包含编码抗原结合分子的多核苷酸和靶向ECM试剂的多核苷酸的多核苷酸及修饰细胞制造技术

本公开涉及包含编码抗原结合分子的多核苷酸和编码靶向一种或多种细胞外基质(ECM)分子的试剂的多核苷酸的修饰细胞。在实施方案中，编码靶向一种或多种ECM分子的药剂的多核苷酸包含编码组织蛋白酶K(CK)的多核苷酸和/或编码中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的多核苷酸。在实施方案中，编码NE的多核苷酸包含编码NE的多核苷酸和编码IL

【技术实现步骤摘要】
包含编码抗原结合分子的多核苷酸和靶向ECM试剂的多核苷酸的多核苷酸及修饰细胞


[0001]本公开涉及用于扩增和维持修饰的细胞(包括基因修饰的细胞)的组合物和方法，以及其在疾病(包括癌症)治疗中的用途，具体涉及包含编码抗原结合分子的多核苷酸和靶向ECM试剂的多核苷酸的多核苷酸、载体、修饰细胞及组合物。

技术介绍

[0002]癌症又称为恶性肿瘤，其涉及异常细胞生长，并有可能侵袭或扩散到身体的其他部位。人类中存在一百多种癌症。虽然已证明免疫疗法(例如，CAR T)对治疗某些癌症有效，但是仍需要对免疫疗法进行改进，以便有效治疗包括涉及实体瘤等的更多癌症。嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法在诸如B细胞急性淋巴细胞白血病(B
‑
ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和淋巴瘤等癌症中已取得良好的临床疗效。然而，对实体瘤的治疗进展相对缓慢。为了使CAR T细胞疗法有效，长期维持患者体内的CAR T细胞对于肿瘤治疗中患者的预后至关重要。例如，如果可以维持CAR T细胞长期存在，则该技术可以有效减少肿瘤复发。

