一种信号放大的免疫层析检测试纸及其制备方法、检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种信号放大的免疫层析检测试纸，包括结合垫一、结合垫二、包被C线和T线的硝酸纤维素膜、吸样垫和底板；其中结合垫一固定有待检测抗原的抗体A偶联氧化葡聚糖；结合垫二固定有ConA

【技术实现步骤摘要】
一种信号放大的免疫层析检测试纸及其制备方法、检测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及免疫层析
，尤其涉及一种信号放大的免疫层析检测试纸，以及试纸的制备方法，和检测试剂盒及对应的检测方法。

技术介绍

[0002]目前抗原常用的检测技术有：胶体金法、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫层析、化学发光法等。胶体金法是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PNA、ConA等；ELISA已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术；荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术，以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动；化学发光法是利用化学发光测定化学发光反应物、催化剂、增敏剂、抑制剂，偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂的方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术主要是解决现有技术所存在的技术问题，从而提供一种信号放大的免疫层析检测试纸盒检测装置，可以提高免疫层析平台检测的特异性和灵敏度。
[0004]本专利技术的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的：一种信号放大的免疫层析检测试纸，包括结合垫一、结合垫二、包被C线和T线的硝酸纤维素膜、吸样垫和底板，所述结合垫一、结合垫二、包被C线和T线的硝酸纤维素膜、吸样垫依次放置于底板上，结合垫二的头部与结合垫一的尾部重叠，硝酸纤维素膜的头部与结合垫二的尾部重叠，吸样垫的头部与硝酸纤维素膜的尾部重叠；
[0005]其中结合垫一固定有待检测抗原的抗体A偶联氧化葡聚糖；
[0006]结合垫二固定有ConA
‑
偶联量子点荧光微球，以及抗DNP抗体偶联量子点荧光微球；
[0007]T线包被有待检测抗原的抗体B；
[0008]C线包被有DNP。
[0009]优选的，所述底板为PVC。
[0010]优选的，所述结合垫一、结合垫二采用玻璃纤维、无纺布或滤纸制成。
[0011]优选的，所述吸样垫为滤纸。
[0012]优选的，所述氧化葡聚糖为葡聚糖经高碘酸钠氧化而成。
[0013]优选的，所述抗体A偶联氧化葡聚糖为氧化葡聚糖与抗体A混合后，加入NaCNBH3反应，再加入乙二胺反应，然后加入NaBH4还原而成。
[0014]本专利技术还公开了一种信号放大的免疫层析检测试剂盒，包括上述的免疫层析检测
试纸，以及卡盒，所述试纸置于卡盒内，卡盒在试纸的结合垫一对应部位露出加样孔，在试纸的结合垫二对应部位露出稀释液添加孔，在试纸的硝酸纤维素膜包被C线和T线对应部位露出观察窗。
[0015]本专利技术还公开了上述信号放大的免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
[0016]1、制备结合垫一
[0017]1.2葡聚糖氧化：用高碘酸钠氧化葡聚糖，反应后加入过量乙二醇终止氧化反应，透析获得氧化葡聚糖；
[0018]1.2氧化葡聚糖偶联抗体：氧化葡聚糖与抗目标抗原的抗体A混合反应后，用NaCNBH3还原成二元结合物，再投入乙二胺氨化，然后用NaBH4还原，之后透析除去乙二胺和NaBH4；
[0019]1.3结合垫一制备：将上一步获得的氧化葡聚糖偶联抗体固定到玻璃纤维垫上，制得结合垫一；
[0020]2、制备结合垫二
[0021]2.1ConA/抗DNP抗体偶联量子点荧光微球：量子点荧光微球活化后，加入ConA或抗DNP抗体进行偶联反应，然后封闭，备用；
[0022]2.2结合垫二制备：将ConA偶联量子点荧光微球以及抗DNP抗体偶联量子点荧光微球固定到玻璃纤维垫上，制得结合垫二；
[0023]3、制备包被C线和T线的硝酸纤维素膜
[0024]3.1用包被缓冲液稀释抗目标抗原的抗体B，获得T线抗体；
[0025]3.2用包被缓冲液稀释DNP
‑
BSA，获得C线抗体；
[0026]3.3将C线抗体、T线抗体分别包被在硝酸纤维素膜上，干燥，获得包被C线和T线的硝酸纤维素膜；
[0027]4、组装
[0028]将结合垫一、结合垫二、包被C线和T线的硝酸纤维素膜、吸样垫依次放置于底板上，结合垫二的头部与结合垫一的尾部重叠，硝酸纤维素膜的头部与结合垫二的尾部重叠，吸样垫的头部与硝酸纤维素膜的尾部重叠，获得量子点荧光免疫层析检测试纸。
