一种磁定量免疫层析的检测试纸条及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种磁定量免疫层析的检测试纸条及其制备方法与应用。本发明专利技术通过将携带ST2单克隆抗体的免疫磁珠悬浮液滴加在预处理过的玻璃纤维素膜，干燥、低温保存，得到结合垫；将玻璃纤维膜在样品垫处理液中浸泡处理，干燥，得到样品垫；将设定浓度的又一ST2单克隆抗体用喷膜仪在所述硝酸纤维素膜的检测线处划线，以及将设定浓度的羊抗小鼠二抗在质控线处划线，得到预包被的硝酸纤维素反应膜；沿层析方向上，将样品垫、结合垫、硝酸纤维素反应膜以及吸水滤纸依次粘附在PVC底板上，得到检测试纸条。本发明专利技术简便快速、便携性强、定量精确，适合快速定量现场检测。适合快速定量现场检测。适合快速定量现场检测。

【技术实现步骤摘要】
一种磁定量免疫层析的检测试纸条及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于体外诊断
，尤其涉及一种磁定量免疫层析的检测试纸条及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]生长刺激表达基因2蛋白(ST2)属于白介素1(IL
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1)家族受体中的一员。ST2有两种亚型，分别为跨模型(ST2L)和可溶型ST2(Soluble，sST2)。ST2是白介素33(IL
‑
33)的受体。IL
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33是一种“警报素”，由活细胞在损伤应激时分泌。IL
‑
33通过与ST2L结合发挥生物学功能，而sST2作为一种“诱骗受体”与ST2L竞争性地结合IL
‑
33，从而阻断IL
‑
33/ST2L信号通路的功能。
[0003]近年来，sST2(下文称ST2)作为一种新的心血管以及炎症标志物而受到越来越多的关注。
[0004]在心血管疾病领域，研究表明IL
‑
33与ST2L的相互作用具有心脏保护功能、能减少心肌纤维化、减少心肌肥大及细胞凋亡和改善心脏功能。而ST2阻断IL
‑
33/ST2L系统的心脏保护作用，因此，外周血中ST2可作为一种心脏标志物，提供患者临床诊断、治疗和预后的重要信息。与其他众多心脏标志物不同，ST2的水平会随着患者病情的变化而快速改变。急慢性心衰患者的ST2水平的升高(＞35ng/ml)与心衰严重程度高度相关，并且可用于再入院及死亡率预测。慢性心衰患者的ST2水平检测可用于治疗评估，即ST2水平的下降可提示治疗生效，这也与患者更好的预后结局相关。同时ST2还可以提供与NT
‑
proBNP(BNP)以及超敏肌钙蛋白T互补的预后信息。2013年美国心脏病学会(ACC)和美国心脏学会(AHA)心衰(HF)指南推荐ST2作为心肌纤维化的标志物，可以预测HF患者的入院和死亡几率。在2018年中国心力衰竭诊断和治疗指南中明确指出，ST2有助于心力衰竭患者的危险分层和预后评估，多项生物标志物联合使用可能是未来的发展方向。在2020年心力衰竭生物标志物中国专家共识中提出，ST2对急性失代偿性心衰的诊断有重要的辅助作用，具有较高的阴性预测值(Ⅱa类推荐)。ST2可作为心衰患者预后评估的参考，重复测量出现动态升高者提示预后差(Ⅱa类推荐)。
[0005]除了心脏疾病，ST2还被证明在病毒感染性疾病、脓毒血症中和患者病情严重程度呈正相关，可作为判断重度感染患者疾病严重程度的一个生物标志物。因此开发一种简便快速准确的ST2检测方法非常重要。
[0006]最早被批准用于临床检测ST2的方法是酶联免疫吸附法(ELISA)，但是ELISA方法存在着检测时间长、操作繁琐、灵敏度较低等缺点。
[0007]目前，ST2检测的磁微粒化学发光法发展迅速(专利公开号CN110208549A、CN110208549A、CN114371292 A、CN112710841A)等，该方法利用了磁性微粒在磁场中可以迅速分离的特点，将免疫反应产物和其他杂质分开，结合化学发光技术的高灵敏性来示踪免疫复合物，该方法灵敏度和精确度高、检测范围宽，但仍存在着检测时间较长、需要专业人员操作、试剂成本高、专用仪器价格昂贵、难以实现现场检测等缺点。
[0008]基于对疑似心衰或重症感染患者紧急入院及慢性心衰患者诊断及健康管理的需要，ST2的快速定量检测尤为重要。免疫层析技术是将抗原抗体的特异性反应与层析技术结合在一起的免疫检测技术，具有操作简单、方便，不需要特殊仪器和专业人员操作等优点，特别符合即时检测、床边检测的要求。
[0009]免疫层析技术最经典的是基于胶体金的层析方法。但胶体金方法难以精确定量，精密度和重复性相对较差，灵敏度较低，检测结果易受外界环境影响。近年来发展起来的荧光免疫层析(CN114167052A，CN108931636A)相比较胶体金免疫层析检测灵敏度更高，可以实现定量检测，但是荧光免疫层析需要激发装置和光检测装置，对设备要求较高，试剂制备较复杂，检测结果难以保存。
[0010]磁定量免疫层析，是将磁性微粒作为一种新型示踪物和层析技术相结合。采用超顺磁性微粒代替胶体金颗粒，在磁性微粒表面偶联生物活性分子如抗原或抗体形成免疫磁珠，免疫磁珠与待检标本中的对应物特异性结合，随液体在硝酸纤维素膜上层析，并被膜上包被的抗原或抗体所捕获，形成肉眼可见的颜色条带，实现定性检测；还可以通过测量捕获的磁微粒的磁信号强度来判断待测物的浓度。与荧光免疫层析相比，该技术可定性可定量，定量检测时相较荧光层析仅能检测到层析膜表层的荧光信号相比，可检测层析膜全层的磁信号，因而具备高灵敏度，并且，磁性微粒较荧光分子更稳定，试剂和检测结果易保存。
[0011]综上所述,目前市场上主要的ST2检测方法中，磁微粒化学发光法设备及试剂成本高，检测时间较长，难以满足即时检验的要求；荧光免疫层析试剂难保存，检测必须借助荧光检测仪，且仪器仅能测到膜表面的信号，灵敏度受影响；而本专利技术提出的磁微粒免疫层析方法，试剂和检测结果易保存；定性检测时不需要借助仪器设备，定量检测时通过磁定量检测仪可实现准确定量，灵敏度高，可以弥补现有技术的不足，特别适合即时检验的要求。

