一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标间相互作用的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标间相互作用的方法，通过在室温下用盐酸羟胺还原硝酸银的方法制备高活性的纳米银胶颗粒，并将其作为增强试剂与样品溶液混合，通过分析核酸适配体和小分子靶标结合前后的表面增强拉曼光谱信号变化，辨别靶标结合对核酸适配体空间结构的影响，本发明专利技术具有分析速度快、灵敏度高的特点，为核酸适配体的筛选、设计和结构优化提供了新策略、新思路。新思路。新思路。

【技术实现步骤摘要】
一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标间相互作用的方法


[0001]本专利技术涉及拉曼分析
和相互作用检测
，具体涉及一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标相互作用的方法。

技术介绍

[0002]核酸适配体作为一类能够特异性识别靶标的人工合成单链核苷酸分子，可与纳米材料或微流控技术等结合，被广泛应用于不同靶标的检测和递送系统。然而，由于其特异性识别靶标的机制尚不清楚，目前真正能够应用于生物分析和临床的核酸适配体数量非常有限，其分析应用多停留在方法学研究阶段。
[0003]日前，用来研究分子间相互作用的传统分析方法有核磁共振法、X
‑
射线晶体衍射法等，虽然可以准确地区分结合前后的差异，但是存在样品量大、成本高、分析时间长等缺点。拉曼光谱法可以很好的展现生物分子固有的指纹信息，基于金属的粗糙表面，表面等离体共振效应的表面增强拉曼光谱（SERS）具有超高灵敏度，快速检测和表征分子结构的特点，已被广泛应用于生物分析，法医鉴定，食品检测等领域。然而，拉曼技术会受到荧光干扰，在检测低含量的生物分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标相互作用的方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）增强试剂纳米银胶颗粒的制备：将硝酸银溶液快速加入盐酸羟胺和氢氧化钠的混合溶液中，在室温下磁力搅拌混合均匀，得到灰绿色的混合溶液，并通过离心、去除上清液的方法进行浓缩得到纳米银胶颗粒； （2）纳米银胶颗粒
‑
小分子溶液的制备：将步骤（1）得到的浓缩后的纳米银胶颗粒与小分子溶液混合并加入聚集剂硫酸镁溶液，吹打混匀后加入去离子水，得到最终体积为300 μL的纳米银胶颗粒
‑
小分子溶液；（3）纳米银胶颗粒
‑
核酸适配体溶液的制备：将步骤（1）得到的纳米银胶颗粒与适配体溶液混合并加入聚集剂硫酸镁溶液，吹打混匀后加入去离子水，得到最终体积为300 μL 的纳米银胶颗粒
‑
核酸适配体溶液； （4）纳米银胶颗粒
‑
核酸适配体与小分子混合溶液的制备：将步骤（1）得到的纳米银胶颗粒与适配体溶液混合并加入聚集剂硫酸镁溶液，吹打混匀后向溶液中加入小分子溶液并再次加入聚集剂硫酸镁溶液，经吹打混匀后加入去离子水，最终体积为300 μL，混合孵育30 min，得到纳米银胶颗粒
‑
核酸适配体与小分子混合溶液； （5）拉曼光谱的检测：采用拉曼光谱仪分别对骤（2）至步骤（4）配置的混合溶液进行拉曼图谱信息采集，激发波长为785 nm，积分时间为30 s，激光功率为100 mW, 仪器分辨率为
±
2 cm
‑1，扫描次数为3次，所有SERS图谱的数据，使用Labspec6软件进一步处理，选取波段为400
‑
1800 cm
‑
1 ； （6）根据步骤（5）得到的核酸适配体表面增强拉曼光谱图，选取特征吸收峰，对比结合前后特征峰的峰形状、峰强度、位置、是否一致。2.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标间相互作用的方法，其特征在于：所述步骤（1）中灰绿色混合溶液中硝酸银的最终浓度为1.0
×
10
‑
3 M，盐酸羟胺的最终浓度为1.5
×
10
‑
3 M，氢氧化钠的最终浓度为3.0
×
10
‑
3 M；所述步骤（1）中溶液浓缩的倍数为100倍。3.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱测定核酸适配体与小分子靶标间相互作用的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李卉卉，王爽好，代园丽，王双双，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：