一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法和应用。本发明专利技术采用2，4，6

【技术实现步骤摘要】
一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法和应用。

技术介绍

[0002]溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)是一种病因尚不完全清楚的弥慢性非特异性大肠炎症性疾病，病变累及直肠、乙状结肠。环境、感染、遗传以及免疫等因素均可能在该病的发生、发展过程中起着至关重要的作用。在中医理论中，UC致病证候多样，其中大肠湿热证占55％，占据重要地位。大肠湿热以邪实为主，表现为实热证﹐患者一般为湿热体质，起病多与饮食有关，多见于急性活动期或初发型UC。故在治疗有大肠湿热症候的UC患者时，若对大肠湿热证候与UC病理症状进行结合分析，将会产生更优疗效。
[0003]有相关文献报道，直接通过TNBS
‑
乙醇灌肠建立UC大鼠模型，简单易行，但是并未结合酒精、高糖高脂饮食，与人类平时的饮食结构不符。高糖、高脂食物，过量饮酒等行为都会增加肠道负担，降低肠道免疫力，从而增加炎症性肠病患病风险导致肠腔黏膜屏障受到损伤，引起UC发病率升高。国内还有其他文献报道，通过“高脂高糖饮食+饥饱交替+饮酒+高温高湿环境+5％葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium，DSS)”诱导，为期29d[9]，但造模时间过长且方法困难，易存在过多不确定因素，对于普通实验室来说，重现模型较困难，无法普遍使用。另外，还有学者通过2，4
‑
二硝基氯苯(DNCB)+乙醇+乙酸复合法建立大鼠UC模型，但使用乙酸灌肠，会造成动物死亡率高，不适用于中医临床下的评价。
[0004]目前UC动物模型多采用TNBS诱导、单纯免疫法及免疫复合法等方法进行造模。但造模周期较长、未结合大肠湿热症候，并且不适宜大肠湿热型UC的相关研究，因此建立一个具有大肠湿热证的UC动物模型显得十分重要。

