用于PCR的试剂及其制备方法、试剂盒和PCR方法技术

本发明专利技术提供了一种用于PCR的试剂及其制备方法、试剂盒和PCR方法，涉及核酸扩增的技术领域。该用于PCR的试剂中含有酸性橙G、酸性黄23、灿烂绿或乙基紫，且它们在PCR反应体系中的浓度分别为酸性橙G0.00001g/mL～0.0001g/mL；酸性黄0.00003g/mL～0.0003g/mL；灿烂绿0.00001g/mL～0.0001g/mL；或，乙基紫0.00001g/mL～0.0001g/mL。上述着色剂可以赋予不同的PCR组分不同的颜色，且不干扰扩增反应进行，不干扰试剂的冻干与复溶，同时在荧光PCR扩增程序中对扩增信号起增强作用，缓解了现有不同体系的PCR试剂不容易区分的技术问题。题。题。

【技术实现步骤摘要】
用于PCR的试剂及其制备方法、试剂盒和PCR方法


[0001]本专利技术涉及核酸扩增
，尤其是涉及一种用于PCR的试剂及其制备方法、试剂盒和PCR方法。

技术介绍

[0002]实时荧光PCR技术是在PCR反应中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时检测整个PCR进程，使得每个循环变得“可见”的用于扩增DNA或RNA的技术。目前市售的核酸检测试剂盒反应组分主要包括特异性引物及荧光探针、酶、金属阳离子及缓冲体系等，具有生物学活性的生物试剂所占比重较大，这些组分受热不稳定，容易变形失活，且大分子蛋白可能会与其他物质相互反应，试剂盒若采用液体的形式，在运输过程中需要全程冷链运输，低温保存。由于水的存在，反应试剂里的成分比较活跃，处于活跃状态的分子离子容易变性失活。因而伴随着解决诊断试剂的稳定性储存和运输问题，冻干技术在生物医疗诊断试剂行业得到广泛应用。
[0003]冻干技术亦称真空冷冻干燥技术，该技术原理是先将湿物料或溶液在较低的温度下冻结成固态，然后在真空下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使物料脱水的干燥技术。冻干后的试剂生物活性成分基本不变，既能最大限度的保护敏感性成分，又能使试剂在室温或普通冰箱中长期保存。现有核酸产品的冻干试剂均为白色粉状或饼状形态，随着不同病原检测的核酸产品增多，为便于区分不同产品的冻干试剂，或同一产品的不同组分的冻干试剂，通常在外包装或装有冻干试剂的试管上做标示，然而在使用时，外包装一旦去除仍难以识别不同组分冻干试剂；若在试管上做标示，因PCR技术所用试管通常都较小，从而导致标志很微小，肉眼很难识别；且若在试管上进行着色等标记会影响PCR扩增过程中荧光信号的读取。因此，如何改进PCR试剂，使其便于区分不同产品的试剂是目前亟需解决的问题。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种用于PCR的试剂，其中预混有着色剂，缓解了现有不同组分的PCR试剂不容易区分的技术问题。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种用于PCR的试剂盒，试剂盒中包括独立包装的着色剂或预混有着色剂的用于PCR的试剂，方便对不同组分进行区分。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供一种PCR试剂的制备方法。
[0008]本专利技术的第四目的在于提供一种PCR方法。
[0009]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0010]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于PCR的试剂，所述试剂含有着色剂，所述着色剂包括酸性橙G、酸性黄23、灿烂绿或乙基紫；
[0011]所述着色剂在PCR反应体系中的浓度为：
[0012]酸性橙G 0.00001g/mL～0.0001g/mL；
[0013]酸性黄23 0.00003g/mL～0.0003g/mL；
[0014]灿烂绿0.00001g/mL～0.0001g/mL；
[0015]或，乙基紫0.00001g/mL～0.0001g/mL。
[0016]优选地，酸性橙G在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL；
[0017]优选地，酸性黄23在PCR反应体系中的浓度为0.00003g/mL、0.00015g/mL或0.0003g/mL；
[0018]优选地，灿烂绿在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL；
[0019]优选地，乙基紫在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL。
[0020]优选地，所述试剂包括PCR反应体系、引物试剂、探针试剂、酶试剂、缓冲体系试剂和冻干保护剂中的一种或多种；
[0021]优选地，所述用于PCR的试剂为冻干试剂；
[0022]优选地，所述用于PCR的试剂为用于荧光PCR的试剂；
[0023]优选地，所述用于PCR的试剂为用于荧光PCR的冻干试剂。
[0024]优选地，所述试剂为用于荧光PCR的冻干反应体系，由所述着色剂、PCR预混液、冻干保护剂和引物；以及探针和/或荧光染料冻干得到；
[0025]优选地，所述PCR预混液选自5
×
HyperstartPremix
‑
UNG或5
