本发明专利技术公开了一种检测细胞外囊泡内含物的装置、方法、存储介质、处理设备和检测试剂盒。一种检测细胞外囊泡内含物的装置，包括：分析单元，用于基于皂苷处理前后生物样品中的目标内含物的含量变化，获得所述生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量。采用本申请的方法对生物样品进行检测时，方法的灵敏度和特异性均较高，诊断效力高；此外，本申请的检测方法方便快捷，不需要对细胞外囊泡进行分离，仅仅使用破膜剂处理生物样品即可，无需其他特殊处理，更易于向临床推广。更易于向临床推广。更易于向临床推广。
【技术实现步骤摘要】
一种检测细胞外囊泡内含物的装置、方法、存储介质、处理设备和检测试剂盒
[0001]本专利技术涉及生物监测领域，特别是涉及一种检测细胞外囊泡内含物的装置、方法、存储介质、处理设备和检测试剂盒。
技术介绍
[0002]细胞外囊泡(Extracellular vesicles)是几乎所有细胞均能产生和分泌的的膜性囊泡，在疾病的诊断和治疗中具有重要的应用。细胞外囊泡富含来源细胞的生物分子，如蛋白、核酸脂类，因此可以反映来源细胞的状态。研究表明，细胞外囊泡可用于疾病的标志物研究。
[0003]细胞外囊泡指从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的双层膜结构的囊泡状小体，直径从40nm到1000nm不等。胞外囊泡主要由微囊泡(Microvesicles,MVs)和外泌体(Exosomes,Exs)组成，微囊泡是细胞激活、损伤或凋亡后从细胞膜脱落的小囊泡，直径约为100nm～1000nm。外泌体由细胞内的多泡小体(Multivesicular bodies)与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外，直径约为40nm～100nm。细胞外囊泡广泛存在于细胞培养上清以及各种体液(血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁)中，携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类、DNA、mRNA、miRNA等，参与细胞间通讯、细胞迁移、血管新生和免疫调节等过程。在糖尿病、心血管疾病、艾滋病、慢性炎症疾病以及癌症中都发现细胞外囊泡水平的升高，它们很有可能成为这类疾病的诊断标志物，因此，对细胞外囊泡进行准确的定性和定量研究显得尤为重要。
[0004]分离高纯度及高回收率的细胞外囊泡对将其作为疾病标志物的研究至关重要。但遗憾的根据国际胞外囊泡协会的研究表明，虽然目前存在多种分离胞外囊泡的方法如超速离心法、尺寸排阻色谱法、基于聚合物的沉淀技术等，但能够同时兼顾高纯度和高回收率的方法还没有报道。
[0005]细胞外囊泡来源的内含物如细胞内含物一样在膜表面和管腔内部均有分布。目前已开发多种方法检测细胞外囊泡表面的蛋白。特别是纳米流式技术的发展，可规避细胞外囊泡分离直接检测其表面的蛋白分子。然而，脂质膜的保护作用导致不能够直接检测细胞外囊泡腔内的内含物如蛋白等。
技术实现思路
[0006]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种检测细胞外囊泡内含物的装置、方法、存储介质、处理设备和检测试剂盒，用于解决现有技术中细胞外囊泡需要先提取再检测的问题。
[0007]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术是通过以下技术方案获得的。
[0008]本专利技术目的之一在于提供一种检测细胞外囊泡内含物的装置，包括：
[0009]分析单元，用于基于皂苷处理前后生物样品中的目标内含物的含量变化，获得所
述生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量。
[0010]本申请中采用皂苷与细胞膜上的类固醇结合生成水不溶性的分子复合物，从而破坏细胞膜的完整性并在细胞膜上形成小孔，使细胞外囊泡内含有的生物活性分子如蛋白质从小孔中释放出来，避免了检测过程中细胞外囊泡的损失，同时提高了检测灵敏度和方法重复性，满足临床检测的需要。此外，采用本申请的装置检测细胞外囊泡内含物，可实现对细胞外囊泡直接检测，不需要对细胞外囊泡进行先提取再检测，更加方便快捷，易于临床中应用。
[0011]优选地，所述装置还包括数据获取模块，用于获取皂苷处理前生物样品中的目标内含物的含量数据及皂苷处理后生物样品中的目标内含物的含量数据。
[0012]优选地，所述分析单元中，生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量的计算公式为
[0013]C
待
＝C
处理后
‑
C
处理前
[0014]式中，C
待
—表示生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量；
[0015]C
处理后
—表示皂苷处理后，生物样品中目标内含物的含量；
[0016]C
处理前
—表示皂苷处理前，生物样品中目标内含物的含量。
[0017]优选地，所述皂苷选自茶皂苷、薯蓣皂苷、干草皂苷、钩藤皂苷、蒺藜皂苷、柴胡皂苷、重楼皂苷、麦冬皂苷、刺五加皂苷、人参皂苷、大豆皂苷、黄芪皂苷、三七皂苷和毛地黄皂苷中的一种或多种。
[0018]更优选地，所述皂苷为毛地黄皂苷。
[0019]优选地，所述皂苷处理指将皂苷与生物样品混合处理，混合处理时间为1min～10min。
[0020]优选地，所述皂苷处理时，皂苷与生物样品的质量比为(0.1～3)：100。