技术实现思路

[0003]肿瘤外基质是包裹在实体瘤外由多种成分组成的基质，不属于任何细胞。鉴于其多样性，肿瘤外基质有多方面的功能。例如，为肿瘤细胞提供支持、固定和保护屏障、调节肿瘤细胞间的动态行为、为肿瘤细胞生长提供必要的信号等，在肿瘤疾病中起重要作用。
[0004]在之前的临床数据中，在部分缓解的病人中观察到了肿瘤的缩小，但是随着时间的推移仍然没能完全消失，达到完全缓解的评判标准。效果未达预期的原因是多因素的，可能是CAR
‑
T细胞数量还不够，识别浸润杀伤功能还不够强，也可能是肿瘤微环境抑制了CAR
‑
T的活性，还有可能是肿瘤部位最外圈的细胞外基质(ECM)保护了残留的肿瘤细胞以逃过识别和杀伤。因此，如果能在肿瘤部位降解ECM，很可能可以让残留的肿瘤细胞摆脱保护从而被识别杀伤。
[0005]再者，从肿瘤预后评判角度来看，对于血液瘤/淋巴瘤，病人可以快速达到部分缓解/完全缓解，而在治疗实体瘤的过程中，肿瘤的缩小常常耗时巨大，需要等待数月以上才能观察到疗效，对病人和医生都是一个挑战，因此，如果加了降解ECM可以快速使病人达到部分缓解/完全缓解，对于双方都是一大福音。
[0006]本专利技术是新一代CAR
‑
T技术，使CAR
‑
T细胞在肿瘤病灶位置特异分泌可降解组成肿瘤外基质成分的酶，如MMP1，MMP2，MMP3，MMP7，MMP8，MMP9，MMP13，Cathepsin L,Cathepsin K，Neutrophil Elastase，Plasmin，Trypsin等，以打破屏障。通过这项新技术，可以使CAR
‑
T细胞更易接触到每一个肿瘤细胞从而进行更有效、更彻底的杀伤。另外由于屏障被打破，缺少了必要信号的肿瘤细胞生长减缓，而CAR
‑
T细胞更易浸润至实体肿瘤内部。因此这项新技术可以提高CAR
‑
T细胞针对实体瘤的疗效，使肿瘤病灶缩小更迅速，让每一个肿瘤细胞失去了保护屏障，提升病人快速实现完全缓解的可能，同时由于消灭肿瘤细胞更彻底，病人复发
风险也随之降低。
[0007]以肠癌为例，在肠癌组织中，表达最高的ECM成分有Collagen VI,硫酸乙酰肝素，Fibrillin，Fibronectin，Collagen I，Collagen IV和Collagen III。在ECM中，Collagen I，Collagen IV和Fibronectin是组成结构的主体，在ECM其中交联形成网状结构并提供了抗张强度，一般认为，降解了Collagen I，Collagen IV和Fibronectin能够破坏ECM的主体结构，从而彻底重塑ECM。本专利技术通过在肠癌CAR
‑
T中使用NFAT
‑
drove Ck和NE在肿瘤部位受激活后释放活性CK和NE，降解肿瘤部位ECM，从而增强CAR
‑
T细胞快速浸润能力，达到更强的杀伤肿瘤效果。
[0008]实施方案涉及包含编码抗原结合分子的多核苷酸和编码靶向一种或多种细胞外基质(ECM)分子的试剂的多核苷酸的修饰细胞。
[0009]在实施方案中，编码靶向一种或多种ECM分子的药剂的多核苷酸包含编码组织蛋白酶K(CK)的多核苷酸和/或编码中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的多核苷酸。
[0010]在实施方案中，编码NE的多核苷酸包含编码NE的多核苷酸和编码IL
‑
2信号结构域的多核苷酸。
[0011]在实施方案中，编码靶向一种或多种ECM分子的药剂的多核苷酸包含编码CK的多核苷酸、编码NE的多核苷酸和编码MMP7的多核苷酸。
[0012]具体实施方案涉及：
[0013]1.一种多核苷酸，其包含编码抗原结合分子的第一多核苷酸和编码靶向一种或多种细胞外基质(ECM)分子的试剂的第二多核苷酸，其中所述多核苷酸包含
[0014](1)编码嵌合抗原受体(CAR)的第一多核苷酸，该第一多核苷酸包含抗原结合分子结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，和
[0015](2)编码以下氨基酸序列的第二多核苷酸：
[0016]SEQ ID NO:7、10和16；或
[0017]SEQ ID NO:7；或
[0018]SEQ ID NO:10；或
[0019]SEQ ID NO:16；或
[0020]SEQ ID NO:7和10；或
[0021]SEQ ID NO:7、16；或
[0022]SEQ ID NO:10和16。
[0023]2.实施方案1的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸包含多核苷酸序列SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9。
[0024]3.实施方案1的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸包含多核苷酸序列SEQ ID NO：10和编码SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23的多核苷酸。
[0025]4.实施方案2或3的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸还包含编码SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：16的多核苷酸。
[0026]5.实施方案1～4的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸还包含多核苷酸序列SEQ ID NO：5和6。
[0027]6.根据实施方案1～5的多核苷酸，其中结合肿瘤抗原的抗原结合分子的抗原结合域选自：TSHR、CD19、CD123、CD22、CD30、CD171、CS
‑
1、CLL
‑
1、CD33、EGFRvIII,GD2,GD3,BCMA,
Tn Ag,PSMA,ROR1,FLT3,FAP,TAG72,CD38,CD44v6,CEA,EPCAM,B7H3,KIT,IL
‑
13Ra2,Mesothelin,IL
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸，其包含编码抗原结合分子的第一多核苷酸和编码靶向一种或多种细胞外基质(ECM)分子的试剂的第二多核苷酸，其中所述多核苷酸包含(1)编码嵌合抗原受体(CAR)的第一多核苷酸，该第一多核苷酸包含抗原结合分子结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，和(2)编码以下氨基酸序列的第二多核苷酸：SEQ ID NO:7、10和16；或SEQ ID NO:7；或SEQ ID NO:10；或SEQ ID NO:16；或SEQ ID NO:7和10；或SEQ ID NO:7、16；或SEQ ID NO:10和16。2.权利要求1的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸包含多核苷酸序列SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：9。3.权利要求1的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸包含多核苷酸序列SEQ ID NO：10和编码SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23的多核苷酸。4.权利要求2或3的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸还包含编码SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：16的多核苷酸。5.权利要求1～4的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸还包含多核苷酸序列SEQ ID NO：5和6。6.权利要求1的多核苷酸，其中结合肿瘤抗原的抗原结合分子的抗原结合域选自：TSHR、CD19、CD123、CD22、CD30、CD171、CS
‑
1、CLL
‑
1、CD33、EGFRvIII,GD2,GD3,BCMA,Tn Ag,PSMA,ROR1,FLT3,FAP,TAG72,CD38,CD44v6,CEA,EPCAM,B7H3,KIT,IL
‑
13Ra2,Mesothelin,IL
‑
11Ra,PSCA,PRSS21,VEGFR2,LewisY,CD24、PDGFR
‑
β、SSEA
‑
4、CD20、叶酸受体α、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、NCAM、前列腺酶、PAP、ELF2M、肝配蛋白B2、IGF
‑
I受体、CAIX、LMP2、gp100、bcr
‑
abl、酪氨酸酶、EphA2、岩藻糖基GM1、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o
‑
乙酰基
‑
GD2、叶酸受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD179a、聚乳酸、ALK,GloboH,NY
‑
BR
‑
1,UPK2,HAVCR1,ADRB3,PANX3,GPR20,LY6K,OR51E2,TARP,WT1,NY
‑
ESO
‑
1,LAGE
‑
1a,MAGE
‑
A1,legumain,HPV E6,E7,MAGE A1,ETV6
‑
AML,精子蛋白17,XAGE1,Tie 2,MAD
‑
CT
‑
1,MAD
‑
CT
‑
2,Fos相关抗原1,p53,p53突变体,prostein,survivin和端粒酶,PCTA
‑
1/Galectin 8,梅兰/MAR T1、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML
‑
IAP、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、细胞周期蛋白B1、MYCN、RhoC、TRP
‑
2、CYP1B1、BORIS、SART3、PAX5、OY
‑
TES1、LCK、AKAP
‑
4、SSX2、RAGE
‑
1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠羧基酯酶、mut hsp70
‑
2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭毓哲，曹志远，丁威，韩贵廷，肖磊，田乐，
申请(专利权)人：美国斯丹赛生物技术公司，
类型：发明
国别省市：