一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1.预处理：将赤嘴鳘干鱼胶用30倍的清水清分两次洗干净后，加入干鱼胶重量20倍体积的纯化水，4

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽及其制备方法


[0001]本专利技术涉及鱼胶肽制备领域，具体为一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽制备方法。

技术介绍

[0002]鱼胶，其实就是鱼鳔的干制品，富胶质，故名鱼胶，也有人叫花胶。中国人从鱼中剖摘 鱼肚食用，可追溯至汉朝之前。1600多年前的《齐民要术》就记载有现今之所谓鱼肚。鱼胶 与燕窝、鱼翅齐名，是八珍之一，素有海洋人参之誉。它的主要成分为胶原蛋白、多种维生 素及钙、锌、铁、硒等多种微量元素。其蛋白质含量高达84.2％，脂肪仅为0.2％，是理想的 高蛋白低脂肪食品。
[0003]赤嘴鳘是一种深海鱼类，生活在从没有受到污染的深水海洋，主要分布在北太平洋西部、 广东南澳岛周边海，属于珍贵鱼种，具有很高的营养价值，赤嘴鳘鱼胶更是鱼类中的精品。
[0004]目前除少部分鱼胶直接被食用或加工为干制品外，大部分被当做废弃物丢弃，造成大量 的资源浪费和严重的环境污染。胶原蛋白肽是胶原蛋白经加工得到的一系列由3～20个氨基 酸组成的多肽，多项研究表明，鱼胶可以通过酶解制备鱼胶肽。
[0005]王斌等通过酶解制备了一种鲩鱼鱼鳔降血脂寡肽(专利申请号：201711013006.2)，并对 其降血脂作用进行了验证。同年，王斌等通过酶解制备了一种鲩鱼鱼鳔抗氧化肽(专利申请 号：201711013000.5)，并对其抗氧化作用进行了验证。此外，常虹等、涂宗财等、李娜等、 郑婷婷等也分别通过蛋白酶从鱼鳔中制备了得到了一种抗氧化肽。多数研究主要集中在通过 酶解等手段制备得到了鱼胶肽，但通过其他方式制备鱼胶肽的研究较少，且发现制备的鱼胶 肽也仅局限在抗氧化和降血脂的生理活性。
[0006]刘姝等通过接种米曲霉，利用米曲霉发酵制备鱼鳔得到了一种具有抗氧化活性的鱼胶肽， 通过发酵64小时后，经超滤制备得到由5-12个氨基酸残基组成鱼胶肽片段抗氧化性活性最 强，其相对应的分子质量分布在1000～3000D之间。
[0007]糖基化是发生在生物环境内的非酶促反应，它能够在蛋白质、DNA、和脂类等大分子中插 入糖链。而这些反应直接导致了这些生物大分子变异或失活，糖基化在很多疾病以及衰老进 程中发挥着重要的作用。晚期糖基化终末产物(AGEs)是过量的糖和蛋白质结合的产物，在 体内有两个来源，一是过量的糖和蛋白质在体内合成AGEs，二是通过进食将食物中存在的 AGEs摄入体内。AGEs能够和身体的组织细胞相组合并破坏它们。研究证明：AGEs会加速人 体的衰老，使皮肤变差出现皱纹等之外，还会引起退化性脑疾病、心脏功能障碍、糖尿病并 发症等疾病。所以AGEs也是全球医学界最为热门的领域之一，有众多的科研机构、大学、医 院以及制药公司纷纷加入研究AGEs的行列，以期通过研究AGEs的抑制剂，找到天然的抗糖 基化成分。

