一种高灵敏度的数字化酶联免疫吸附分析样品的制备方法技术

本发明专利技术公开了高灵敏度的数字化酶联免疫吸附分析样品的制备方法。其制备与检测包括磁性微珠表面包被捕获抗体、非磁微粒表面固定检测抗体和报告物酶分子、捕获抗体

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏度的数字化酶联免疫吸附分析样品的制备方法


[0001]本专利技术属于免疫分析领域，是一种酶联免疫测定技术，具体涉及一种高灵敏度的数字化酶联免疫吸附分析样品的制备方法，该样品是一种双抗体夹心dELISA样品(Digital Enzyme
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linked immunosorbent assay，dELISA)，以及涉及该样品的制备与检测方法。

技术介绍

[0002]单分子免疫阵列技术，又称“数字ELISA”，是近年来新开发的一种数字免疫分析方法，将单分子计数用于蛋白质生物标记物的检测。该方法可测量各种不同基质(血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞提取物等)中的蛋白质，检测限可达飞摩尔(fM)数量级，灵敏度较传统ELISA提高约1000倍。目前，该技术在一些重大传染病，如新冠肺炎、结核病、艾滋病、朊病毒病诊断中的优势逐渐凸显。Rissin等人在2010年提出了数字化ELISA(dELISA)方法(Rissin et al.,Single
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molecule enzyme
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linked imm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏度的数字化酶联免疫吸附分析样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将捕获抗体与磁性微珠结合，使捕获抗体包被于磁性微珠表面，形成捕获抗体
x
‑
磁性微珠复合物，x为一个磁性微珠上结合的捕获抗体的数量；2)使检测抗体和报告物酶分子结合于非磁微粒表面，形成检测抗体
n
‑
非磁微粒
‑
报告物酶分子
m
复合物，n和m分别表示一个非磁微粒上结合检测抗体和报告物酶分子的数量；3)通过孵育将步骤1)制备的捕获抗体
x
‑
磁性微珠复合物、步骤2)制备检测抗体
n
‑
非磁微粒
‑
报告物酶分子
m
复合物和待测抗原标志物结合，形成“捕获抗体
‑
标志物
‑
检测抗体”结构的双抗体夹心复合物，在磁力架辅助下进行孵育洗涤，将未结合的非磁微粒洗去；4)将步骤3)中的双抗体夹心复合物装载到微米坑阵列中，使得每个微米坑中只容纳一个双抗体夹心复合物，再加入底物，得到所述数字化酶联免疫吸附分析样品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述捕获抗体与磁性微珠数量的比值为10～10000，优选100。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述检测抗体与非磁微粒数量的比值为10～10000，所述报告物酶分子与非磁微粒数量的比值为10～10000。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述报告物酶分子为辣根过氧化物酶、β
‑
半乳糖苷酶、碱性磷酸酶中的一种；步骤2)中所述非磁微粒与报告物酶分子以及检测抗体采用a)
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c)中任一种顺序结合：a)非磁微粒先与检测抗体结合再与报告酶分子结合；b)非磁微粒先与报告酶分子结合再与检测抗体结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈夏敏，窦晨月，杨文豪，王志民，崔玉峰，
申请(专利权)人：上海北昂医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：