植物病原细菌基因组编辑工具的开发及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物病原细菌基因组编辑工具的开发及应用。本发明专利技术提供了DNA分子Ⅰ，其中具有元件甲、元件乙和元件丙；元件甲为用于表达ligD基因和Ku基因的表达盒；元件乙为用于表达Cas12a基因的表达盒；所述元件丙中具有插入位点以及用于编码crRNA骨架的DNA区段；所述插入位点供用于编码crRNA的特异结合区的DNA区段插入；crRNA的特异结合区特异性结合靶标序列。本发明专利技术通过将ligD/Ku蛋白与CRISPR/FnCas12a系统融合构建一套适用于植物病原细菌的基因组编辑工具，该方法为植物病原细菌的遗传学分析工具箱增添新的利器，对研究寄主植物和病原菌的分子互作机理研究具有重大价值。物和病原菌的分子互作机理研究具有重大价值。

【技术实现步骤摘要】
植物病原细菌基因组编辑工具的开发及应用


[0001]本专利技术属于基因编辑领域，涉及一种植物病原细菌基因组编辑工具的开发及应用。

技术介绍

[0002]细菌中最常用的功能基因组学方法是转座子测序(Tn
‑
Seq)。转座子是一段特殊的DNA序列，通过转座酶催化将其插入到目标菌株的基因组DNA上，应用广泛的有Tn3、Tn5、Tn10、Tn7、Mariner类转座子等，主要应用于芽孢杆菌、假单胞菌、黄单胞菌、劳尔氏菌等细菌中。一般而言，转座子插入含有筛选标记，并且因为携带有转座子片段容易对插入位点进行鉴定。但是，转座子的插入是随机的，可能是单拷贝插入，也可能是多拷贝插入，这就导致在相同的遗传背景下，表型的改变不能确定是由基因插入突变引起的。对于基因家族的基因，由于基因功能的冗余性，单个基因的敲除并不一定就能知悉该基因的功能。对某些必需基因，敲除失活会造成细胞致死，也不能利用该技术研究其基因功能。
[0003]基于CRISPR技术的基因组编辑技术的出现改变了生命科学研究的发展速度。CRISPR/Cas技术利用人工核酸酶在生物基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA分子，命名为DNA分子Ⅰ，其中具有元件甲、元件乙和元件丙；所述元件甲为用于表达ligD基因和Ku基因的表达盒；所述元件乙为用于表达Cas12a基因的表达盒；所述元件丙中具有插入位点以及用于编码crRNA骨架的DNA区段；所述插入位点供用于编码crRNA的特异结合区的DNA区段插入；crRNA的特异结合区特异性结合靶标序列；用于编码crRNA的特异结合区的DNA区段插入所述元件丙中的所述插入位点后，与编码crRNA骨架的DNA区段连接，从而表达靶向所述靶标序列的crRNA。2.一种载体，命名为载体Ⅰ，其中具有权利要求1所述DNA分子Ⅰ。3.一种DNA分子，命名为DNA分子Ⅱ，其中具有元件甲、元件乙和元件丁；所述元件甲为用于表达ligD基因和Ku基因的表达盒；所述元件乙为用于表达Cas12a基因的表达盒；所述元件丁为用于表达crRNA的表达盒。4.一种载体，命名为载体Ⅱ，其中具有权利要求3所述DNA分子Ⅱ。5.权利要求2或4所述载体在对细菌进行基因编辑中的应用。6.权利要求2或4所述载体在对细菌进行功能基因组研究中的应用。7.一种试剂盒，包括权利要求1或3所述DNA分子或权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：周焕斌，严芳，王敬文，张素杰，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：