一种非诊断目的基于MoS2-Fc@PANi纳米复合材料检测GP73的方法技术

一种非诊断目的基于二硫化钼

【技术实现步骤摘要】
一种非诊断目的基于MoS2‑
Fc@PANi纳米复合材料检测GP73的方法


[0001]本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种基于纳米复合材料构建夹心型适配体传感器检测GP73的方法。

技术介绍

[0002]原发性肝细胞癌(HCC)是全球五大癌症之一，对生命健康威胁巨大。高尔基体蛋白73(GP73)是一种新型肝癌标志物，检测方法主要有放射免疫分析法、荧光免疫分析法、电化学免疫传感器、压电免疫传感器等。公开号CN 111413502A的专利技术专利，涉及一种采用商业ELISA试剂盒血清检测GP73的方法；公开号CN 113945713 A的专利技术专利，涉及一种利用新型生物芯片检测GP73等肿瘤标记物的方法，满足了大规模样本检测的需求。但是现有技术还存在GP73的检测灵敏度低、操作复杂、成本高等缺点。因此，需要一种快速灵敏、操作简单的GP73检测方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种基于二硫化钼
‑
二茂铁@聚苯胺(MoS2‑
Fc@PANi)的纳米复合材料，构建夹心型适配体传感器，实现GP73检测，最低检测限为0.001ng/mL。
[0004]为解决该技术问题，利用酰胺键、π
‑
π键吸附作用，成功合成具有高比表面积、高电导率的纳米复合材料，并通过π
‑
π键作用的方式将纳米复合材料与GP73适配体(GP73
Apt
)结合，形成可与GP73特异性结合的MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针；采用电沉积技术将金纳米粒子(Au NPs)修饰在丝网印刷电极(SPE)表面；通过静电吸附作用将GP73
Apt
负载在修饰Au NPs的电极表面，适配体以单链形式形成不稳定的空间结构而存在电极表面；将GP73和MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针孵育在上述电极表面，由于GP73能够与GP73适配体特异性结合，形成稳定的空间结构，有序排列在电极表面，构建了MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
/GP73/GP73
Apt
/AuNPs/SPE夹心型电化学适配体传感器。通过差分脉冲伏安法(DPV)记录MoS2‑
Fc@PANi中Fc的氧化还原峰电流变化值，从而实现对GP73的检测。
[0005]本专利技术按照以下步骤进行：
[0006]步骤1：MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针的制备
[0007](1)二茂铁@聚苯胺(Fc@PANi)的制备：将Fc和PANi加入到乙酸(CH3COOH)溶液中混合，再加入1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)和N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)，搅拌、离心，清洗，得到Fc@PANi固体；
[0008]作为改进，还包括以下步骤：
[0009](2)二硫化钼
‑
二茂铁@聚苯胺(MoS2‑
Fc@PANi)的制备：二硫化钼(MoS2)加水超声破碎，制备出MoS2悬浊液，再加入Fc@PANi，搅拌，离心，清洗，得到MoS2‑
Fc@PANi溶液；
[0010](3)二硫化钼
‑
二茂铁@聚苯胺
‑
GP73适配体(MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
)信号探针的制
备：将GP73适配体(GP73
Apt
)溶液和MoS2‑
Fc@PANi溶液超声均匀混合，孵育、离心、清洗，得MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针。
[0011]步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建
[0012](1)将丝网印刷电极(SPE)置于稀硫酸(H2SO4)溶液中活化；
[0013](2)将活化后的SPE置于含有氯金酸(HAuCl4)的溶液中，进行电沉积，得AuNPs/SPE电极；
[0014](3)将GP73
Apt
滴加在AuNPs/SPE的表面，孵育、洗涤、吹干，得GP73
Apt
/AuNPs/SPE；
[0015]步骤3：GP73工作曲线的绘制
[0016](1)将不同浓度的GP73标准液滴加在步骤2中得到的电化学生物传感界面，孵育、清洗、吹干，得GP73/GP73
Apt
/AuNPs/SPE；
[0017](2)在GP73/GP73
Apt
/Au NPs/SPE上滴加MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
溶液，孵育、清洗、吹干，得到MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
/GP73/GP73
Apt
/Au NPs/SPE。然后将工作电极浸入磷酸缓冲盐(PBS)溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录传感器的响应电流。
[0018](3)分别对不同浓度的GP73进行检测，记录峰值电流；根据传感器的电流响应值与GP73浓度的关系，绘制GP73的工作曲线，计算出该方法的最低检测限。
[0019]步骤4：实际血清样本中GP73的检测
[0020](1)在步骤2得到的GP73
Apt
/Au NPs/SPE传感界面，滴加待测实际样品，再滴加MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针，孵育、洗涤晾干，得到工作电极。将制备成功的工作电极浸入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录传感器的响应电流值。
[0021](2)根据步骤3所得到的工作曲线，计算得到所述待测实际样品中GP73的浓度。
[0022]作为优选：
[0023]步骤1所述GP73
Apt
的DNA序列为5
′‑
NH2‑
C6‑
GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG
‑3′
；
[0024]步骤2所述用于沉积金的HAuCl4溶液浓度为0.1％；
[0025]步骤3和步骤4中所述电极的孵育温度为25℃，孵育时间为40min，PBS缓冲液pH值为7.0，信号探针浓度为0.5mg/mL时，传感器的响应电流最大，电流值可达到15.7μA。
[0026]其中，步骤1提供了一种具有大比表面积、高电导率、高电化学活性的MoS2‑
Fc@PANi纳米复合材料，与GP73
Apt
通过π
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非诊断目的基于二硫化钼
‑
二茂铁@聚苯胺MoS2‑
Fc@PANi纳米复合材料检测GP73的方法，按以下步骤进行：步骤1：二硫化钼
‑
二茂铁@聚苯胺
‑
GP73适配体MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针的制备(1)二茂铁@聚苯胺Fc@PANi的制备：二茂铁Fc和聚苯胺PANi加入到乙酸CH3COOH溶液中，加入1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC和N
‑
羟基琥珀酰亚胺NHS，搅拌、离心、清洗，得Fc@PANi固体；(2)二硫化钼
‑
二茂铁@聚苯胺MoS2‑
Fc@PANi的制备：二硫化钼MoS2倒入纯水中破碎，加入Fc@PANi固体，搅拌，离心，清洗，得MoS2‑
Fc@PANi溶液；(3)MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt
信号探针的制备：将GP73适配体GP73
Apt
溶液和MoS2‑
Fc@PANi溶液均匀混合，孵育、离心、清洗，得MoS2‑
Fc@PANi
‑
GP73
Apt 信号探针；步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建(1)将丝网印刷电极SPE置于稀H2SO4溶液中活化；(2)将活化后的SPE置于含有HAuCl4的溶液中，进行电沉积，得AuNPs/SPE；(3)将GP73
Apt
滴加在AuNPs/SPE表面，孵育、洗涤、吹干，得GP73
Apt
/AuNPs/SPE；步骤3：GP73工作曲线的绘制(1)将GP73标准液滴加到GP7...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂银，许沛鸿，王博，李江涛，周治德，谭晓红，
申请(专利权)人：广东石油化工学院，
类型：发明
国别省市：