一种优化酶解超声提取和大孔树脂纯化总黄酮的方法技术

本发明专利技术公开了一种优化酶解超声提取和大孔树脂纯化总黄酮的方法，包括以下具体步骤：S1：样本处理；S2：芦丁标准曲线绘制；S3：酶解超声提取总黄酮：选取不同品种的酶，并分别混合黄精叶粉末和乙醇溶液进行超声提取实验，提取液加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液和氢氧化钠，测定吸光度，计算总黄酮质量浓度，比较各项实验数据，借助响应面法分析并优化总黄酮的提取工艺；S4：大孔树脂纯化总黄酮：在S3后利用大孔树脂对总黄酮进行纯化，本发明专利技术公开的优化酶解超声提取和大孔树脂纯化总黄酮的方法具有利用酶辅助超声法确定提取多花黄精叶中总黄酮最大得率和利用大孔树脂纯化酶辅助超声提取的黄精叶总黄酮最佳纯度的效果。的黄精叶总黄酮最佳纯度的效果。的黄精叶总黄酮最佳纯度的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种优化酶解超声提取和大孔树脂纯化总黄酮的方法


[0001]本专利技术涉及大健康产品制备领域，尤其涉及一种优化酶解超声提取和大孔树脂纯化总黄酮的方法。

技术介绍

[0002]黄酮是植物界中广泛存在的一大类以苯色酮环为基础的酚类化合物，是许多中草药的有效成分。天然来源的生物类黄酮分子量比较小，能够被人体迅速吸收，可以通过血脑屏障，进入脂肪组织，具有消除疲劳、保护血管、防动脉粥样硬化、降血糖、降血脂、扩张毛细血管、活化大脑细胞和其他脏器细胞的功能、抗衰老和抗菌作用等多种功效。
[0003]超声酶法协同提取多花黄精叶中总黄酮的原理是：酶可将植物组织分解，从而破坏细胞结构，使得细胞与溶剂之间的阻力减小，超声波提取是应用其空化效应和搅拌作用来破坏药材细胞,两者结合后共同作用可加速细胞内有效成分的释放和扩散,并提高成分提取率。因此，酶辅助超声法提取中药有效成分可减少溶剂用量，缩短提取时间，并提高药用成分的得率，大孔吸附树脂对黄酮的纯化取决于它的吸附性和分子筛性。吸附性的大小又取决于树脂的极性和黄酮的极性，分子筛性则取决于树脂本身的多孔性结构和黄酮的分子大小。加上大孔树脂性能稳定，不溶于酸碱和有机溶剂，对黄酮的选择性好，可以有效纯化总黄酮。
[0004]如何利用酶辅助超声法提取黄精总黄酮从而优化黄酮类物质的提取工艺，并利用大孔树脂纯化总黄酮成了我们需要考虑的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术公开一种优化酶解超声提取和大孔树脂纯化总黄酮的方法，旨在解决如何利用酶辅助超声法提取黄精总黄酮从而优化黄酮类物质的提取工艺，并利用大孔树脂纯化总黄酮的技术问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]一种优化酶解超声提取的方法，包括以下具体步骤：
[0008]S1：样本处理：处理新鲜的黄精叶，并制成黄精叶粉末备用；
[0009]S2：芦丁标准曲线绘制：取芦丁标准溶液，并在添加辅料后测定吸光度，得到芦丁标准曲线；
[0010]S3：酶解超声提取总黄酮：选取不同品种的酶，并分别混合黄精叶粉末和乙醇溶液进行超声提取实验，提取液加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液和氢氧化钠，测定吸光度，计算总黄酮质量浓度，比较各项实验数据，借助响应面法分析并优化总黄酮的提取工艺。
[0011]通过采用酶辅助超声法提取黄精总黄酮，并结合黄酮类物质提取关键因素即酶解时间、乙醇浓度、料液比、超声功率等，借助响应面法优化黄酮类物质的最优提取工艺，通过得到的多元二次回归方程，并求解方程确定超声酶法协同提取多花黄精叶中总黄酮酶解的最佳工艺条件和最大得率。
[0012]在一个优选的方案中，所述S1中，样本处理包括以下步骤：
