一种转录调控因子LysG的突变体及其应用制造技术

本公开属于基因工程与分子生物学领域，涉及一种转录调控因子LysG的突变体、编码突变体的多核苷酸、核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞、生物传感器及用途，调控目标基因表达的方法、生产碱性氨基酸的方法、碱性氨基酸高产菌株和碱性氨基酸合成相关蛋白或蛋白编码基因的筛选方法。本公开中转录调控因子LysG的突变体，为转录调控因子LysG对EBD结构域突变后的突变体，突变体具有提高的对碱性氨基酸诱导响应的强度，能够实现对碱性氨基酸高产菌株及与碱性氨基酸合成相关的蛋白或其编码基因的高灵敏度检测，对于碱性氨基酸高产菌株和合成途径相关蛋白的高通量筛选以及碱性氨基酸高产菌株构建中关键酶的表达调控具有重要意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
genomic variants of bacterial metabolite producers at the single
‑
cell level.Genome biology,13,R40.
[0010][4]Kortmann,M.,Mack,C.,Baumgart,M.and Bott,M.(2019)Pyruvate carboxylase variants enabling improved lysine production from glucose identified by biosensor
‑
based high
‑
throughput fluorescence
‑
activated cell sorting screening.ACS Synth.Biol.,8,274
‑
281.
[0011][5]Schendzielorz,G.,et al.(2014)Taking control over control:use of product sensing本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转录调控因子LysG的突变体，所述突变体具有位于EBD结构域的一个或多个突变的氨基酸；并且，与野生型的转录调控因子LysG相比，所述突变体具有提高的碱性氨基酸响应强度。2.根据权利要求1所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体选自如下(i)
‑
(iii)组成的组中的任一项：(i)包含如SEQ ID NO：1所示序列的多肽的突变体，所述突变体在对应SEQ ID NO：1所示序列的第111
‑
270位的一个或多个位置处具有突变的氨基酸；(ii)与(i)所示的氨基酸序列具有至少90％，可选至少95％，优选至少97％，更优选至少98％，最优选至少99％的序列同一性的多肽；(iii)如(i)或(ii)所示氨基酸序列的多肽在N端和C端的至少一端添加或缺失一个或多个氨基酸的多肽。3.根据权利要求1或2所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO：1所示序列，具有如下一个或多个位置处的突变的氨基酸：第143位、第146位、第125位、第133位、第136位、第141位、第152位、第165位、第169位、第177位、第194位、第198位、第209位、第212位、第241位、第248位、第255位、第259位、第260位、第266位、第269位、第270位、第111位、第115位；优选地，所述突变体在对应SEQ ID NO：1所示序列的至少1个、至少2个或至少3个位置处具有突变的氨基酸。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO：1所示序列，具有如下所示的一种或多种的突变的氨基酸：R143C、N146D、E125V、R133Q、D136N、V141I、E152G、A165T、L169M、G177E、V194A、R198H、G209E、R212H、A241V、E248G、A255S、I259M、P260S、W266C、E269G、S270P、A111P、G115R。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO：1所示序列，具有如下(m1)
‑
(m
20
)中任一种所示的突变的氨基酸：(m1)R143C；(m2)N146D；(m3)E248G；(m4)E125V和A165T；(m5)G115R；(m6)S270P；(m7)E125V和G209E；(m8)V194A；(m9)R212H；(m
10
)E152G和A241V；(m
11
)V141I；(m
12
)R198H；(m
13
)A255S和W266C；(m
14
)E248G、P260S和E269G；(m
15
)I259M；
(m
16
)A111P；(m
17
)D136N和L169M；(m
18
)R143C和G177E；(m
19
)R133Q；(m
20
)D136N和L169M。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的转录调控因子LysG的突变体，其中，所述突变体与SEQ ID NO：1所示序列的多肽相比，具有1.2
‑
3.8倍以上的提高的碱性氨基酸响应强度。7.一种分离的多核苷酸，其中，所述多核苷酸编码如权利要求1
‑
6任一项所述的转录调控因子LysG的突变体。8.一种核酸构建体，其中，所述核酸构建体包含如权利要求7所述的多核苷酸，所述多核苷酸与LysG调控型启动子可操作地连接，所述LysG调控型启动子指导多肽的表达。9.一种重组表达载体，其中，所述重组表达载体包含如权利要求7所述的多核苷酸，或如权利要求8所述的核酸构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑平，陈久洲，孙际宾，蒲伟，蔡柠匀，周文娟，王钰，马延和，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：