一种转录调控因子LysG的突变体及其应用制造技术

本公开属于基因工程与分子生物学领域，涉及一种转录调控因子LysG的突变体、多核苷酸、核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞、生物传感器及用途，调控目标基因表达的方法、生产碱性氨基酸的方法、碱性氨基酸高产菌株和碱性氨基酸合成相关蛋白或蛋白编码基因的筛选方法。本公开中转录调控因子LysG的突变体，为转录调控因子LysG对Linker Helix区突变后的突变体，突变体具有提高的对碱性氨基酸诱导响应的强度，能够实现对碱性氨基酸高产菌株及与碱性氨基酸合成相关的蛋白或其编码基因的高灵敏度检测，对于碱性氨基酸高产菌株和合成途径相关蛋白的高通量筛选以及碱性氨基酸高产菌株构建中关键酶的表达调控具有重要意义。株构建中关键酶的表达调控具有重要意义。株构建中关键酶的表达调控具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
biology,13,R40.
[0010][4]Kortmann,M.,Mack,C.,Baumgart,M.and Bott,M.(2019)Pyruvate carboxylase variants enabling improved lysine production from glucose identified by biosensor
‑
based high
‑
throughput fluorescence
‑
activated cell sorting screening.ACS Synth.Biol.,8,274
‑
281.
[0011][5]Schendzielorz,G.,et al.(2014)Taking control over control:use of product sensing in single cells to remove flux control at key enzymes in biosynthesis pathways.ACS Synth.Bio本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转录调控因子LysG的突变体，所述突变体具有位于Linker Helix区的一个或多个突变的氨基酸；并且，与野生型的转录调控因子LysG相比，所述突变体具有提高的碱性氨基酸响应强度。2.根据权利要求1所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体选自如下(i)
‑
(iii)组成的组中的任一项：(i)包含如SEQ ID NO：1所示序列的多肽的突变体，所述突变体在对应SEQ ID NO：1所示序列的第57
‑
89位的一个或多个位置处具有突变的氨基酸；(ii)与(i)所示的氨基酸序列具有至少90％，可选至少95％，优选至少97％，更优选至少98％，最优选至少99％的序列同一性的多肽；(iii)如(i)或(ii)所示氨基酸序列的多肽在N端和C端的至少一端添加或缺失一个或多个氨基酸的多肽。3.根据权利要求1或2所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO：1所示序列，具有如下一个或多个位置处的突变的氨基酸：第58位、第59位、第61位、第64位、第65位、第66位、第67位、第70位、第73位、第75位、第76位、第77位、第78位、第79位、第80位、第83位、第84位、第85位、第86位、第87位、第88位、第89位；优选地，所述突变体在对应SEQ ID NO：1所示序列的至少1个、至少2个或至少3个位置处具有突变的氨基酸。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO：1所示序列，具有如下(a1)
‑
(a
22
)组成的组中任意一个位置处的突变的氨基酸，或任意两个以上的位置处的突变的氨基酸：(a1)E58V；(a2)A59S；(a3)E61K或E61V；(a4)V64A；(a5)Q65R；(a6)A66T；(a7)A67T或A67S；(a8)A70I；(a9)L73I；(a
10
)A75G；(a
11
)E76D、E76C、E76K或E76W；(a
12
)T77A；(a
13
)K78E或K78R；(a
14
)A79V、A79T或A79R；(a
15
)Q80R或Q80K；(a
16
)G83R；(a
17
)R84H；(a
18
)L85P、L85A、L85D、L85G、L85A、L85S、L85T或L85Y；
(a
19
)A86R或A86D；(a
20
)E87G、E87D、E87R、E87N、E87H、E87K或E87S；(a
21
)I88V、I88T、I88A、I88N、I88G、I88H、I88K、I88P或I88S；(a
22
)P89Q。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO：1所示序列，具有如下所示(m1)
‑
(m
51
)中任意一种所示的突变的氨基酸：(m1)E58V；(m2)A59S和Q80R；(m3)E61V；(m4)E61K和K78E；(m5)V64A和E87D；(m6)Q65R；(m7)A66T；(m8)A67T和A79V(m9)A67T；(m
10
)A67S和T77A；(m
11
)M70I；(m
12
)L73I；(m
13
)L73V；(m
14
)A75G；(m
15
)E76D；(m
16
)E76C；(m
17
)E76K；(m
18
)E76W(m
19
)T77A，K78R和G83R；(m
20
)T77A；(m
21
)A79V；(m
22
)A79R；(m
23
)A79T和G83R；(m
24
)Q80R；(m
25
)Q80K和R84H；(m
26
)L85P；(m
27
)L85A；(m
28
)L85D；(m
29
)L85G；(m
30
)L85M；(m
31
)L85S；(m
32
)L85T；(m
33
)L85Y；(m
34
)A86R；(m
35
)A86D；(m
36
)E87G；(m
37
)E87R；(m
38
)E87N；(m
39
)E87H；(m
40
)E87K；(m...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑平，蒲伟，陈久洲，孙际宾，蔡柠匀，王钰，周文娟，马延和，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：