一种基于镧系纳米探针同时检测多种乳腺癌生物标志物的分析方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种基于镧系纳米探针同时检测多种乳腺癌生物标志物的分析方法。该方法包括镧系纳米探针的合成和稳定同位素检测。本发明专利技术的原理是：利用溶剂热法，一步合成修饰有PAA的镧系纳米粒子；通过羧胺反应，将抗体与纳米粒子偶联，形成纳米探针。免疫检测是利用连有抗体的磁珠将目标物从基质中提取出来，加入纳米探针后，由于抗原与抗体的特异性识别，纳米粒子成功标记在目标物上；最后用β

【技术实现步骤摘要】
一种基于镧系纳米探针同时检测多种乳腺癌生物标志物的分析方法


[0001]本专利技术属于分析化学的检测领域，涉及乳腺癌生物标志物的稳定同位素（Metal stable isotope）传感领域，特别设计一种基于简单溶剂热法合成的三种镧系纳米粒子（NaEuF
4 NPs、NaTbF
4 NPs和NaHoF
4 NPs）所产生的稳定同位素通过电感耦合等离子体质谱仪同时对三种乳腺癌生物标志物（CEA、CA125和CA153）进行检测的分析方法。

技术介绍

[0002]乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤，与肺癌、结肠癌并列全球三大癌症。同时，乳腺癌也是继肺癌之后造成女性死亡的第二大原因。为了降低乳腺癌的死亡率，早期诊断和综合治疗很重要。并且有远处器官转移的晚期乳腺癌被认为是无法治愈的，其仍是造成死亡的主要原因。现阶段用于确认转移发生的主要方法是影像学和病理学，但这些方法并不适用于转移性乳腺癌筛查，且存在造成病情恶化及患者痛苦的副作用。因此，开发一种能提供有关肿瘤诊断和治疗监测的准确信息，同时满足患者的友好性和医护人员的实用性的新型诊断本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可以同时检测三种乳腺癌生物标志物的分析方法，其特征在于：（1）三种镧系纳米探针的合成；（2）作为捕获单元的磁珠的修饰；（3）检测目标物的免疫分析过程；（4）稳定同位素检测；（1）三种镧系纳米探针的合成：称取1 mmol氯化镧系盐和1.8 g PAA溶于乙二醇中，超声波震荡至溶液变为澄清为止；称取0.42 g NaF溶于超纯水中，将含有NaF的水溶液滴加到先前含有氯化镧系盐和PAA的混合溶液中，溶液变混浊；室温搅拌1 h后，将溶液倒入反应釜中，200 ℃反应4 h，反应完成后自然冷却至室温；通过离心分离，得到了PAA功能化的镧系纳米粒子，用乙醇和超纯水对纳米颗粒进行洗涤；最后，这些纳米粒子可以在超纯水中室温保存一个月；称取20 mg sulfo
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NHS和20 mg EDC
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HCl溶于500 μL MES缓冲液中备用；另外，取62.5 μL的纳米颗粒悬液加入500 μL MES缓冲液中，超声振荡8 min；将sulfo
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NHS/EDC
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HCl溶液与纳米颗粒溶液混合，混合物在室温下轻微摇晃1 h，以激活纳米颗粒表面的羧基；纳米颗粒活化后，用超纯水清洗一次；将纳米颗粒重悬于1 mL HEPES缓冲液中，超声2 min使纳米颗粒完全分散；将10 μg检测抗体加入到纳米颗粒溶液中，室温下轻微摇晃12 h，偶联抗体后HEPES缓冲液洗涤1次；将沉淀重悬于1ml TBS缓冲液中进行封闭，溶液于室温下轻晃1 h，封闭后用TBS缓冲液洗涤一次；将偶联检测抗体的纳米颗粒重悬于含1%脱脂奶粉的TBS缓冲液中，4 ℃保存至使用；（2）作为捕获单元的磁珠的修饰：取37.5 μL的磁珠悬浮液用PBS缓冲液洗涤3次，经磁分离去除洗涤液；磁珠与18.75 μL的捕获抗体溶液(1 mg / mL)室温孵育1 h，通过生物素
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链霉亲和素反应标记捕获抗体；通过磁分离去除多余抗体，将磁珠分散于含1% (w/...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘睿，陈雪，吕弋，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：