技术实现思路

[0012]为克服现有技术的缺点和不足，本专利技术的目的在于提供一种磁定量免疫层析的检测试纸条及其制备方法与应用。
[0013]本专利技术是这样实现的，一种磁定量免疫层析的检测试纸条的制备方法，所述检测试纸条包括PVC底板，在PVC底板且沿层析方向上依次设有首尾搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素反应膜以及吸水滤纸；在层析方向上，所述硝酸纤维素反应膜上依次设为检测线、质控线，该制备方法包括以下步骤：
[0014](1)将携带ST2单克隆抗体的免疫磁珠悬浮液滴加在预处理过的玻璃纤维素膜，干燥、低温保存，得到结合垫；
[0015](2)将玻璃纤维膜在样品垫处理液中浸泡处理，干燥，得到样品垫；
[0016](3)将设定浓度的又一ST2单克隆抗体用喷膜仪在所述硝酸纤维素膜的检测线处划线，以及将设定浓度的羊抗小鼠二抗在质控线处划线，得到预包被的硝酸纤维素反应膜；
[0017](4)沿层析方向上，将样品垫、结合垫、硝酸纤维素反应膜以及吸水滤纸依次粘附在PVC底板上。
[0018]优选地，在步骤(1)中，所述免疫磁珠悬浮液的制备过程为：
[0019]取2mg、粒径200nm的羧基磁粒用0.5M、pH4.5 MES缓冲液清洗后重悬于0.5mL、0.1M、pH5.5 MES缓冲液中，涡旋混匀；
[0020]加入300μg EDC涡旋混匀，室温反应30min后，用0.005M、pH9.0的硼酸盐缓冲液洗涤2次，重悬于200μL含80μg抗ST2单克隆抗体的硼酸盐缓冲液中，4℃下孵育过夜；
[0021]反应后用pH9.0硼酸盐缓冲液洗涤两次，加入BSA至终浓度5％，室温封闭1h，用重悬液重悬，得到免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁定量免疫层析的检测试纸条的制备方法，所述检测试纸条包括PVC底板，在PVC底板且沿层析方向上依次设有首尾搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素反应膜以及吸水滤纸；在层析方向上，所述硝酸纤维素反应膜上依次设为检测线、质控线，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：(1)将携带ST2单克隆抗体的免疫磁珠悬浮液滴加在预处理过的玻璃纤维素膜，干燥、低温保存，得到结合垫；(2)将玻璃纤维膜在样品垫处理液中浸泡处理，干燥，得到样品垫；(3)将设定浓度的又一ST2单克隆抗体用喷膜仪在所述硝酸纤维素膜的检测线处划线，以及将设定浓度的羊抗小鼠二抗在质控线处划线，得到预包被的硝酸纤维素反应膜；(4)沿层析方向上，将样品垫、结合垫、硝酸纤维素反应膜以及吸水滤纸依次粘附在PVC底板上。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述免疫磁珠悬浮液的制备过程为：取2mg、粒径200nm的羧基磁粒用0.5M、pH4.5 MES缓冲液清洗后重悬于0.5mL、0.1M、pH5.5 MES缓冲液中，涡旋混匀；加入300μg EDC涡旋混匀，室温反应30min后，用0.005M、pH9.0的硼酸盐缓冲液洗涤2次，重悬于200μL含80μg抗ST2单克隆抗体的硼酸盐缓冲液中，4℃下孵育过夜；反应后用p...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘蓓，孙静，杨瑜珑，王婧扬，熊昌欢，樊萌萌，康靖，
申请(专利权)人：西安医学院，
类型：发明
国别省市：