T细胞受体融合蛋白及应用制造技术

本发明专利技术的T细胞受体融合蛋白，包括第一链和第二链，第一链包括信号肽、第一抗体结构域以及γ链恒定区，第二链包括信号肽、第二抗体结构域以及δ链恒定区；通过上述方式，该T细胞受体融合蛋白与T细胞内源表达的CD3亚基(ε，δ，γ，ζ)具有更高的亲和力，当该T细胞受体融合蛋白与T细胞内源表达的CD3亚基形成复合体且被靶抗原激活时，有利于增强T细胞相关信号转导。转导。转导。

【技术实现步骤摘要】
T细胞受体融合蛋白及应用


[0001]本专利技术涉及免疫学领域，尤其涉及一种T细胞受体融合蛋白及应用。

技术介绍

[0002]CAR
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T疗法从癌症病人身上分离免疫T细胞，利用基因工程技术为T细胞引入一个能够识别肿瘤细胞并同时激活T细胞的嵌合抗原受体，然后将扩增好的CAR
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T细胞回输到病人体内,起到杀伤肿瘤细胞作用。近年来，CAR
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T细胞疗法在治疗B细胞白血病和淋巴瘤临床试验中有着显著的疗效，显示出持续的疾病缓解效果，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。
[0003]1989年，美国科学院院刊PNAS报道了第一代CAR
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T疗法。T细胞激活是通过CD3z链或FceRIg上的酪氨酸激活基序完成的。CD3z链能够提供T细胞激活、裂解靶细胞、调节IL
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2分泌以及体内发挥抗肿瘤活性所需的第1信号。但第一代CAR改造T细胞的抗肿瘤活性在体内受到了限制，T细胞增殖减少最终导致T细胞的凋亡。虽然很快投入临床试验，但疗效却差强人意。第二代CAR
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T细胞在胞内增加了一个新的共刺激信号，与第一代CAR相比，抗原特异性不变，T细胞增殖、细胞因子分泌增加，增加对肿瘤细胞裂解的记忆效应以及CAR介导的杀伤效应。目前，用于临床治疗研究的主要为第2代CART细胞技术，常用的共刺激分子为CD28和CD137(4
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1BB)。
[0004]虽然第二代CAR
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T细胞免疫疗法在治疗白血病、淋巴瘤以及骨髓瘤等恶性血液肿瘤中取得了重大突破，但是CAR
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T细胞治疗过程中常常发生细胞因子释放综合征等副作用，导致危险的高热和急剧的血压下降，严重威胁到混着的生命健康安全。在美国虽然有2款CAR
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T药物上市，但是只有少数顶级的医院、具有完备的预案及抢救设备实施才可以使用，从而限制了CAR
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T药物的应用范围。为了增加肿瘤特异性T细胞治疗的安全性，一种可行的方法是对嵌合抗原受体的结构进行改进或者替换，使之更类似天然T细胞攻击肿瘤细胞的机制，从而降低细胞因子风暴风险。
[0005]TCR是由两条不同肽链构成的异二聚体，根据T细胞抗原受体类型的不同，T细胞分为α/β型T细胞和γ/δ的T细胞。α/β型T细胞，其表面的T细胞受体(TCRs)由α链和β链两条糖蛋白链组成，γ/δ其TCRs由γ链和δ链组成。每条肽链又可分为可变区(V区)和恒定区(C区)两部分，其中恒定区又包括胞外区、跨膜区和胞内末端三部分；其特点是胞内区很短。TCR分子属于免疫球蛋白超家族，其抗原特异性存在于V区。任一T细胞只表达α/β或γ/δ之一。人类外周血中大多数T细胞为α/βT细胞，γ/δT细胞仅占外周血的0.5％
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5％，主要存在于上皮和粘膜组织，比如皮肤、肠道等。
[0006]TCR受体α/β或γ/δ能与含有γ/ε、δ/ε和ζ/ζ六个亚基的共受体CD3组成TCR
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CD3受体复合物，其中α/β或γ/δ主要功能是识别结合抗原，CD3分子的主要功能是参与TCR/CD3复合体的装配和稳定以及信号转导。
[0007]美国T细胞受体治疗公司的专利201680032042将抗原结合结构域与TCRα/β链融合，构建的重组TCR受体在肿瘤抗原刺激的条件下可以激活T细胞，启动肿瘤杀伤作用。但是
如上文所述，人体内95％左右的T细胞都存在α链和β链。这种重组TCR受体容易与T细胞内存在的α链和β链发生错配，从而导致脱靶效应，增加T细胞免疫治疗的风险。国内外大量研究结果表明，即使通过基因转导技术，使γ/δT细胞表达TCRα或者β链，γ链依然只能与δ链发生配对(Michael T Bethune,Marvin H Gee Mario Bunse,etc.Domain
