一种通过精准发酵女贞子制备特女贞苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过精准发酵女贞子制备特女贞苷的方法，该方法包括以下步骤：由酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌按比例制备成混合种子液，再将种子液接种到女贞子固体发酵培养基中混匀后，置于容器中发酵，25

【技术实现步骤摘要】
16
‑
20h后按2
‑
7％的接种量接种至LB液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为 28
‑
35℃，pH6.8
‑
7.2，摇瓶装液量10
‑
30％，转速150
‑
220r/min摇床培养20
‑
24h，得地衣芽 孢杆菌种子液；
[0012](2)取干燥好的女贞子，粉碎后装入容器，于121℃灭菌10
‑
20min，即得女贞子固体 发酵培养基；将步骤(1)所得的酿酒酵母种子液、枯草芽孢杆菌种子液和地衣芽孢杆菌 种子液按体积比1:(0.8
‑
1.5):(0.8
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1.5)混合后，按质量百分比10
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30％接种至女贞子固体 发酵培养基中，于20
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35℃静置发酵5
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7d，得女贞子固体发酵培养物，将发酵培养物与无 菌水按质量体积比(g:mL)1:4至1:9混合，摇匀后静置10
‑
30min，再过滤，收集上清液， 即为特女贞苷的提取物。
[0013]所述特女贞苷的提取物由上述的方法制备。
[0014]由上述方法制备的女贞子固体发酵培养物或特女贞苷的提取物可用于制备动物饲料 添加剂。
[0015]所述用于制备特女贞苷的复合微生物制剂通过如下步骤制备：
[0016](1)将经斜面活化的酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌分别接种到PDA培养 基、LB液体培养基和LB液体培养基种子摇瓶中培养；具体培养条件分别如下：
[0017]酿酒酵母培养条件为：28
‑
35℃，pH6.2
‑
6.8，转速150
‑
220r/min，摇床培养18
‑
24h后 按3
‑
7％的接种量接种至PDA液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为：26
‑
32℃， pH6.2
‑
6.8，摇瓶装液量10
‑
30％，转速150
‑
220r/min，摇床培养24
‑
36h，得酿酒酵母种子 液；
[0018]枯草芽孢杆菌培养条件为：28
‑
35℃，pH6.8
‑
7.2，转速150
‑
220r/min，摇床培养 16
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20h后按2
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7％的接种量接种至LB液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为： 28
‑
35℃，pH6.8
‑
7.2，摇瓶装液量10
‑
30％，转速150
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220r/min，摇床培养20
‑
24h，得枯草 芽孢杆菌种子液；
[0019]地衣芽孢杆菌培养条件为：28
‑
35℃，pH6.8
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7.2，转速150
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220r/min，摇床培养 16
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20h后按2
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7％的接种量接种至LB液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为 28
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35℃，pH6.8
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7.2，摇瓶装液量10
‑
30％，转速150
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220r/min摇床培养20
‑
24h，得地衣芽 孢杆菌种子液；
[0020](2)将步骤(1)所得的酿酒酵母种子液、枯草芽孢杆菌种子液和地衣芽孢杆菌种子 液按体积比1:(0.8
‑
1.5):(0.8
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1.5)混合，即得复合微生物制剂。
[0021]下面对本专利技术作进一步说明：
[0022]本方法采用特定复合微生物组合对女贞子药材进行混合发酵，定向提高女贞子中的 特女贞苷活性成分，显著提高女贞子的抗炎、抗菌作用。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0024]1、本专利技术女贞子为固体发酵，操作简便，功能物质不易流失，发酵后直接加水溶解 便可获得产品，相比现有物理化学方法提取特女贞苷(如醇提、超声提取)，本方法具有 绿色环保、方法高效、操作简便等优点。
[0025]2、本专利技术定向选育了多种微生物，繁殖迅速，形成了一套完整工艺，可精准提高女 贞子中的特女贞苷含量，显著提高女贞子的抗炎、抗菌作用，具有培养效果好、生产效 益高的特点。
[0026]3、本专利技术研究了女贞子固体发酵的生产情况及发酵产物生物活性，可以作为饲料添 加剂和动物保健食品，开发简单，易于推广。
附图说明
[0027]图1：本专利技术特女贞苷HPLC鉴定图，图中a:特女贞苷标准品，b:未经发酵女贞子对 照品c:益生菌复合发酵女贞子；
[0028]图2：实施例3的结果图。
具体实施方式
[0029]实施例1
[0030]将经过斜面活化的酿酒酵母，取一环接种到种子摇瓶中培养，培养条件为：PDA培 养基，28℃，pH6.3，转速180r/min摇床培养18h然后按3％接种量接种PDA液体培养基 进行液体发酵培养，发酵条件为28℃，pH6.3，装液量10％，转速180r/min摇床培养26h。
[0031]将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌，取一环接种到种子摇瓶中培养，培养条件为：LB 液体培养基，30℃，pH6.8，转速180r/min摇床培养16h然后按2％接种量接种LB液体培 养基进行液体发酵培养，发酵条件为30℃，pH6.8，装液量10％，转速180r/min摇床培养20h。
[0032]将经过斜面活化的地衣芽孢杆菌，取一环接种到种子摇瓶中培养，培养条件为：LB 液体培养基，30℃，pH6.8，转速180r/min摇床培养16h然后按2％接种量接种LB液体培 养基进行液体发酵培养，发酵条件为30℃，PH6.8，装液量10％，转速180r/min摇床培养 20h。
[0033]三种益生菌种子液按体积比1:1:1混合后，按质量百分比15％接种于女贞子固体发酵 培养基，在30℃温度下，恒温培养箱培养发酵96h。
