一种从海洋微藻中制备腹泻性贝类毒素标准物质的方法技术

本发明专利技术公开了一套应用海洋微藻制备腹泻性贝类毒素标准物质的方法，具体包括以下步骤：以NaOH溶液破碎产毒藻细胞并水解酯化态毒素，然后采用液液萃取的方法从产毒藻培养液中浸提毒素。毒素粗提液经浓缩后先采用葡聚糖凝胶层析柱纯化，再经半制备液相色谱分离纯化，最后经固相萃取法进一步纯化后获得OA和DTX1毒素的标准物质。利用高分辨二级质谱进行定性，液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种从海洋微藻中制备腹泻性贝类毒素标准物质的方法


[0001]本专利技术属于天然产物分离
，具体涉及一种从海洋甲藻中分离制备高纯度腹泻性贝类毒素的方法。

技术介绍

[0002]腹泻性贝毒(Diarrhetic shellfish toxins，DSTs)是一类由大田软海绵酸(Okadaic acid，OA)、鳍藻毒素(Dinophysistoxins，DTXs)及其衍生物组成的海洋藻毒素，其化学结构式如图1所示，难溶于水，易溶于甲醇、乙腈、三氯甲烷等有机试剂。该类毒素常富集于贝类等生物组织中，威胁贝类水产品食用安全，可引起消费者出现腹泻性中毒，并诱导肿瘤的发育，潜在威胁人体健康和海洋生态安全。
[0003]无论是海洋毒素的新药开发，还是有毒赤潮的监测方法研究，均需要藻毒素标准品，特别是监管部门贝类产品卫生质量的常规检测也需要海洋毒素标准品进行定性与定量分析。随着越来越多的海洋毒素不断被发现，相应的毒素标准品研制工作明显滞后。因此，海洋藻毒素标准品具有巨大的市场需求。目前藻毒素标准品价格昂贵，浓度低，只能满足日常监测的毒素定量需求，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备高纯度大田软海绵酸毒素OA和鳍藻毒素DTX1毒素的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤1)向含有腹泻性贝类毒素的藻体溶液中加入碱液并静置以破碎藻细胞，随后将溶液的pH值调至2.0
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5加入二氯甲烷进行萃取，收集下层有机相获得毒素粗提液；2)将萃取收集的毒素粗提液经浓缩后，用甲醇复溶并加入到已活化的葡聚糖凝胶层析柱中，以甲醇溶液洗脱，分段收集洗脱液；根据LC
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MS/MS检测分离组分中毒素组成的结果确定毒素的洗脱体积，选取含有OA和DTX1毒素的组分进行合并、浓缩，待半制备液相色谱进一步纯化；3)采用半制备液相色谱进一步分离纯化OA和DTX1组分，经LC
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MS/MS检测分析，合并毒素组分，并用固相萃取柱进一步纯化；4)将半制备液相色谱分离纯化获得的OA和DTX1毒素样品加入到...

【专利技术属性】
技术研发人员：李爱峰，唐志璇，王桂祥，邱江兵，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：