[0029]优选的，步骤1.1葡聚糖氧化具体为：用pH7.0的20mmol/L磷酸缓冲液溶解一定量的葡聚糖，并配置100mg/mL的高碘酸钠水溶液，将高碘酸钠水溶液加入上述葡聚糖溶液中，使NaIO4与葡聚糖中单糖单元的摩尔比为1:3，葡聚糖终浓度为40mg/mL，避光30℃微弱搅拌反应3小时后加入过量乙二醇终止氧化反应，继续避光30℃搅拌反应15分钟后取出，用去离子水或pH7.0的20mmol/L磷酸缓冲液进行透析。
[0030]优选的，步骤1.2氧化葡聚糖偶联抗体具体为氧化葡聚糖与抗目标抗原的抗体A混合反应2小时后，用NaCNBH3还原成二元结合物，再投入乙二胺，氨化2小时后用NaBH4还原2小时，之后透析除去乙二胺和NaBH4。
[0031]优选的，步骤2.1ConA/抗DNP抗体偶联量子点荧光微球具体为：取量子点荧光微球加MES，离心后加入少量MES超声重悬，然后先加入NHS混匀后再加EDC，活化反应时间不小于半小时，加MES，离心，去上清，再依次用LMES、缓冲液超声清洗后，加缓冲液重悬，然后加入Con
‑
A或抗DNP抗体开始偶联反应，再加入甘氨酸和乙醇胺，加入BSA封闭，用PBST清洗后，加
保存液清洗，用保存液重悬保存。
[0032]优选的，步骤3.1中用包被缓冲液将抗目标抗原的抗体B稀释至1.0～2.0mg/mL。
[0033]优选的，步骤3.2中用包被缓冲液将DNP
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BSA稀释至1.0～2.0mg/mL。
[0034]本专利技术还公开了一种信号放大的量子点荧光免疫层析检测方法，基于上述的免疫层析检测试剂盒进行，其特征在于其步骤包括：
[0035](1)打开量子点荧光免疫分析仪；
[0036](2)取50μL待测样品滴加到免疫层析试纸条的加样孔，5～10min后取100μL稀释液滴加到稀释液添加孔。
[0037](3)继续孵育10～15min，将试剂盒放入量子点荧光免疫分析仪中读取检测结果。
[0038]本专利技术的伴刀豆球蛋白与葡萄糖反应信号放大的荧光免疫检测方法技术路线为：首先将某一特定抗原特异的抗体A与氧化葡聚糖偶联，固定在结合垫一上；分别将伴刀豆球蛋白(ConA)与量子点荧光微球偶联，抗DNP抗体与量子点荧光微球偶联，将两种量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种信号放大的免疫层析检测试纸，其特征在于：包括结合垫一、结合垫二、包被C线和T线的硝酸纤维素膜、吸样垫和底板；其中结合垫一固定有待检测抗原的抗体A偶联氧化葡聚糖；结合垫二固定有ConA
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偶联量子点荧光微球，以及抗DNP抗体偶联量子点荧光微球；T线包被有待检测抗原的抗体B；C线包被有DNP。2.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述结合垫一、结合垫二、包被C线和T线的硝酸纤维素膜、吸样垫依次放置于底板上，结合垫二的头部与结合垫一的尾部重叠，硝酸纤维素膜的头部与结合垫二的尾部重叠，吸样垫的头部与硝酸纤维素膜的尾部重叠。3.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述底板为PVC。4.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述结合垫一、结合垫二采用玻璃纤维、无纺布或滤纸制成。5.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述吸样垫为滤纸。6.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述氧化葡聚糖为葡聚糖经高碘酸钠氧化而成。7.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述抗体A偶联氧化葡聚糖为氧化葡聚糖与抗体A混合后，加入NaCNBH3反应，再加入乙二胺反应，然后加入NaBH4还原而成。8.一种信号放大的免疫层析检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1
‑
7中任一项所述的免疫层析检测试纸，以及卡盒，所述试纸置于卡盒内，卡盒在试纸的结合垫一对应部位露出加样孔和稀释液添加孔，在试纸的硝酸纤维素膜包被C线和T线对应部位露出观察窗。9.一种信号放大的免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1、制备结合垫一1.1葡聚糖氧化：用高碘酸钠氧化葡聚糖，反应后加入过量乙二醇终止氧化反应，透析获得氧化葡聚糖；1.2氧化葡聚糖偶联抗体：氧化葡聚糖与抗目标抗原的抗体A混合反应后，用NaCNBH3还原成二元结合物，再投入乙二胺氨化，然后用NaBH4还原，之后透析除去乙二胺和NaBH4；1.3结合垫一制备：将上一步获得的氧化葡聚糖偶联抗体固定到玻璃纤维垫上，制得结合垫一；2、制备结合垫二2.1ConA/抗DNP抗体偶联量子点荧光微球：量子点荧光微球活化后，加入ConA或抗DNP抗体进行偶联反应，然后封闭，备用；2.2结合垫二制备：将ConA偶联量子点荧光微球以及抗DNP抗体偶联量子点荧光微球固定到玻璃纤维垫上，制得...

【专利技术属性】
技术研发人员：董常慧，
申请(专利权)人：南京美宁康诚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：