一种多花黄精多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种多花黄精多糖及其制备方法和应用，该多花黄精多糖包括四种单糖，摩尔比为：果糖：葡萄糖：甘露糖：半乳糖＝88.1：9.7：1.6：0.3；主链主要

【技术实现步骤摘要】
一种多花黄精多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于植物多糖领域，具体涉及一种多花黄精多糖及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]多糖是构成生命的四大基本物质之一，通常由10个以上单糖通过不同类型的糖苷键相连。广泛存在于植物、动物和微生物的细胞壁中，天然多糖具有多种生物学效应，如降血脂、降血糖、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗炎等作用，能够直接影响机体物质和能量代谢，调节肠道菌群组成、维持身体健康，具有重要的药用价值。
[0003]非酒精性脂肪肝(Non
‑
alcoholic fatty liver disease，NAFLD)一般是指除外酒精和其他有明确肝损害的因素所致的临床病理综合征。组织学主要是以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征。近年来NAFLD患病率呈逐年上升趋势,已经被认为是全球性的主要公共健康问题之一。目前在临床上没有治疗NAFLD的有效药物，一般采用抗氧化剂、胰岛素增敏剂、调脂药等用于NAFLD的临床治疗。
[0004]黄精中含有丰富的多糖成分，其化学结构复杂，不同来源、不同品种的黄精多糖含量、结构与活性有较大的差异，多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua，PCH)是百合科黄精属中的一种多年生草本植物，具有补肾益精、滋阴润燥的功效，是2020年版《中国药典》中收载的3种黄精之一，广泛分布于我国南方地区。多花黄精多糖是多花黄精中主要的活性成分，且已被证实具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抗疲劳等药理活性。
专利技术内容
[0005]本专利技术的目的在于提供一种多花黄精多糖及其制备方法，从多花黄精的根茎中提取分离出的一种多花黄精多糖均一组分，命名为PCP1，主要由果糖、葡萄糖和甘露糖组成。
[0006]本专利技术还有一个目的在于提供一种多花黄精多糖的应用，用于功能食品、保健品制备或者用于治疗非酒精性脂肪肝的药物制备。
[0007]本专利技术具体技术方案如下：
[0008]一种多花黄精多糖，重均分子量为4650Da，数均分子量为4420Da；纯度为98.68％；所述多花黄精多糖包括四种单糖，摩尔比为：果糖：葡萄糖：甘露糖：半乳糖＝88.1：9.7：1.6：0.3；所述多花黄精多糖主链主要由
→
1)
‑
β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
、
→
1,6)
‑
β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
和少量的
→
6)
‑
α
‑
D
‑
Glcp
‑
(1
→
、
→
4)
‑
β
‑
D
‑
Manp
‑
(1
→
、β
‑
D
‑
Glcp
‑
(1
→
组成，侧链主要由β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
连接在
→
1,6)
‑
β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
的C
‑
6位置组成，其中Fruf代表呋喃果糖，Glcp代表吡喃葡萄糖，Manp代表吡喃甘露糖。
[0009]本专利技术提供的一种多花黄精多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0010]1)、将新鲜多花黄精根茎烘干、粉碎，获得多花黄精根茎粉末；
[0011]2)、将多花黄精根茎粉末加水加热提取，离心保留上清液；上清液浓缩后加入无水乙醇，低温条件下醇沉，离心，保留沉淀，得到多花黄精粗多糖；
[0012]3)、将多花黄精粗多糖加水加热复溶，离心后，上清液进行脱色、脱色液浓缩，并经
滤膜过滤后，使用Sevag试剂脱除蛋白质，低温透析，最后，所得多糖溶液冷冻干燥，获得初步纯化多花黄精多糖粉末；
[0013]4)、将初步纯化多花黄精多糖粉末加水溶解后，过滤、去离子水洗脱，洗脱液经浓缩、低温透析后，冷冻干燥，获得多花黄精多糖水洗组分粉末；