技术实现思路

[0005]为解决以上技术上的不足，本专利技术提供了一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术通过采用不同浓度的蜂蜜水自由饮，加以不同浓度的猪油与白酒隔日灌胃为主，并结合高温高湿环境，以TNBS
‑
乙醇水溶液灌肠的复合方式造模，通过检测其血清指标水平的变化，为大肠湿热型UC动物模型提供可靠的实验数据。
[0007]本专利技术提供的一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法，包括以下步骤：
[0008](1)SPF级SD大鼠，雄性，随机分组，每组8只；
[0009](2)大鼠放置于高湿高热的环境下进行饲养；
[0010](3)大鼠高脂高糖饮食喂养14d；
[0011](4)禁食不禁水l d后，腹腔注射10％水合氯醛麻醉，将一直径2.0mm的橡胶导管，由肛门轻缓插入深约8cm，立即按0.2ml/100g的比例缓慢注入5％TNBS溶液，每只0.25ml 50％乙醇溶液；拔出导管，将大鼠持续倒置15s；
[0012](5)进行大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的评价和验证。
[0013]优选的，步骤(2)所述高湿高热的环境为：大鼠置入人工气候箱内，每日3h，上午1.5h，下午1.5h。设置参数为温度(35
±
2)℃，湿度(95
±
2)％，光照6级。
[0014]优选的，步骤(3)所述大鼠高脂高糖饮食喂养为：普通饲料喂养，加不同浓度蜂蜜水自由饮用，按大鼠体重灌服不同剂量猪油，并与猪油隔日灌服不同度数15ml/kg白酒。
[0015]更优选的，所述不同浓度蜂蜜水浓度为10
‑
15％。
[0016]更优选的，所述不同剂量猪油为5
‑
15g/kg。
[0017]更优选的，所述白酒度数为38
‑
52度。
[0018]最优选的，步骤(3)所述大鼠高脂高糖饮食喂养为：普通饲料喂养，加15％浓度蜂蜜水自由饮用，按大鼠体重灌服5g/kg猪油，并与猪油隔日灌服45度的15ml/kg白酒。大肠湿热证候重现最为成功。
[0019]优选的，步骤(2)所述大鼠模型的评价和验证包括精神状态、食水情况、胃部状况、呼吸情况、体质量下降、皮毛色泽、便血及大便性状等，以及中医大肠湿热证候疾病活动指数评分、血清指标水平变化情况、结肠长度等评价。
[0020]大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型建立方法的应用，所述应用包括中药新药的筛选和/或药效的评价。
[0021]本专利技术的有益效果是：本专利技术以高温高湿环境、酒精、高糖高脂饮食为主导因素，造成较严重的大肠湿热证候，结合TNBS
‑
乙醇灌肠诱发UC的形成，可明显缩短造模时间，且动物患病症状与人类UC的临床表现更为类似，造模方法简单易操作，一般实验室均可进行。本专利技术建立的这种大肠湿热型UC大鼠模型符合中医临床下大肠湿热证的研究，为中药新药的筛选以及药效的评价奠定了基础。
附图说明
[0022]图1为各组大鼠体重增长趋势对比。
[0023]图2为各组DAI评分对比。
[0024]图3为各组别大鼠UC模型血清IL
‑
1β指标的变化。
[0025]图4为各组别大鼠UC模型血清TNF
‑
α指标的变化。
[0026]图5为各组别大鼠UC模型血清IL
‑
4指标的变化。
[0027]图6为各组大鼠结肠长度变化对比。
具体实施方式
[0028]下面结合实施例来说明本专利技术。
[0029]本专利技术实验使用的仪器与材料如下：
[0030]Multiskan Go
‑
1510全波长酶标仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)；UV
‑
2600紫外可见分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)；AL104电子天平(梅特勒
‑
托利多仪器(上海)有限公司)；TDZ5
‑
WS台式低速离心机；DZKM
‑
S
‑
6电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪
器厂)；人工气候箱(瑞华机械)。
[0031]SPF级雄性SD大鼠76只(190
‑
240g)，健康、6周龄(北京维通利华实验动物技术有限公司)，合格证号：SCXK(京)2016
‑
0011；实验动物配合饲料(鼠)(山东省实验动物中心)，生产许可证号：SCXK(鲁)20130014。
[0032]食用酒精为市售白酒(38
°
、45
°
、52
°
)；食用蜂蜜为市售可食用蜂蜜，本实验用10％、15％和20％蜂蜜水由食用蜂蜜与蒸馏水稀释制成；猪油为市售；5％TNBS水溶(Sigma，批号：SLCG2384)；乙醇溶液(天津富宇精细化工有限公司，批号：20210527)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)SPF级SD大鼠，雄性，随机分组，每组8只；(2)大鼠放置于高湿高热的环境下进行饲养；(3)大鼠高脂高糖饮食喂养14d；(4)禁食不禁水l d后，腹腔注射10％水合氯醛麻醉，将一直径2.0mm的橡胶导管，由肛门轻缓插入深约8cm，立即按0.2ml/100g的比例缓慢注入5％TNBS溶液，每只0.25ml 50％乙醇溶液；拔出导管，将大鼠持续倒置15s；(5)进行大肠湿热型溃疡性结肠炎病证大鼠模型的评价和验证。2.根据权利要求1所述大鼠模型的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述高湿高热的环境为：大鼠置入人工气候箱内，每日3h，上午1.5h，下午1.5h。设置参数为温度(35
±
2)℃，湿度(95
±
2)％，光照6级。3.根据权利要求1所述大鼠模型的建立方法，其特征在于，步骤(3)所述大鼠高脂高糖饮食喂养为：普通饲料喂养，加不同浓度蜂蜜水自由饮用，按大鼠体重灌服不同剂量猪油，并与猪油隔日灌服不同度...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦立雯，潘少斌，林翠霞，李自发，李佳，高鑫，王郅昊，李绮婧，张骏飞，陈琛，刘艺，童韵菲，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：