[0013]S11：预处理：将新鲜黄精叶清洗干净，于烘箱中60℃烘干，再置于粉碎机中粉碎；S12：初步处理：取300g黄精叶粉末用二氯甲烷做初步脱脂处理；S13：干燥滤渣：进行抽滤，并将滤渣收集放在通风位置干燥，待其中的二氯甲烷自然挥发后，放入烘箱烘烤至完全干燥；S14：装袋：待黄精叶粉末干燥后，装入密封袋备用。
[0014]多花黄精药食两用，根作为食用部位，供不应求，多花黄精叶中含有大量的总黄酮，但目前对于其中总黄酮研究很少，导致多黄黄精叶资源被白白丢弃，浪费严重，因此，我们通过深入研究黄精叶总黄酮的提取工艺，不仅增加多花黄精中总黄酮的得率，同时也提高了多花黄精叶的利用价值，也为后续的多花黄精叶的利用和进一步开发提供理论依据。
[0015]在一个优选的方案中，所述S3中，总黄酮提取包括以下具体步骤：
[0016]S31：酶选取：选取不同品种的酶各50mg，并采用溶剂溶解不同品种的酶，制成酶溶液进行S3中的实验，其中不同品种的酶为漆酶、纤维素酶和半纤维素酶；S32：称取粉末：称取处理过的黄精叶粉末1g；S33：配置乙醇溶液：以料液比1:25g/mL，配置25mL的80％的乙醇；S34：酶解：加入50mg的酶，静置酶解1h；S35：超声提取：在超声功率450W、温度40℃的情况下超声提取40min；S36：抽滤、量取滤液：进行抽滤，取滤液装入25mL容量瓶中；S37：样品溶液乙醇定容：用30％乙醇定容，待测定总黄酮用；S38：乙醇补充：吸取2mL样液于25mL容量瓶中，再用30％的乙醇补充至12.5mL；S39：添加辅料：加入0.6mL亚硝酸钠溶液轻微摇晃后静置五分钟，然后再滴加0.6mL的硝酸铝溶液轻微摇晃并静置五分钟，最后加入5mL的氢氧化钠；S310：乙醇定容：用30％乙醇定容至刻度线并静置15min；S311：测定吸光度：在500nm波长处测定吸光度；S312：计算总黄酮质量浓度：利用标准曲线回归方程计算总黄酮质量浓度；S313：比较实验数据：结合酶解时间、乙醇浓度、料液比、超声功率的数据，借助响应面法分析并优化总黄酮的提取工艺。
[0017]通过设置有利用多种酶进行实验，实验结果与理论拟合值偏差小，说明该模型能够精准的预测响应值，展现了响应面分析法作为一种多变量的复杂工艺过程优化的可靠性，本次试验设计了没有酶参与的多花黄精叶中总黄酮乙醇超声提取得率作为参照，还对漆酶、纤维素梅、半纤维素酶三种酶的对比试验，确定出三种酶中提取率相对最优的酶为半纤维素酶，半纤维素酶的辅助工艺是大多数植物中有效成分的主要提取步骤，对照传统超声提取方法能有效增加得率。
[0018]一种大孔树脂纯化总黄酮的方法，包括以下具体步骤：
[0019]S4：大孔树脂纯化总黄酮：在S3，对优化后的超声酶解工艺提取的总黄酮，利用大孔树脂进行纯化；
[0020]所述S4，大孔树脂纯化总黄酮包括以下具体步骤：
[0021]S41：树脂筛选：挑选七种不同型号的大孔树脂进行静态吸附解吸实验；S42：静态吸附解吸实验：测试静态环境下吸附解吸速率，并制作静态吸附速率曲线；S43：温度影响实验：测试温度对静态吸附和解吸效果的影响，选择20℃，30℃，40℃三个温度条件进行静态吸附解吸实验；S44：pH值影响实验：测试pH值对静态吸附和解吸效果的影响，选择pH为5，pH为7，pH为9三个梯度进行实验；S45：洗脱液浓度影响实验：测试洗脱液浓度对静态解吸效果的影响，选择乙醇作为洗脱液，测试不同体积分数的乙醇的洗脱效果；S46：上样体积影响实验：将上样液的浓度配置为2.0mg/mL，以10mL为一份收集流出液，测定黄酮含量；S47：上样
