫痫药物的检测试剂盒，其特征在于，含有标准品和/或质控品，所述标准品和/或质控品中含有添加剂，所述添加剂为乙二胺二邻苯基乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠、葡萄糖酸钠、柠檬酸钠中的任意一种或多种。2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述添加剂为乙二胺二邻苯基乙酸钠。3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标准品和/或质控品采用基质配制，所述基质为动物血清或动物血清白蛋白，所述动物血清不是牛血清，动物血清白蛋白不是牛血清白蛋白。4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述基质为猪血清、马血清、兔血清、猪血清白蛋白或马血清白蛋白中的任意一种或多种，所述乙二胺二邻苯基乙酸钠的浓度为0.02
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0.1mg/mL。5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述基质为兔血清；所述检测试剂盒还包...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾珊珊，王琳，张聪，韩宝玉，刘华芬，
申请(专利权)人：浙江迪赛思诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：