本发明专利技术提供用于鉴定降香品种的SSR分子标记的引物组及应用，先提取降香种苗的DNA，再用本发明专利技术特异SSR引物组进行PCR扩增，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离条带，染色，即可根据分离出的条带情况鉴定出降香品种。利用上述引物组鉴定降香品种，无需等到心材形成，在苗期即可准确鉴定出降香优良品种，加快降香林木育种的速度，有效解决降香野生资源匮乏，心材形成周期长无法提前确定品种等问题，具有巨大的社会和经济效益。社会和经济效益。社会和经济效益。
【技术实现步骤摘要】
用于鉴定降香品种的SSR分子标记的引物组及应用
[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及用于鉴定降香品种的SSR分子标记的引物组及应用。
技术介绍
[0002]降香檀(Dalbergia odorifera T.chen)，为豆科(Leguminosae)黄檀属(Dalbergia)乔木，多年生木本植物，国产降香唯一来源树种。降香檀常作为园林绿化植物，其心材是传统珍稀名贵中药，具有行气活血、止痛、抗炎、抗菌等功效。同时，还是五属八类29种名贵红木之一，为古代道教的十大名香之一，被誉为“百香之首”。由于其心材具有巨大的经济和文化价值，导致野生资源遭受严重破坏趋于枯竭，被列为国家二级重点保护野生植物，2017年被列入《濒危野生动植物物种国际贸易公约》(CITES)附录II。
[0003]近三十余年降香檀人工种植面积暴增，除道地产区海南外，已在广东、广西、云南，浙江、四川、江西等地引种成功并大面积种植，全国总面积已达到60多万亩。苗期降香檀与海南黄檀等近缘物种相似，极难分辨，通常要到降香檀心材形成后才能通过心材颜色、外观等指标进行分辨。因降香檀心材形成缓慢，一般7
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10年才开始形成，成材需三四十年以上，且只能砍树才能辨认心材，为广大种植户带来巨大经济损失。目前降香檀还未开展系统的选育工作，通过对海南降香檀资源调查发现，降香檀生长参差不齐，且心材产量和心材品质存在显著差异，民间一直有糠黎和油黎之分，这将成为制约降香檀人工林可持续发展的重要因素。如何快速鉴定降香檀品种目前没有很好的方法。
[0004]简单重复序列SSR(Simple Sequence Repeats)标记是由1
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8bp的核心序列串联重复多次组成的寡核苷酸序列，是发展比较成熟的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术。SSR标记具有多态性丰富、位点广泛覆盖基因组、片段简单、扩增容易且稳定、检测自动化等优点，非常适合物种的鉴定和品种选育。有研究利用SSR分子标记鉴定降香檀和其他黄檀属植物，但未见关于利用SSR分子标记进行不同地理区域降香品种鉴定的研究报道。
技术实现思路
[0005]鉴于现有技术的不足，本专利技术提出用于鉴定降香品种的SSR分子标记的引物组及应用。
[0006]本专利技术技术方案如下：
[0007]提供了一组用于鉴定降香品种的SSR分子标记的引物组，包括15对引物；
[0008]引物对1由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列组成；
[0009]引物对2由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的序列组成；
[0010]引物对3由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的序列组成；
[0011]引物对4由SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的序列组成；
[0012]引物对5由SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的序列组成；
[0013]引物对6由SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的序列组成；
[0014]引物对7由SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的序列组成；
[0015]引物对8由SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的序列组成；
[0016]引物对9由SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的序列组成；
[0017]引物对10由SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示的序列组成；
[0018]引物对11由SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示的序列组成；
[0019]引物对12由SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示的序列组成；
[0020]引物对13由SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示的序列组成；
[0021]引物对14由SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示的序列组成；
[0022]引物对15由SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示的序列组成。
[0023]另一方面，本专利技术还提供了所述引物组在降香品种鉴定中的应用。
[0024]进一步的，其可以用于苗期鉴定降香品种。
[0025]与现有技术相比，本专利技术的有益成果在于：
[0026]本专利技术提供的引物组可以用于筛选降香特异品种，为发现新的优质品种提供有效手段。利用该引物组可以将具有紫色心材的降香种苗和黄色心材的降香种苗区分开。
[0027]利用本专利技术的引物组，无需等到心材形成，在苗期即可准确鉴定出能结出紫色心材的降香种苗，鉴定准确率高，能够保证树木成材后心材品质好，明确种植品种，减少种植户种植十余年的风险，具有重大的经济效益，对区分油黎和糠黎，油黎品种的推广具有重大的现实意义。
附图说明
[0028]图1：DNA样品琼脂糖凝胶电泳检测结果；(左图：样品DNA电泳检测结果；右图：Marker条带示意图)
[0029]图2：UPGMA法构建的SSR聚类图。
具体实施方式
[0030]为使本领域技术人员更好的理解本专利技术
技术实现思路
，下面结合具体实施例和附图对本专利技术做进一步的说明。
[0031]实施例1筛选SSR特异引物
[0032]从道地产区收集紫油黎和糠黎品种，利用DNA提取试剂盒从叶片中提取DNA。进行叶片转录组测序，利用MISA等软件查找、定位和辨别SSR位点，筛选潜在的SSR位点，从中挑选出500对SSR引物进行降香檀SSR多态性引物筛选。
[0033]具体步骤如下：(1)提取降香檀叶片DNA为模板进行PCR扩增(图1)，PCR反应体系为10μl，包括基因组DNA，1μl 10μmol/L引物，1μl 10
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PCR Buffer，0.8μl 2.5mmol/L dNTP，0.5U TaqDNA聚合酶，超纯水补足至10μl。反应程序为94℃预变性5min，1个循环；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，运行35个循环，72℃延伸10min，4℃保存；(2)扩增完成的PCR产物，取2uL进行2％琼脂糖凝胶电泳检测，参照Marker比对各位点扩增片段大小和浓度是否在正常范围；(3)取1uL荧光PCR产物用超纯水稀释30倍，取1uL稀释后的荧光PCR扩增产物，加入9ul混有10％Liz 500内标的去离子甲酰胺，放在PCR仪上95℃变性5min，快速冷却后，4000rpm离心10s，上ABI 3730xL基因分析仪进行荧光毛细管电泳检测；(3)数据分析：荧
光毛细管电泳结果使用峰图分析软件eneMarker 2.0读取荧光PCR扩增片段大小，得到等位基因分型表及分型峰图。最终筛选获得15对降香檀核心引物(表1)。
[0034]表1. 15个降香檀核心引物
[0035]引物名称引物序号重复单元上游引物下游引物实际大小荧光95bSEQ ID 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.用于鉴定降香品种的SSR分子标记的引物组，其特征在于，包括15对引物；引物对1由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列组成；引物对2由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的序列组成；引物对3由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的序列组成；引物对4由SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的序列组成；引物对5由SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的序列组成；引物对6由SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的序列组成；引物对7由SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的序列组成；引物对8由SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的序列组成；引...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟慧，李佳文，祝远静，何文杰，杨云，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，
类型：发明
国别省市：
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