[0021]更优选地，所述皂苷与生物样品的质量比可以为(0.1～1)：100，也可以为(0.5～1.5)：100，也可以为(1～2)：100，也可以为(1.5～2.5)：100，也可以为(2.0～3.0)：100。
[0022]优选地，所述生物样品选自血清、血浆、尿液、唾液、细胞培养上清液、乳汁、脑脊液、关节液、羊水、腹水、鼻灌洗液、淋巴液、精液和组织消化液中的一种或多种。
[0023]优选地，所述目标内含物选自鳞状细胞癌抗原、前列腺特异性抗原、甲胎蛋白、糖类抗原125、癌抗原15
‑
3、癌抗原CA50、糖类抗原242、糖类抗原19
‑
9、神经元特异性烯醇化酶、糖类抗原242、细胞角蛋白21
‑
1片段、癌胚抗原、胃泌素释放肽前体、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶和tau蛋白中的一种或多种。
[0024]优选地，所述目标内含物的含量数据基于以下任一的方法获得：采用化学发光免疫法、免疫沉淀、免疫电泳、酶联免疫测定、光谱分析、放射免疫分析、电化学发光法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法或胶体金法。
[0025]本专利技术目的之二在于提供一种检测细胞外囊泡内含物的方法，包括如下步骤：
[0026]提供皂苷处理前生物样品中的目标内含物的含量；
[0027]提供所述生物样品经皂苷混合处理后的目标内含物的含量；
[0028]根据皂苷处理前后目标内含物的含量变化，获得所述生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量。
[0029]优选地，所述皂苷选自茶皂苷、薯蓣皂苷、干草皂苷、钩藤皂苷、蒺藜皂苷、柴胡皂
苷、重楼皂苷、麦冬皂苷、刺五加皂苷、人参皂苷、大豆皂苷、黄芪皂苷、三七皂苷和毛地黄皂苷中的一种或多种。
[0030]更优选地，所述皂苷为毛地黄皂苷。
[0031]优选地，所述皂苷混合处理时间为1min～10min。
[0032]优选地，所述皂苷混合处理时，皂苷与生物样品的质量比为(0.1～3)：100。
[0033]更优选地，所述皂苷与生物样品的质量比可以为(0.1～1)：100，也可以为(0.5～1.5)：100，也可以为(1～2)：100，也可以为(1.5～2.5)：100，也可以为(2.0～3.0)：100。
[0034]本申请中皂苷与生物样品的质量比不能太高也不能太低，当皂苷与生物样品的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测细胞外囊泡内含物的装置，其特征在于，包括：分析单元，用于基于皂苷处理前后生物样品中的目标内含物的含量变化，获得所述生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述装置还包括数据获取模块，用于获取皂苷处理前生物样品中的目标内含物的含量数据及皂苷处理后生物样品中的目标内含物的含量数据。3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述分析单元中，生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量的计算公式为C
待
＝C
处理后
‑
C
处理前
式中，C
待
—表示生物样品中细胞外囊泡中目标内含物的含量；C
处理后
—表示皂苷处理后，生物样品中目标内含物的含量；C
处理前
—表示皂苷处理前，生物样品中目标内含物的含量。4.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述皂苷选自茶皂苷、薯蓣皂苷、干草皂苷、钩藤皂苷、蒺藜皂苷、柴胡皂苷、重楼皂苷、麦冬皂苷、刺五加皂苷、人参皂苷、大豆皂苷、黄芪皂苷、三七皂苷和毛地黄皂苷中的一种或多种；和/或，所述皂苷处理指将皂苷与生物样品混合处理，混合处理时间为1min～10min；和/或，所述皂苷处理时，皂苷与生物样品的质量比为(0.1～3)：100；和/或，所述生物样品选自血清、血浆、尿液、唾液、细胞培养上清液、乳汁、脑脊液、关节液、羊水、腹水、鼻灌洗液、淋巴液、精液和组织消化液中的一种或多种；和/或，所述目标内含物选自鳞状细胞癌抗原、前列腺特异性抗原、甲胎蛋白、糖类抗原125、癌抗原15
‑
3、癌抗原CA50、糖类抗原242、糖类抗原19
‑
9、神经元特异性烯醇化酶、糖类抗原242、细胞角蛋白21
‑
1片段、癌胚抗原、胃泌素释放肽前体、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶和tau蛋白中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述目标内含物的含量数据基于以下任一的方法获得：采用化学发光免疫法、免疫沉淀、免疫电泳、酶联免疫测定、光谱分析、放射免疫分析、电化学发光法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法或胶体金法。6.一种检测细胞外囊泡内含物的方法，其特征在于，包括如下步骤：提供皂苷处理前生物样品中的目标内含物的含量；提供所述生物...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈福祥，杨蒙，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：
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