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一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法技术

技术编号:36760288 阅读:23 留言:0更新日期:2023-03-04 10:54
本发明专利技术公开了一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法,涉及医疗技术领域,包括以下步骤:步骤一:挑选健康的5天龄SPF级SD大鼠一只,通过颈椎脱臼的方式处死,然后将处死的大鼠置于75%酒精中浸泡30秒,通过本高效分离提取大鼠软骨细胞的方法进行实验中,我们发现软骨细胞提取过程中,各步骤中的血清浓度对于最后得到的软骨细胞数量有明显影响,既往的提取方法在II型胶原酶消化时不加入血清,从而导致漫长的消化时间中许多软骨细胞发生凋亡,在II型胶原酶消化过程中加入血清,有助于提供营养,促进软骨细胞存活,同时在接种时使用高浓度血清的培养基,能够有效促进软骨细胞贴壁和增殖,从而高效获得大量的软骨细胞。而高效获得大量的软骨细胞。而高效获得大量的软骨细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法


[0001]本专利技术涉及医疗
,具体为一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法。

技术介绍

[0002]软骨细胞位于软骨中,主要作用是合成某些胶原蛋白以及非胶原的高分子细胞外基质,包括:II型胶原蛋白、蛋白多糖、链接蛋白、IX型胶原蛋白和XI型胶原蛋白。
[0003]调控软骨细胞的增殖和分化,对于协调脊椎动物的骨骼发育至关重要,软骨细胞可以产生大量的肽生长因子和细胞因子,并与之发生反应,例如:胰岛素样生长因子-1和白介素-1,在研究软骨的再生和修复、细胞因子和生长因子对软骨的作用、特定基因对关节炎的调控作用及关节炎的病理生理过程中,软骨细胞的培养是非常重要的体外模型。
[0004]目前已经有大量的研究人员进行了小鼠/大鼠软骨细胞的培养和药理学特性方面的研究,现有的研究多采用0.25%胰酶37度水浴消化1个小时,再用II型胶原酶37度消化5个小时左右,其缺点在于,绝大多数的酶在37度的条件下都会发生剧烈的消化作用,因此,一方面可以加快消化的速度,但是另一方面,又会对细胞造成极大的伤害,尤其是胰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤一:挑选健康的5天龄SPF级SD大鼠一只,通过颈椎脱臼的方式处死,然后将处死的大鼠置于75%酒精中浸泡30秒;步骤二:取出步骤一中处理后浸泡的大鼠,将其自后肢膝关节外侧胫骨平台体表投影处沿股骨向上切开表皮,用显微剪离断关节腔附近附着的肌肉,暴露大鼠双侧软骨;步骤三:将步骤二处理后的大鼠沿骺线剪断胫骨和股骨,分离得到软骨组织;步骤四:使用显微剪初步清理软骨组织表面软组织;步骤五:将清理后的软骨组织转移至4毫升0.25%EDTA

胰酶中,使用37℃恒温摇床消化其余软组织15分钟;步骤六:将组织与胰酶的混合物使用离心机进行离心,弃上清得到消化后的软骨组织;步骤七:用手术刀切碎软骨组织至细沙状,转移至5毫升含澳洲胎牛血清的0.22%II型胶原酶溶液中,使用37℃恒温摇床消化细胞间胶原2.5小时;步骤八:将消化后的溶液经70μm过滤筛进行过滤后使用离心机进行离心;步骤九:离心机进行离心后,弃去离心后的上清,用F12

DMEM培养基重悬后使用离心机进行离心;步骤十:弃去离心后的上清,用含有10%澳洲胎牛血清的F12

DMEM培养基重悬细胞,接种于培养皿中,然后置于细胞敷箱敷育2天后换液。2.根据权利要求1所述的一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法,其特征在于:所述步骤二中的切口止点为股骨头体表投影处。3.根据权利要求1所述的一种高效分离提取大鼠软骨细胞的方法,其特征在于:所述步骤四中的清理方法为显微剪紧贴软骨组织表面,平行于...

【专利技术属性】
技术研发人员:覃汉俊胡新佳肖庭辉
申请(专利权)人:覃汉俊
类型:发明
国别省市:

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