一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法技术

本发明专利技术提出了一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法，包括以下步骤：称取胆木叶加入乙醇溶液制备样品溶液；称取标准品，甲醇溶液溶解，分别制备不同浓度的标准品溶液；超高效液相色谱条件为：色谱柱为WatersAcquity UPLC BEH C

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法


[0001]本专利技术涉及化学分析及检测
，特别涉及一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法。

技术介绍

[0002]胆木Nauclea officinalis为茜草科(Rubiaceae)乌檀属Nauclea L.多年生木本植物，又名山熊胆、熊胆树、乌檀，是我国重点保护的珍稀野生植物物种之一。胆木浑身是宝，其干燥的树干、树枝、树皮、树叶和树根均可入药，性寒味苦，具清热解毒、消肿止痛之效。近年来，针对胆木资源的研究和开发主要集中于胆木树干部分中生物碱类活性成分的分析检测、分离鉴定以及药理活性测定，而对于胆木叶的研究与价值开发是较为匮乏的。
[0003]相关药理研究发现，胆木叶提取物具有抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性及抗氧化、抗炎和镇痛作用。胆木叶活性成分复杂，含有生物碱类化合物、酚酸类化合物、黄酮类化合物等具有药理作用的活性成分。胆木叶作为胆木植物的可再生资源，对其成分的检测分析、挖掘利用，将有可能使胆木叶替代胆木树干部分成为新的可再生药用资源，对深入开发胆木的药用价值，保护胆木植物资源具有巨大的意义。
[0004]目前，关于胆木叶活性成分的定量分析相关报道较少，且相关报道存在检测时间长，操作复杂、有机溶剂消耗大等缺点。此外，对于胆木叶质量控制相关报道中仅仅以异长春花苷内酰胺作为评价指标，其他酚酸类和黄酮类药效成分往往被大多数人或企业所忽视。事实上，酚酸类和黄酮类化合物也具有抗氧化、抗菌抗病毒、保肝利胆等多种药理活性。因此，为了提高和完善胆木叶药材的质量标准，对除异长春花苷内酰胺成分之外的酚酸类和黄酮类活性成分进行研究，显得尤为重要。
[0005]对于药材中活性成分定量分析的技术和手段主要有：薄层色谱法(TLC)、质谱法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、液
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质联用技术(LC
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MS)等，其中以HPLC法最为谱级。超高效液相色谱法(UPLC)是采用小颗粒填料色谱柱(粒径一般小于2μm)和超高压(压力大于105kPa)系统的一种分离技术，相对于HPLC，它更能显著改善色谱峰的分离度和灵敏度，同时可以缩短检测时间、减少有机溶剂的使用等，目前以广泛用于药材的成分分析上。UPLC在胆木药材及其制剂中活性成分分析检测虽已报道，但检测的活性成分种类较少，检测时间较长，且在胆木叶活性成分的研究中未曾报道。因此如何快速、准确地同时测定胆木叶中的多种活性成分的含量，弥补现有胆木叶质量控制技术不够完善和科学的不足，准确、全面地控制胆木叶药材的质量，具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法，该方法能够实现同时测定胆木叶中酚酸、黄酮及生物碱3类活性成分含量的测定，弥补现有药材质量控制技术不够完善，准确、全面地控制胆木叶药材的质量。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法，包括以下步骤：
[0009](1)样品溶液的制备：称取胆木叶加入乙醇溶液制备样品溶液；
[0010](2)标准品溶液的制备：称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、短小蛇根草苷、山奈酚
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O芸香糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C以及异长春花苷内酰胺的标准品，甲醇溶液溶解，分别制备不同浓度的标准品溶液；
[0011](3)UPLC
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PDA分析：
[0012]超高效液相色谱条件为：
[0013]流动相：流动相A为乙腈溶液，流动相B为体积浓度0.35
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0.45％磷酸水溶液；
[0014]采用梯度洗脱方式为：
[0015][0016][0017]检测波长：210
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400nm。
[0018]进一步说明，步骤(1)中，按料液比为1：45
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55，称取胆木叶加入乙醇溶液进行提取，提取液抽滤，滤液过孔径0.22μm微孔滤膜，制备样品溶液。
[0019]进一步说明，所述乙醇溶液的质量浓度为75
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85％；所述提取为涡旋提取，涡旋转速为1800
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2000rpm，提取时间为15
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25min。
[0020]进一步说明，步骤(3)中，色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C
18
。
[0021]进一步说明，步骤(3)中，所述磷酸水溶液体积浓度为0.4％。
[0022]进一步说明，步骤(3)中，柱温为33
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37℃；进样量为0.8
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1.2μL；流速为0.18
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0.22mL/min。
[0023]更进一步说明，柱温为35℃；进样量为2μL；流速为0.2mL/min。
[0024]更进一步说明，步骤(3)中，检测波长为226nm/260nm/325nm。
[0025]本专利技术具有以下优点和积极效果：
[0026]本专利技术所述的同时测定胆木叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、短小蛇根草苷、山奈酚
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O芸香糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C以及异长春花苷内酰胺10种活性成分含量的方法，利用UPLC法，超高效液相色谱法(UPLC)是采用小颗粒填料色谱柱(粒径一般小于2μm)和超高压(压力大于105KPa)系统的一种分离技术，相对于HPLC，它更能显著改善色谱峰的分离度，同时可以缩短检测时间、减少有机试剂的使用等优势。
[0027]本专利技术的检测方法操作简单，具有高灵敏度和精密度、重现性好、稳定性高、回收率好，可实现同时测定胆木叶中所含的酚酸、黄酮和生物碱3类活性成分，弥补了胆木叶药材质量控制技术不够完善和科学的不足，能准确、快速、全面地控制胆木叶药材的质量。
附图说明
[0028]图1为实施例2同时测定胆木叶中酚酸、黄酮及生物碱3类活性成分的样品色谱图(A)和混合对照品色谱图(B)。
具体实施方式
[0029]以下结合附图和具体实施方式对本专利技术作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本专利技术。
[0030]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0031]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到本专利技术所述同时测定胆木叶中10种活性成分含量的方法，包括以下步骤：
[0032](1)样品溶液的制备：精确称取干燥的胆木叶0.5g，放入50mL离心管中，精密加入25mL80％的乙醇，涡旋转速2000rpm条件下处理20min，抽滤，收集滤液，用孔径0.22μm微孔滤膜过滤，即可。
[0033](2)标准品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、短小蛇根草苷、山奈酚
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O芸香糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品溶液的制备：称取胆木叶加入乙醇溶液制备样品溶液；(2)标准品溶液的制备：称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、短小蛇根草苷、山奈酚
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O芸香糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C以及异长春花苷内酰胺的标准品，甲醇溶液溶解，分别制备不同浓度的标准品溶液；(3)UPLC
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PDA分析：超高效液相色谱条件为：流动相：流动相A为乙腈溶液，流动相B为体积浓度0.35
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0.45％磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式为：检测波长：210
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400nm。2.根据权利要求1的一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，按料液比为1：45
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55，称取胆木叶加入乙醇溶液进行提取，提取液抽滤，滤液过孔径0.22μm微孔滤膜，制备样品溶液。3.根据权利要求2的一种同时检测胆木叶中10种活性成分含量的方法，其特征在于，所述乙醇溶液的体积浓度为75
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85％；所述提取为涡旋提取，涡旋转速为1800
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【专利技术属性】
技术研发人员：魏建和，樊小红，陈德力，赵祥升，王德立，吕菲菲，李思鹏，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，
类型：发明
国别省市：