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swapped T cell receptors improve the safety of TCR gene therapy[J].eLife,2016；Jonathan Fisher,imageJohn Anderson.Engineering Approaches in Human Gamma Delta T Cells for Cancer Immunotherapy[J].Front.Immunol,2018)。由于体内T细胞绝大多数都表达TCRα链和β链，基于α链和β链构建的人工TCR受体容易与原有的α链和β链发生错配，增加细胞过继性免疫细胞治疗风险。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种T细胞受体融合蛋白及应用，以解决现有技术中T细胞受体融合蛋白与T细胞内源表达的CD3亚基亲和力低导致的不利于增强T细胞相关信号转导的技术问题。
[0009]本专利技术的技术方案如下：提供一种T细胞受体融合蛋白，包括：
[0010]第一链，包括信号肽、第一抗体结构域以及γ链恒定区；
[0011]第二链，包括信号肽、第二抗体结构域以及δ链恒定区。
[0012]可选地，所述第一抗体结构域和所述第二抗体结构域与靶抗原的同一抗原表位特异性结合；或，所述第一抗体结构域和所述第二抗体结构域分别与靶抗原的不同抗原表位特异性结合；或，所述第一抗体结构域和所述第二抗体结构域分别与不同靶抗原的抗原表位特异性结合。
[0013]可选地，所述靶抗原选自CD19，CD20，CD22，EGFR，Her2，PSCA，CD123，CEA，FAP，CD133，EGFRVIII，BCMA，GPCR5D，PSMA，CA125，EphA2，C
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met，L1CAM，VEGFR，CS1，ROR1，EC，NY
‑
ESO
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1，MUC1，MUC16，mesothelin，LewisY，GPC3，GD2，EPG，DLL3，CD99，5T4，CD22，CD30，CD33，CD38，CD70，CD138，CD171，MAGE3，MAGE4，AFP或GD2。
[0014]可选地，所述γ链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，所述δ链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
[0015]所述第一抗体结构域包括第一抗体轻链可变区、第一抗体重链可变区以及连接所述第一抗体轻链可变区和所述第一抗体重链可变区的连接序列；
[0016]所述第二抗体结构域包括第二抗体轻链可变区、第二抗体重链可变区以及连接所述第二抗体轻链可变区和所述第二抗体重链可变区的连接序列。
[0017]可选地，所述第一抗体和所述第二抗体相同；
[0018]所述第一链的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述第二链的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；或，所述第一链的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示，所述第二链的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体融合蛋白，其特征在于，包括：第一链，包括信号肽、第一抗体结构域以及γ链恒定区；第二链，包括信号肽、第二抗体结构域以及δ链恒定区。2.根据权利要求1所述的T细胞受体融合蛋白，其特征在于，所述第一抗体结构域和所述第二抗体结构域与靶抗原的同一抗原表位特异性结合；或，所述第一抗体结构域和所述第二抗体结构域分别与靶抗原的不同抗原表位特异性结合；或，所述第一抗体结构域和所述第二抗体结构域分别与不同靶抗原的抗原表位特异性结合。3.根据权利要求2所述的T细胞受体融合蛋白，其特征在于，所述靶抗原选自CD19，CD20，CD22，EGFR，Her2，PSCA，CD123，CEA，FAP，CD133，EGFRVIII，BCMA，GPCR5D，PSMA，CA125，EphA2，C
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met，L1CAM，VEGFR，CS1，ROR1，EC，NY
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ESO
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1，MUC1，MUC16，mesothelin，LewisY，GPC3，GD2，EPG，DLL3，CD99，5T4，CD22，CD30，CD33，CD38，CD70，CD138，CD171，MAGE3，MAGE4，AFP或GD2。4.根据权利要求1所述的T细胞受体融合蛋白，其特征在于，所述γ链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，所述δ链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第一抗体结构域包括第一抗体轻链可变区、第一抗体重链可变区以及连接所述第一抗体轻链可变区和所述第一抗体重链可变区的连接序列；所述第二抗体结构域包括第二抗体轻链可变区、第二抗体重链可变区以及连接所述第二抗体轻链可变区和所述第二抗体重链可变区的连接序列。5.根据权利要求4所述的T细胞受体融合...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅志超，余涛，余晓云，
申请(专利权)人：余晓云，
类型：发明
国别省市：