×
SuperstartPremix
‑
UNG；
[0026]优选地，所述探针带有CY5荧光报告基团或FAM荧光报告基团；
[0027]优选地，所述荧光染料包括CY5荧光染料和/或FAM荧光染料。
[0028]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种用于PCR的试剂盒，该试剂盒包含(A)或(B)：
[0029](A)、上述含有着色剂的用于PCR的试剂；
[0030](B)、包含分别独立包装的着色剂和PCR试剂，所述着色剂包括酸性橙G、酸性黄23、灿烂绿和乙基紫中的一种或多种；
[0031]所述着色剂在PCR反应体系中的浓度为：
[0032]酸性橙G 0.00001g/mL～0.0001g/mL；
[0033]酸性黄23 0.00003g/mL～0.0003g/mL；
[0034]灿烂绿0.00001g/mL～0.0001g/mL；
[0035]和，乙基紫0.00001g/mL～0.0001g/mL中的一种或多种。
[0036]优选地，酸性橙G在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL；
[0037]优选地，酸性黄23在PCR反应体系中的浓度为0.00003g/mL、0.00015g/mL或0.0003g/mL；
[0038]优选地，灿烂绿在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL；
[0039]优选地，乙基紫在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL。
[0040]优选地，所述试剂盒还包括引物试剂、探针试剂、酶试剂、缓冲体系试剂、荧光染料和冻干保护剂中的一种或多种；
[0041]优选地，所述探针试剂中含有带有CY5荧光报告基团的探针和/或，带有FAM荧光报告基团的探针；
[0042]优选地，所述荧光染料包括CY5荧光染料和/或FAM荧光染料。
[0043]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种PCR试剂的制备方法，包括将着色剂混合于PCR试剂中；所述着色剂包括酸性橙G、酸性黄23、灿烂绿或乙基紫；
[0044]所述着色剂在PCR反应体系中的浓度为：
[0045]酸性橙G 0.00001g/mL～0.0001g/mL；
[0046]酸性黄23 0.00003g/mL～0.0003g/mL；
[0047]灿烂绿0.00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于PCR的试剂，其特征在于，所述试剂含有着色剂，所述着色剂包括酸性橙G、酸性黄23、灿烂绿或乙基紫；所述着色剂在PCR反应体系中的浓度为：酸性橙G 0.00001g/mL～0.0001g/mL；酸性黄23 0.00003g/mL～0.0003g/mL；灿烂绿0.00001g/mL～0.0001g/mL；或，乙基紫0.00001g/mL～0.0001g/mL。2.根据权利了要求1所述的试剂，其特征在于，酸性橙G在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL；优选地，酸性黄23在PCR反应体系中的浓度为0.00003g/mL、0.00015g/mL或0.0003g/mL；优选地，灿烂绿在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL；优选地，乙基紫在PCR反应体系中的浓度为0.00001g/mL、0.00005g/mL或0.0001g/mL。3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括PCR反应体系、引物试剂、探针试剂、酶试剂、缓冲体系试剂和冻干保护剂中的一种或多种；优选地，所述用于PCR的试剂为冻干试剂；优选地，所述用于PCR的试剂为用于荧光PCR的试剂；优选地，所述用于PCR的试剂为用于荧光PCR的冻干试剂。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂为用于荧光PCR的冻干反应体系，由所述着色剂、PCR预混液、冻干保护剂和引物；以及探针和/或荧光染料冻干得到；优选地，所述PCR预混液选自5
×
HyperstartPremix
‑
UNG或5
×
SuperstartPremix
‑
UNG；优选地，所述探针带有CY5荧光报告基团或FAM荧光报告基团；优选地，所述荧光染料包括CY5荧光染料和/或FAM荧光染料。5.用于PCR的试剂盒，其特征在于，包含(A)或(B)：(A)、权利要求1
‑
4任一项所述的用于PCR的试剂；(B)、包含分别独立包装的着色剂和PCR试剂，所述着色剂包括酸性橙G、酸性黄23、灿烂绿和乙基紫中的一种或多种；所述着色剂在PCR反应体系中的浓度为：酸性橙G 0.00001g/mL～0.0001g/mL；酸性黄23 0.00003g/mL～0.0003g/mL；灿烂绿0.00001g/mL～0.0001g/mL；和，乙基紫...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧格，何绮婷，谭玲，勾宏娜，黄睿，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：