技术实现思路

[0008]本专利技术为了解决现有技术中抗糖基化对人体的影响的问题，提供一种具有抗糖基化作用 的赤嘴鳘鱼胶肽制备方法，能够使得人们可以通过服用鱼胶肽补充人体胶原蛋白的同时，还 可以通过赤嘴鳘鱼胶肽的抗糖基作用，达到减缓衰老、改善皮肤的目的。
[0009]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0010]一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
[0011]S1.预处理：将赤嘴鳘干鱼胶用30倍的清水清分两次洗干净后，加入干鱼胶重量20倍体 积的纯化水，4-10℃泡发8-12h，泡发后用匀浆机进行匀浆；
[0012]S2.酶解脱脂：向匀浆液中加入匀浆液重量0.4％(m/m)脂肪酶，酶解温度25-35℃，酶 解2-3h；
[0013]S3.离心：6000-8000r/min，离心20-30min，收集沉淀；
[0014]S4.提胶、灭菌：收集沉淀物，加入发酵罐内，并添加葡糖糖溶液，控制发酵罐，进行提 交、灭菌处理；
[0015]S5.发酵：接种发酵菌，控制发酵温度、发酵罐转速、发酵罐通气量和发酵时间；
[0016]S6.二次补料发酵：向发酵罐内进行补料，补料后对发酵罐内的发酵条件进行更改；
[0017]S7.超滤：选用截留分子量为5000Da的陶瓷膜进行超滤，收集滤液；
[0018]S8.脱色除腥：在滤液中加入活性炭，并调节pH值；
[0019]S9.树脂脱灰：对脱色除腥后的滤液进行脱灰处理；
[0020]S10.凝胶柱纯化：脱灰液过Sephadex G-10柱，收集分子量300-700Da的鱼胶肽组份；
[0021]S11.纳滤浓缩：用分子量180Da的纳滤膜对分子量300-700Da的鱼胶肽组份进行浓缩， 浓缩至固含30％；
[0022]S12.冷冻干燥：冷冻干24小时；
[0023]S13.粉碎：低温超微粉碎至120-200目。
[0024]优选的，在步骤S4中，按沉淀质量1:3-1:5加入纯化水，添加液体体积2-5％(m/v)的 葡萄糖，在发酵罐内115-121℃，加压提取灭菌10-30提取分钟，降温至40℃。
[0025]优选的，在步骤S5中，接种发酵菌为枯草芽孢杆菌和酵母菌，枯草芽孢杆菌接种量为 105～107cfu/ml，酵母菌接种量为104～105cfu/ml。
[0026]优选的，在步骤S5中，接种后发酵温度28-35℃、转速200r/min、通气量1-2.5VVM、 pH自然发酵12h。
[0027]优选的，在步骤S6中，发酵12h后，按照发酵液的体积一次性补加氯化镁至发酵液终浓 度2-6mmol/L、补加氯化锰至发酵液终浓度1-3mmol/L。
[0028]优选的，在步骤S6中，补料后发酵温度30-40℃、转速100r/min、通气量0.7-1.5VVM、 pH自然发酵8-12h。
[0029]优选的，在步骤S8中，将滤液用盐酸调pH至3.0-5.0，加入发酵液体积0.3％(m/v)的 活性炭，45℃保温2h；将吸附液3000r/min进行离心5min，上清液用氢氧化钠调至pH7.0。
[0030]优选的，在步骤S9中，将脱色脱腥液先过大孔强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，再通过 大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂，进行脱灰。
[0031]本专利技术还公开了一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽，根据上述制备方法制得的鱼胶 肽粉剂、口服液。
[0032]本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
[0033]1、制备得到的赤嘴鳘鱼胶肽的多肽含量≥99％，其中分子量在300-700Da的鱼胶肽占比 大于98％，小分子的鱼胶肽更容易被人体吸收；
[0034]2、赤嘴鳘鱼胶肽体外抗糖基化活性作用明显，具体为对HbAlc形成的抑制率达到89.2％；
[0035]3、保护抗糖基化的赤嘴鳘鱼胶肽产品本身，即能补充人体胶原蛋白，又能减少糖基化终 产物对皮肤成纤细胞的影响。
具体实施方式
[0036]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1.预处理：将赤嘴鳘干鱼胶用30倍的清水清分两次洗干净后，加入干鱼胶重量20倍体积的纯化水，4-10℃泡发8-12h，泡发后用匀浆机进行匀浆；S2.酶解脱脂：向匀浆液中加入匀浆液重量0.4％(m/m)脂肪酶，酶解温度25-35℃，酶解2-3h；S3.离心：6000-8000r/min，离心20-30min，收集沉淀；S4.提胶、灭菌：收集沉淀物，加入发酵罐内，并添加葡糖糖溶液，控制发酵罐，进行提交、灭菌处理；S5.发酵：接种发酵菌，控制发酵温度、发酵罐转速、发酵罐通气量和发酵时间；S6.二次补料发酵：向发酵罐内进行补料，补料后对发酵罐内的发酵条件进行更改；S7.超滤：选用截留分子量为5000Da的陶瓷膜进行超滤，收集滤液；S8.脱色除腥：在滤液中加入活性炭，并调节pH值；S9.树脂脱灰：对脱色除腥后的滤液进行脱灰处理；S10.凝胶柱纯化：脱灰液过Sephadex G-10柱，收集分子量300-700Da的鱼胶肽组份；S11.纳滤浓缩：用分子量180Da的纳滤膜对分子量300-700Da的鱼胶肽组份进行浓缩，浓缩至固含30％；S12.冷冻干燥：冷冻干24小时；S13.粉碎：低温超微粉碎至120-200目。2.根据权利要求1所述的一种具有抗糖基化作用的赤嘴鳘鱼胶肽制备方法，其特征在于：在步骤S4中，按沉淀质量1:3-1:5加入纯化水，添加液体体积2-5％(m/v)的葡萄糖，在发酵罐内115-121℃，加压提取灭菌10-30提取分钟，降温至40℃。3.根据权利要求1所述的一种具有抗糖基化...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜瑞珠，
申请(专利权)人：杜瑞珠，
类型：发明
国别省市：