[0034]收集上述发酵培养物，得女贞子固体发酵培养物，将发酵培养物与无菌水按质量体积 比(g:mL)1:9混合，摇匀后静置10
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30min，过滤收集上清液，4000r/min离心10min即得 含特女贞苷的粗提物。
[0035]实施例2
[0036]将经过斜面活化的酿酒酵母，取一环接种到种子摇瓶中培养，培养条件为：PDA培 养基，28℃，PH6.3，转速180r/min摇床培养18h然后按3％接种量接种PDA液体培养基 进行液体发酵培养，发酵条件为28℃，pH6.3，装液量10％，转速180r/min摇床培养 26h。
[0037]将经过斜面活化的枯草芽孢杆菌，取一环接种到种子摇瓶中培养，培养条件为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过精准发酵女贞子制备特女贞苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）将经斜面活化的酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌分别接种到PDA培养基、LB液体培养基和LB液体培养基种子摇瓶中培养；具体培养条件分别如下：酿酒酵母培养条件为：28
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35℃，pH6.2
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6.8，转速150
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220r/min，摇床培养18
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24h后按3
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7%的接种量接种至PDA液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为：26
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32℃，pH6.2
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6.8，摇瓶装液量10
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30%，转速150
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220r/min，摇床培养24
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36h，得酿酒酵母种子液；枯草芽孢杆菌培养条件为：28
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35℃，pH6.8
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7.2，转速150
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220r/min，摇床培养16
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20h后按2
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7%的接种量接种至LB液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为：28
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35℃，pH6.8
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7.2，摇瓶装液量10
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30%，转速150
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220r/min，摇床培养20
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24h，得枯草芽孢杆菌种子液；地衣芽孢杆菌培养条件为：28
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35℃，pH6.8
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7.2，转速150
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220r/min，摇床培养16
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20h后按2
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7%的接种量接种至LB液体培养基进行液体发酵培养，液体发酵条件为28
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35℃，pH6.8
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7.2，摇瓶装液量10
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30%，转速150
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220r/min摇床培养20
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24h，得地衣芽孢杆菌种子液；（2）取干燥好的女贞子，粉碎后装入容器，于121℃灭菌10
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20min，即得女贞子固体发酵培养基；将步骤（1）所得的酿酒酵母种子液、枯草芽孢杆菌种子液和地衣芽孢杆菌种子液按体积比1:（0.8
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1.5）:（0.8
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1.5）混合后，按质量百分比10
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30%接种至女贞子固体发酵培养基中，于20
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35℃静置发酵5
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7d，得女贞子固体发酵培养物，将发酵培养物与无菌水按质量体积比1:4至1:9混合，所述质量体积比中质量的单位为g，体积的单...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒燕，王升平，邬理洋，周映华，曾发姣，高书锋，周小玲，龚平，曾奥，缪东，
申请(专利权)人：湖南省微生物研究院，
类型：发明
国别省市：