浓度影响实验：将上样液配置成不同浓度进行上样，上样体积为2BV，收集流出液测定总黄酮含量，计算吸附率；S48：上样流速影响实验：将上样液以不同流速进行上样，收集流出液，测定总黄酮含量，计算吸附率；S49：洗脱液体积影响实验：选择乙醇作为洗脱液，选择60％，70％,80％,90％四个不同体积分数的乙醇进行洗脱实验；S410：洗脱液流速影响实验：将洗脱液以不同流速进行洗脱，收集流出液，测定总黄酮含量，计算吸附率，并结合其他数据得出最佳工艺条件。
[0022]通过优化酶超声提取的方法提高总黄酮提取效率后，通过从树脂筛选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种优化酶解超声提取的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：S1：样本处理：处理新鲜的黄精叶，并制成黄精叶粉末备用；S2：芦丁标准曲线绘制：取芦丁标准溶液，并在添加辅料后测定吸光度，得到芦丁标准曲线；S3：酶解超声提取总黄酮：选取不同品种的酶，并分别混合黄精叶粉末和乙醇溶液进行超声提取实验，提取液加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液和氢氧化钠，测定吸光度，计算总黄酮质量浓度，比较各项实验数据，借助响应面法分析并优化总黄酮的提取工艺。2.根据权利要求1所述的一种优化酶解超声提取的方法，其特征在于，所述S1中，样本处理包括以下步骤：S11：预处理：将新鲜黄精叶清洗干净，于烘箱中60℃烘干，再置于粉碎机中粉碎；S12：初步处理：取300g黄精叶粉末用二氯甲烷做初步脱脂处理；S13：干燥滤渣：进行抽滤，并将滤渣收集放在通风位置干燥，待其中的二氯甲烷自然挥发后，放入烘箱烘烤至完全干燥；S14：装袋：待黄精叶粉末干燥后，装入密封袋备用。3.根据权利要求2所述的一种优化酶解超声提取的方法，其特征在于，所述S12中，初步处理的具体实施方式为将黄精叶与二氯甲烷以1:8
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1:10m/V的比例混合，振荡混合后静置2小时以上，再超声50分钟。4.根据权利要求1所述的一种优化酶解超声提取的方法，其特征在于，所述S2中，芦丁标准曲线测定包括以下具体步骤：S21：制备芦丁标准溶液：分别取芦丁标准溶液1、2、4、6和8mL于5只25mL容量瓶中；S22：补充乙醇：用30％乙醇补充至约12.5mL；S23：加入辅料溶液：加入0.6mL亚硝酸钠溶液，摇匀并放置5min,再加入0.6mL硝酸铝溶液，摇匀并静置5min，后再加入5mL氢氧化钠溶液混匀；S24：标准溶液乙醇定容：用30％乙醇定容至刻度，摇匀；S25：标准曲线测定：检测混合溶液吸光度，并绘制出标准曲线。5.根据权利要求4所述的一种优化酶解超声提取的方法，其特征在于，所述S25中，标准曲线测定的具体实施方式为：混合溶液放置15min后，在波长500nm处测定其吸光度，试剂空白为参比，平行实验三次，将测定的各溶液在500nm处吸光值设定为纵坐标，并以各溶液芦丁浓度为横坐标，绘制出标准曲线，其中求出回归方程为:y＝10.9063x+0.0091。6.根据权利要求1所述的一种优化酶解超声提取的方法，其特征在于，所述S3中，总黄酮提取包括以下具体步骤：S31：酶选取：选取不同品种的酶各50mg，并采用溶剂溶解不同品种的酶，制成酶溶液进行S3中的实验，其中不同品种的酶为漆酶、纤维素酶和半纤维素酶；S32：称取粉末：称取处理过的黄精叶粉末1g；S33：配置乙醇溶液：以料液比1:25g/mL，配置25mL的80％的乙醇；S34：酶解：加入50mg的酶，静置酶解1h；S35：超声提取：在超声功率450W、温度40℃的情况下超声提取40min；S36：抽滤、量取滤液：进行抽滤，取滤液装入25mL容量瓶中；S37：样品溶液乙醇定容：用...

【专利技术属性】
技术研发人员：项昭保，陈鹏飞，李泽玉，
申请(专利权)人：重庆工商大学，
类型：发明
国别省市：