数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法技术

本发明专利技术提供了一种数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法，涉及PCR检测技术领域，包括：获取一批微滴图像对应的预设评价指标下的影响分析数据，影响分析数据包括目标体积变异参数和目标理论拷贝数浓度；基于蒙特卡罗法，确定与影响分析数据对应的目标评价指标值。如此实现了微滴体积变异对预设评价指标的定量影响分析，缓解了目前仅从原理上要求尽量控制微滴体积均一性的问题，有利于指导数字PCR微滴产生流程的设计优化，易于理解，容易实现。容易实现。容易实现。

【技术实现步骤摘要】
数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法


[0001]本专利技术涉及PCR检测
，尤其是涉及一种数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法。

技术介绍

[0002]数字PCR(polymerase chain reaction，聚合酶链反应)属于第三代PCR技术，原理是将一个PCR反应体系分配到大量微小的反应单元(即微反应器)中，在每个微反应器中不含、或含有1个或多个拷贝的目标核酸分子模板，进行“单分子模板”PCR扩增，扩增结束后，通过终点荧光信号判断阳性单元，通过统计方法计算原始样本中目标基因的拷贝数。数字PCR无需依赖于对照样品、标准曲线就可进行精确的绝对定量检测，具有比荧光定量PCR更加出色的灵敏度、特异性和精确性，已经受到越来越多的关注。
[0003]微滴式数字PCR系统即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴，待扩增反应结束后，采用拍照方式，通过微滴的亮暗来判断微滴的阴阳性，然后根据亮暗微滴的数量进行统计分析，获得目标基因的拷贝数目。显然亮暗微滴的数量直接影响到最终的分析结果，但在对照片进行图像处理时，常会发现因大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法，其特征在于，包括：获取一批微滴图像对应的预设评价指标下的影响分析数据，所述影响分析数据包括目标体积变异参数和目标理论拷贝数浓度；基于蒙特卡罗法，确定与所述影响分析数据对应的目标评价指标值。2.根据权利要求1所述的数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法，其特征在于，所述获取一批微滴图像对应的预设评价指标下的影响分析数据，包括：获取一批微滴图像及其对应的基因拷贝数和理论微滴数；对各个所述微滴图像进行微滴尺寸识别，得到尺寸识别结果；根据所述尺寸识别结果，确定目标体积变异参数；其中，所述目标体积变异参数包括体积变异类型和变异程度，所述体积变异类型包括整体随机变异或局部确定性变异；根据所述基因拷贝数和所述理论微滴数，计算得到目标理论拷贝数浓度。3.根据权利要求2所述的数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法，其特征在于，所述对各个所述微滴图像进行微滴尺寸识别，得到尺寸识别结果，包括：对各个所述微滴图像依次进行滤波、图像增强和分割处理，得到包括每个微滴尺寸的尺寸识别结果。4.根据权利要求2所述的数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法，其特征在于，所述根据所述尺寸识别结果，确定目标体积变异参数，包括：从所述尺寸识别结果对应的初始微滴集合中，去除大于预设尺寸上限的微滴以及小于预设尺寸下限的异常微滴，得到剩余微滴集合；当所述剩余微滴集合的微滴数量满足最少微滴数量要求时，判断所述剩余微滴集合的微滴尺寸是否满足正态分布；当满足时，确定体积变异类型为整体随机变异，变异程度为所述剩余微滴集合的微滴尺寸对应的均值和标准差；当不满足时，通过对所述剩余微滴集合的微滴尺寸进行聚类分析，确定体积变异类型为局部确定性变异及变异程度。5.根据权利要求4所述的数字PCR中微滴体积变异的影响分析方法，其特征在于，所述通过对所述剩余微滴集合的微滴尺寸进行聚类分析，确定体积变异类型为局部确定性变异及变异程度，包括：对所述剩...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨智，赵云鹏，刘荃，高琪，李冬，贺贤汉，
申请(专利权)人：杭州博日科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：