[0014]5)、将多花黄精多糖水洗组分粉末加水溶解后，洗脱、浓缩、透析后，冷冻干燥，获得多花黄精多糖均一组分PCP1。
[0015]步骤1)具体为：新鲜多花黄精根茎经清洗和除须后，切成6～8mm薄片，于60℃烘干72～96h，然后用电动粉碎机粉碎，过60目筛，获得粒径均匀的多花黄精根茎粉末。
[0016]优选的，所述新鲜多花黄精根茎选自九华多花黄精的根茎。
[0017]步骤2)加热提取温度是75℃，提取时间1.5～2h；
[0018]优选的，步骤2)中，加热提取2次，第一次提取后，离心，保留上清液，沉淀继续加入去离子水按照相同的方法提取1.5～2h；
[0019]步骤2)中所述低温条件下醇沉，具体为：4℃冰箱内醇沉12h；醇沉时，加入无水乙醇，使混合溶液中乙醇体积分数为75％；
[0020]优选的，步骤2)具体为：取多花黄精根茎粉末，加入去离子水，料液比为1:20～24；加热至75℃，提取1.5～2h；冷却后，5000～8000r/min离心15～20min保留上清液，沉淀继续加入1000～1200mL去离子水重复提取1.5～2h，5000～8000r/min离心15～20min后，合并两次上清液；浓缩至200～300mL，缓慢加入无水乙醇至乙醇体积分数为75％，于4℃冰箱内醇沉12h后，8000r/min离心20min获得多花黄精粗多糖；
[0021]步骤3)具体为：多花黄精粗多糖中再加入200～300mL去离子水边加热至60℃并缓慢搅拌使其复溶，至溶液澄清，沉淀物不继续溶解后，12000～15000r/min离心15min，取上清液，用D101大孔树脂进行脱色，脱色液浓缩至原溶液体积的1/10～1/5，并经0.22μm微孔滤膜过滤后，使用Sevag试剂脱除蛋白质，经Bradford法测定后，证明蛋白质脱除干净即可，随后60℃旋转蒸发除去Sevag试剂，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，使用截留分子量为1000Da的透析袋于0～4℃透析72h除去小分子物质；最后，多糖溶液于
‑
80℃条件下冷冻干燥72h，获得初步纯化多花黄精多糖粉末。
[0022]步骤4)具体为：称量200mg初步纯化多花黄精多糖粉末加入20～40mL去离子水溶解后，0.22μm微孔滤膜过滤后上样DEAE
‑
52纤维素阴离子交换层析柱，用去离子水以0.4mL/min流速进行洗脱，每10min收集一管，并使用蒽酮
‑
硫酸试剂检测多糖是否洗脱完全，待多糖洗脱完全后，将洗脱液浓缩至原体积的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多花黄精多糖，其特征在于，所述多花黄精多糖包括四种单糖，摩尔比为：果糖：葡萄糖：甘露糖：半乳糖＝88.1：9.7：1.6：0.3。2.根据权利要求1所述的多花黄精多糖，其特征在于，所述多花黄精多糖主链主要由
→
1)
‑
β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
、
→
1,6)
‑
β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
和少量的
→
6)
‑
α
‑
D
‑
Glcp
‑
(1
→
、
→
4)
‑
β
‑
D
‑
Manp
‑
(1
→
、β
‑
D
‑
Glcp
‑
(1
→
组成，侧链主要由β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
连接在
→
1,6)
‑
β
‑
D
‑
Fruf
‑
(2
→
的C
‑
6位置组成。3.根据权利要求1或2所述的多花黄精多糖，其特征在于，所述的多花黄精多糖重均分子量为4650Da，数均分子量为4420Da。4.一种权利要求1
‑
3任一项所述的多花黄精多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1)、将新鲜多花黄精根茎烘干、粉碎，获得多花黄精根茎粉末；2)、将多花黄精根茎粉末加水加热提取，离心保留上清液；上清液浓缩后加入无水乙醇，低温条件下醇沉，离心，保留沉淀，得到多花黄精粗多糖；3)、将多花黄精粗多糖加水加热复溶，离心后，上清液进行脱色、脱色液浓缩，并经滤膜过滤后，使用Sevag试剂脱除蛋白质，低温透析，最后，所得多糖溶液冷冻干燥，获得初步纯化多花黄精多糖粉末；4)、将初步纯化多花黄精多糖粉末加水溶解后，过滤、去离子水洗脱，洗脱液经浓缩、低温透析...

【专利技术属性】
技术研发人员：王国栋，韩军，邵太丽，刘伟，柳春燕，袁平川，陈静，
申请(专利权)人：皖南医学院，
类型：发明
国别省市：