一种人胎盘组织源蜕膜间充质干细胞的简易制备方法技术

本发明专利技术涉及一种人胎盘组织源蜕膜间充质干细胞的简易制备方法，属于生物学技术领域。该方法包括如下步骤：将胎盘的蜕膜组织剪下，用含2％双抗的生理盐水反复清洗后使用镊子剥离蜕膜组织，收集蜕膜组织并剪碎，使用0.1％的胶原蛋白酶进行消化，稀释消化后使用一次性使用输血器过滤网对细胞悬液进行过滤并收集，400g离心5分钟后弃上清，将细胞沉淀使用5％完全培养基重悬后，400g离心5分钟后弃上清，使用5％完全培养基重悬后种瓶培养。本发明专利技术采用一步消化法制备胎盘底蜕膜干细胞，在分离、培养过程中采用改良的制备方法和培养体系减少对细胞的伤害，短缩了操作时长，提高分离效率，缩短培养周期，提高干细胞的产量的同时获得高纯度、表征优良的细胞。表征优良的细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种人胎盘组织源蜕膜间充质干细胞的简易制备方法


[0001]本专利技术属于生物学
，具体涉及一种人胎盘组织源蜕膜间充质干细胞的简易制备方法。

技术介绍

[0002]干细胞是具有多能性维持和分化潜能的细胞。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是一种多能的成体干细胞，存在于胎盘、脐带、骨髓和脂肪组织等多种组织中，其有一定的分化潜能，可以分泌多种营养因子利于组织重塑和免疫调节，这些特性使得间充质干细胞成为治疗各种先天性和后天性疾病的出色候选者。胎盘在胎儿发育过程中起重要作用，从胎盘蜕膜获得的细胞，具有间充质干细胞的基本特征，为胎盘蜕膜间充质干细胞，其作为一个母亲自体间充质干细胞的重要来源，能安全的用于治疗多种疾病。有研究表面母体组织来源的间充质干细胞高水平分泌血管内皮生长因子和血管生成素1，增加血管通透性，促进内皮细胞的增殖和新生血管的生成，治疗后肢缺血疾病比其他来源的间充质干细胞更具有优势。
[0003]胎盘蜕膜间充质干细胞具有广阔的临床应用潜能，其制备主要采用酶消化方法。剥离蜕膜组织并剪成碎块，使用胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人胎盘组织源蜕膜间充质干细胞的简易制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从胎盘样本剪下底蜕膜组织，放入150mm无菌培养皿中，使用含2％双抗的生理盐水漂洗5～6遍，洗净后使用镊子剥离靠母体侧的底蜕膜组织。(2)收集底蜕膜组织并剪成单个体积为1～2mm3的肉糜，加入0.1％的胶原蛋白酶并放入恒温震荡仪中37℃，200rmp消化30min。(3)消化完成后加入3倍的生理盐水进行稀释消化，得到胎盘组织消化液。(4)取一次性使用输血器，使用无菌剪刀将输液器的滴斗部位剪开，用于加入胎盘蜕膜组织消化液，将连接滴斗及过滤网的导管则剪剩3～4cm，使用止血钳夹住导管旁位置，放置在50mL离心管上固定。(5)将新鲜的胎盘组织消化液加入到输液器的滴斗中，收集滤液，400g离心5min后倒弃上清后得到细胞沉淀。(6)将细胞沉淀使用10～20mL 5％的完全培养基进行重悬并混匀，400g离心5min后倒弃上清后得到细胞沉淀。(7)将细胞沉淀使用5％的完全培养基进行重悬后种瓶，放入37℃，5％CO2培养箱中进行培养。(8)待细胞生长至融合度达80～90％时，收集P0代细胞使用5％完全培养基重悬后按1∶4进行传代培养。2.通过权利要求1所述的过滤方法，其特征在于，所述的过滤网为网口宽...

【专利技术属性】
技术研发人员：李锦灵，李治寰，苏榆媛，刘冬羽，
申请(专利权)人：东莞宣冠干细胞再生医学有限公司，
类型：发明
国别省市：