一种人脑组织和动物器官用透明化试剂及透明化成像方法技术

本发明专利技术公开了一种人脑组织和动物器官用透明化试剂及透明化成像方法。透明化试剂是由1,3

【技术实现步骤摘要】
一种人脑组织和动物器官用透明化试剂及透明化成像方法


[0001]本专利技术属于生物样品组织处理领域，具体涉及一种人脑组织和动物器官透明化试剂及透明化成像方法。

技术介绍

[0002]组织光透明技术是利用化学试剂对生物组织进行处理，改变生物组织内部的折射率，从而提高光对生物组织的穿透，进而提高光学显微镜对生物组织的成像深度，有利于实现大体积生物组织的三维重构和神经环路解析。目前光透明技术最常用的技术路线可分为四类：一是简单浸泡型，主要有SeeDB等方法，该类方法试剂成分简单，但是透明效果往往较差。二是有机溶剂型，代表方法有DISCO系列，该类方法通过有机溶剂对生物组织进行脱水和折射率匹配，这类方法透明效果往往较好，但是对于生物组织的破坏比较严重。三是水化型，代表方法为CUBIC系列，该类方法一般对于生物组织的保护较好，荧光兼容性好。四是水凝胶型，代表方法主要为CLARITY系列，该类方法通常能取得很好的透明度，但是由于使用了表面活性剂处理，这使得生物组织会发生严重的膨胀，且细胞膜结构被完全破坏，而且表面活性剂渗透入组织的速度很慢，透明所需的技术成本较高。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提出一种使用便捷、速度快且对于人脑组织和动物器官荧光友好的生物组织透明化试剂及其应用。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术的技术方法包括以下内容：
[0005]一、一种生物组织透明化试剂
[0006]透明化试剂的主要试剂成分包括1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷和3
‑
[3
‑
(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)，所述1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为5％～40％；所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为5％
‑
25％。
[0007]优选的，所述所述1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为20％；所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为15％。
[0008]所述的CHAPS为市售产品，是主要的透明化成分，作用溶解脂质。
[0009]二、一种离体的人脑组织和动物器官的透明化方法，包括：
[0010]将离体的人脑组织和动物器官进行预处理。
[0011]将预处理后的生物组织浸泡在上述的生物组织透明化试剂中。
[0012]所述预处理包括组织固定、组织切片、免疫染色、化学燃料染色、病毒标记中的一种或多种。
[0013]三、一种生物组织透明化试剂在生物组织透明处理和成像中的应用
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]1)本专利技术所使用的透明化试剂成分简单，且可根据不同场景灵活选择；
[0016]2)本专利技术的方法简单易行，适用性广；
[0017]3)相比于已发表的组织透明化试剂，本专利技术提出的试剂能够缩短样品处理的时间。
附图说明
[0018]图1为本专利技术实施例1中300微米厚的小鼠大脑切片在试剂处理前后的对比图；
[0019]图2为本专利技术实施例2中小鼠肾脏在试剂处理前后的对比图；
[0020]图3为本专利技术实施例3中500微米厚的人类大脑切片在试剂处理前后的对比图；
[0021]图4为本专利技术实施例3中500微米厚的人类大脑切片在试剂处理后的荧光成像图；
[0022]图5为本专利技术实施例3中500微米厚的人类大脑切片的荧光保留效果图。
具体实施方式
[0023]下面结合附图和实施例对本专利技术的技术方案进行完整地描述。
[0024]本专利技术提供了一种人脑组织和动物器官用透明化试剂，包括1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷以及CHAPS，所述1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为5％～40％；所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为5％
‑
25％。
[0025]优选的，所述1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的体积比为15％
‑
30％，所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为10％
‑
20％。
[0026]更优的，所述1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的体积比为20％，所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为15％。
[0027]其中，本专利技术所涉及到的化学试剂均为市售，无特殊限制。
[0028]本专利技术还提供了一种人脑组织和动物器官透明化方法，包括将预处理后的生物组织浸泡在上述透明化试剂中。
[0029]所述生物组织可以来自于离体的人脑、心脏、肝脏、胰腺、肺、肠，但不限于以上所述。
[0030]所述预处理包括组织固定、组织切片、免疫染色、化学燃料染色、病毒标记中的一种或多种。其中组织固定，优选的是通过心脏灌流的方式获取，采用1x PBS、4％PFA依次对动物进行灌流，灌流完成后取出生物组织，存放于4％PFA中，在4度冰箱中保存。其中组织切片优选采用振荡切片、冷冻切片等方法。
[0031]生物组织浸泡于上述透明化试剂中，优选的，在室温摇床中孵育至透明，更优选的，在37度摇床中孵育至透明。孵育时间根据生物组织的尺寸不同，对于300微米的小鼠脑片，孵育时间优选为2小时。
[0032]本专利技术的成像包括但不限于光片显微镜、共聚焦显微镜、双光子显微镜、宽场显微镜。
[0033]为了使本专利的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利，并不用于限定本专利。此外，下面所描述的本专利各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0034]实施例1：小鼠大脑切片的透明化
[0035]透明化的小鼠大脑组织按照以下方法制备。本说明中所述的所有动物试验均按照
中国浙江大学动物伦理委员会的指南进行。
[0036]具体步骤如下：使用1％戊巴深度麻醉成年小鼠(8周龄)，打开胸腔，经心脏灌注40ml冰冷的PBS(磷酸盐缓冲盐水)冲洗血液，然后灌注20ml质量体积4％的PFA固定。随后开颅取脑，放置于含有4％PFA的试管中，于4℃冰箱中过夜。随后取出小鼠大脑，使用振荡切片机切片，将获得的300微米厚小鼠脑片放置于24孔板中，浸泡在1x PBS中。
[0037]对小鼠脑片进行拍照，得到的照片如图1中的左图所示。然后对脑片滴加透明化试剂(其中，1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为10％；CHAPS与蒸馏水的质量体积比为10％)处理1小时。透明化试剂处理完成后，将脑片转移至折射率匹配液中，此处折射率匹配液采用CUBIC
‑
R(45％安替比林，30％烟酰胺)。对小鼠脑片进行拍照，得到的照片如图1中的右图所示。
[0038]实施例2：小鼠肾脏的透明化
[0039]透明化的小鼠肾脏组织按照以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人脑组织和动物器官用透明化试剂，其特征在于：透明化试剂是由1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷和CHAPS溶于蒸馏水中形成的混合试剂；1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为5％
‑
40％，CHAPS与蒸馏水的质量体积比为5％
‑
25％。2.根据权利要求1所述的一种人脑组织和动物器官用透明化试剂，其特征在于：所述1,3
‑
双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为15％
‑
30％；所述C...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯科，肖啸，龚薇，王子筝，
申请(专利权)人：之江实验室，
类型：发明
国别省市：