含有间充质干细胞的活性因子敷料及其制备方法技术

本发明专利技术涉及医用生物敷料技术领域，且公开了一种含有间充质干细胞的活性因子敷料及其制备方法。所述含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备方法，包括以下步骤：将羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖、生理盐水混合，制得材料溶液；将磺化多糖、去离子水、生物活性因子混合制得活性因子组合物；将间充质干细胞悬液、材料溶液混合制得细胞材料混合液；将细胞材料混合液与活性因子组合物混合制得含有间充质干细胞的活性因子敷料。本发明专利技术的含有间充质干细胞的活性因子敷料具有加速伤口愈合修复、止血、镇痛抑菌等作用。镇痛抑菌等作用。镇痛抑菌等作用。

【技术实现步骤摘要】
含有间充质干细胞的活性因子敷料及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医用生物敷料
，具体为含有间充质干细胞的活性因子敷料及其制备方法。

技术介绍

[0002]敷料，是包伤的用品，用以覆盖疮、伤口或其他损害的材料。随着对创面愈合过程的病理生理的深入研究，人们对创面愈合过程的理解也越来越深刻，从而导致了医用创面敷料的不断改进与发展。由于伤口的种类繁多，且每一个伤口在其愈合的不同阶段对敷料的要求也不同。而目前现有的敷料主要具备的功能是抑菌、加快愈合等，缺乏对损伤局部创面的修复。
[0003]大量的临床前和临床试验表明，间充质干细胞治疗可以加速伤口愈合，为各种难以愈合的慢性伤口的治疗带来了希望。在组织工程与再生医学领域，除了生物材料之外，种子细胞也是极为关键的一个要素。间充质干细胞具有较强的增殖分化能力，同时不存在社会伦理争议，已成为组织工程中的首选种子细胞。
[0004]生物活性因子，是指来自生物体内的对生命现象具有影响的微量或少量物质，主要是生物活性多肽和细胞因子两大类。细胞因子是指由活化免疫细胞或非免疫细胞(包括骨髓、胸腺中的基质细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等)合成分泌的能调节细胞生理功能，介导炎症反应、参与免疫应答和组织修复等多种生物学效应的小分子多肽，它们与免疫球蛋白和补体一样属于分泌型免疫分子。生长因子属于细胞因子，是一类刺激细胞生长和增殖的细胞外多肽信号分子。
[0005]申请号为CN112891617A的中国专利“含有间充质干细胞的液体医用生物功能敷料及其制备方法”提出了负载间充质干细胞作为损伤修复的基质，制备液体医用生物功能敷料。本方法利用间充质干细胞不仅能促进损伤组织的再生与修复，还拥有良好的免疫调节能力，通过调控免疫细胞的增殖分化和功能状态，调节炎症因子水平，以应对各种炎症相关疾病。但该敷料中功能性物质单一，应用范围不广。
[0006]申请号为CN102895704B的中国专利“一种促进成骨和血管化的生物活性因子组合物”提出了利用生物活性因子、磺化多糖来作为功能性物质，充分发挥了生物活性因子诱导间质细胞分化为骨或软骨、诱导上皮发育、在体内诱导血管新生、诱导骨形成等作用。但该组合物需冻干低温保存，且功能范围较窄，应用范围不广。

技术实现思路

[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备方法，包括以下步骤：
[0008]步骤(1)制备间充质干细胞悬液、材料溶液及活性因子组合物；
[0009]其中，制备间充质干细胞悬液包括以下步骤：
[0010]将装有脐带的采集管用酒精喷壶喷淋并移入生物安全柜内，再用止血钳将脐带取
出放入生理盐水中，润洗脐带，尽量将脐带表面附着的血块、血管里的血块以及血迹除掉，用剪刀剪掉头尾各一段长度；将清洗好的脐带转移至70％医用酒精中杀菌一段时间后，及时转入到生理盐水中，润洗除去70％医用酒精；在生理盐水中将脐带剪碎，得到脐带组织小块；将脐带组织小块接种至细胞培养瓶中，培养瓶放置在细胞培养箱中静置一段时间，静置后向培养瓶内加入间充质干细胞培养液，放置细胞培养箱中，继续培养一段时间，取出培养瓶中组织块固体，弃去；向细胞培养瓶中再加入间充质干细胞培养液，在细胞培养箱中培养一段时间后，吸弃培养瓶中培养液，用磷酸盐缓冲液洗涤，吸弃洗涤液，加入胰蛋白酶
‑
EDTA消化液，静置消化一段时间，加入与消化液等体积的胎牛血清终止细胞消化作用，再加入磷酸盐缓冲液，得到间充质干细胞悬液；
[0011]制备材料溶液包括以下步骤：
[0012]将羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖、生理盐水混合，制得材料溶液；
[0013]制备活性因子组合物包括以下步骤：
[0014]将磺化多糖溶解于去离子水中，配制成磺化多糖水溶液，再加入生物活性因子，混合均匀，即得到活性因子组合物；
[0015]步骤(2)细胞材料混合液的制备；
[0016]将制得的间充质干细胞悬液、材料溶液混合制得细胞材料混合液；
[0017]步骤(3)含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备；
[0018]将制得的细胞材料混合液与制得的活性因子组合物混合制得含有间充质干细胞的活性因子敷料。
[0019]优选地，所述步骤(1)制备间充质干细胞悬液中，取新生儿新鲜脐带，脐带组织来源为临床健康婴儿娩出后的废弃物，采集之前与产妇及其家属均签署知情同意书，方案经相关流程批准使用。
[0020]优选地，所述步骤(1)制备间充质干细胞悬液中，用止血钳将脐带取出放入30mL生理盐水中；用剪刀剪掉头尾各1.5cm；将清洗好的脐带转移至30mL70％医用酒精中杀菌60s后，及时转入到30mL生理盐水中，润洗除去70％医用酒精，70％医用酒精中无水乙醇和纯化水的体积比为70:30；在30mL生理盐水中将脐带剪碎至1mm3。
[0021]优选地，所述步骤(1)制备间充质干细胞悬液中，将脐带组织小块接种至细胞培养瓶中，底面积75cm2的细胞培养瓶内接种40
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50块组织块，培养瓶放置在37℃、5％二氧化碳、饱和湿度为95％的细胞培养箱中静置4小时，静置后向培养瓶内加入15mL间充质干细胞培养液，间充质干细胞培养液为DMEM/F12、胎牛血清混合液，其中DMEM/F12、胎牛血清体积比为9:1；放置在37℃、5％二氧化碳、饱和湿度为95％的细胞培养箱中，继续培养8
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12天，取出培养瓶中组织块固体，弃去；向细胞培养瓶中再加入15mL间充质干细胞培养液，在37℃、5％二氧化碳、饱和湿度为95％的细胞培养箱中培养3
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5天后，吸弃培养瓶中培养液。
[0022]优选地，所述步骤(1)制备间充质干细胞悬液中，用pH为7.2
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7.4的磷酸盐缓冲液洗涤，吸弃洗涤液，加入0.125％
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0.25％胰蛋白酶
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EDTA消化液1
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3mL，静置消化1
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3min，加入与消化液等体积的胎牛血清终止细胞消化作用，再加入pH为7.2
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7.4的磷酸盐缓冲液20
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40mL，得到间充质干细胞悬液；其中pH为7.2
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7.4的磷酸盐缓冲液的制备方法是：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50mL与0.2mol/L氢氧化钠溶液35mL，加新沸过的冷水稀释至200mL，摇匀即得pH为7.2的磷酸盐缓冲液；取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g，加水使溶解成
1000mL，调节pH值至7.3，即得pH为7.3的磷酸盐缓冲液；取磷酸二氢钾1.36g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液79mL，用水稀释至200mL，即得pH为7.4的磷酸盐缓冲液。
[0023]优选地，所述步骤(1)制备材料溶液中，将羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖、生理盐水混合，使羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖的含量分别为20mg/mL、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)制备材料溶液与活性因子组合物；制备材料溶液包括以下步骤：将羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖、生理盐水混合，制得材料溶液；制备活性因子组合物包括以下步骤：将磺化多糖溶解于去离子水中，配制成磺化多糖水溶液，再加入生物活性因子，混合均匀，即得到活性因子组合物；步骤(2)细胞材料混合液的制备；将间充质干细胞悬液、材料溶液混合制得细胞材料混合液；步骤(3)含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备；将制得的细胞材料混合液与制得的活性因子组合物混合制得含有间充质干细胞的活性因子敷料。2.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)制备材料溶液中，将羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖、生理盐水混合，使羧甲基壳聚糖、透明质酸钠、海藻糖的含量分别为20mg/mL、1.5mg/mL、5mg/mL。3.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)制备活性因子组合物中，将磺化多糖溶解于去离子水中，配制成10μg/mL磺化多糖水溶液，按生物活性因子与磺化多糖的质量比为1:(0.1
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0.2)加入生物活性因子；磺化多糖包括硫酸肝素，生物活性因子包括质量比为1:1:1的BMP
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7、人血管内皮生长因子、重组人表皮生长因子组成。4.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的活性因子敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的间充质干细胞悬液的制备方法是：将装有脐带的采集管用酒精喷壶喷淋并移入生物安全柜内，再用止血钳将脐带取出放入生理盐水中，润洗脐带，尽量将脐带表面附着的血块、血管里的血块以及血迹除掉，用剪刀剪掉头尾各一段长度；将清洗好的脐带转移至70％医用酒精中杀菌一段时间后，及时转入到生理盐水中，润洗除去70％医用酒精；在生理盐水中将脐带剪碎，得到脐带组织小块；将脐带组织小块接种至细胞培养瓶中，培养瓶放置在细胞培养箱中静置一段时间，静置后向培养瓶内加入间充质干细胞培养液，放置细胞培养箱中，继续培养一段时间，取出培养瓶中组织块固体，弃去；向细胞培养瓶中再加入间充质干细胞培养液，在细胞培养箱中培养一段时间后，吸弃培养瓶中培养液，用磷酸盐缓冲液洗涤，吸弃洗涤液，加入胰蛋白酶
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EDTA消化液，静置消化一段时间，加入与消化液等体积的胎牛血清终止细胞消化作用，再加入磷酸盐缓冲液，得到间充质干细胞悬液；制备间充质干细胞悬液中，取新生儿新鲜脐带，脐带组织来源为临床健康婴儿娩出后的废弃物，采集之前与产妇及其家属均签署知情同意书，方案经相关流程批准使用。5.根据权利要求4所述的间充质干细胞悬液的制备方法，其特征在于，间充质干细胞悬液的制备中，用止血钳将脐带取出放入30mL生理盐水中；用剪刀剪掉头尾各1.5cm；将清洗好的脐带转...

【专利技术属性】
技术研发人员：田梓涵，李玖霞，李其桓，
申请(专利权)人：河北本源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：