一种铁皮石斛种子贮存方法技术

本发明专利技术涉及种子保存技术领域，具体是一种铁皮石斛种子贮存方法，本发明专利技术不需要用液氮冷冻，通过将消毒后的铁皮石斛种子用干燥器干燥，然后再在4

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛种子贮存方法


[0001]本专利技术属于种子保存
，具体的说，涉及一种铁皮石斛种子贮存方法。

技术介绍

[0002]铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科石斛属附生植物，以干燥茎入药，为我国的传统药材，味甘，微寒，具益胃生津，滋阴清热等功效。铁皮石斛药材长期依赖野生资源，导致资源日渐枯竭， 20世纪90年代以来，铁皮石斛人工栽培技术逐步成熟，采用种子无菌萌发技术，成功实现种苗规模化生产。
[0003]由于铁皮石斛蒴果完全成熟时易开裂，种子暴露在空气中，不方便外植体消毒，目前生产中一般采用随采随播的方式，即消毒处理成熟未开裂蒴果，切取种子进行无菌播种。
[0004]石斛新鲜种子含水量较高（30
‑
40%），生理代谢活动较旺盛，采摘后如果不及时播种，直接长时间储存，种子易失去活性。由于铁皮石斛种子细小，一个蒴果含有上万粒种子，非常适合采用超低温保存技术进行贮存。将种子存放在
‑
196℃液氮超低温环境中，几乎可完全停止种子生命代谢活动，从而达到长期储存的目的。相关研究表明，经干燥处理24ｈ的铁皮石斛种子在液氮(
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196℃)中保存60、90 d，种子活力显著高于常温、４℃及
‑
20℃下的种子活力，而种子常温（25℃）保存90 d，种子活力下降明显，萌发率仅为33.80％；4℃下保存90天，种子活性降低至52.21%。张治国等研究发现铁皮石斛种子含水量降到 8.21%，其萌发率与未脱水的种子萌发率相近，而种子含水量8.21 %
ꢀ‑
18.79 %时，液氮冷冻贮存萌发率与正常种子没有明显差别。王君晖等研究发现铁皮石斛种子含水量为 8%
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19%时, 液氮超低温保存后种子的存活率可达95%。但液氮保存石斛种子中，冻存和化冻两个过程，易发生细胞损伤，影响种子活性，往往需要添加PVS2等保护剂进行预处理，增强种子的超低温耐性。这无形中增加了液氮储存石斛种子的难度和成本。此外，研究也发现液氮储存的石斛种子，萌发期会延长7
‑
10 d。关于超低温贮存前后细胞生理生化变化规律仍不清楚。
[0005]对于石斛种苗生产企业，超低温贮存需要具备专门液氮存贮设备及相应种子贮存操作技术，推广应用难度较大，生产中急需一种有效简便的种子贮存技术方法，以满足石斛种子中短期贮存需要。

技术实现思路

[0006]为了克服
技术介绍
中存在的问题，本专利技术提供一种铁皮石斛种子贮存方法，通过在无菌条件下控制干燥湿度，降低石斛种子含水量，不需要冷冻即可有效延长石斛种子的保存期，且所得种子保存时间可达6个月以上，贮存后种子活力90.00%以上。本专利技术的技术降低了石斛种子的保存成本和技术难度，满足了种苗生产企业对铁皮石斛种子中短期贮存的需要。
[0007]为实现上述目的，本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种铁皮石斛种子贮存方法，包括以下步骤：（1）无菌条件下，用吸水剂脱水干燥种子至含水量3.00
‑
7.00%；
（2）将脱水干燥后的种子，在无菌环境中转入无菌的冻存管中，密封贮存。
[0008]进一步，步骤（1）中，干燥过程中环境湿度1
‑
3%RH，干燥温度20
‑
25℃。
[0009]进一步，步骤（2）中，密封贮存温度为4
‑
25℃。
[0010]进一步，步骤（1）中，无菌环境中，消毒灭菌处理后蒴果，切取种子，放入已灭菌的带除菌过滤膜的培养盒中进行吸水干燥。
[0011]进一步，所述的灭菌种子来源于采收饱满、未开裂，果皮黄绿色的蒴果。
[0012]进一步，所述吸水剂为变色硅胶或氯化钙。
[0013]本专利技术的有益效果：本专利技术通过在无菌条件下控制干燥湿度，降低石斛种子含水量，不需要冷冻即可延长石斛种子的保存期，且所得种子保存时间可达6个月以上，贮存后的种子存活率达90.00%以上，降低了石斛种子的保存成本和技术难度。
附图说明
[0014]图1是铁皮石斛蒴果和种子形态；图2是TTC染色法检测铁皮石斛种子活力图片；图中，1为铁皮石斛蒴果；2为铁皮石斛种子（光学显微）；3为铁皮石斛种子（扫描电镜）；1和2中小方格边长为1 mm。
具体实施方式
[0015]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的说明，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例。基于本专利技术的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下多获得的其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0016]为了更清楚说明本专利技术，下面通过以下实施例进行详细说明。
[0017]实施例1铁皮石斛种子贮存方法，包括以下步骤：（1）每年3
‑
4月铁皮石斛开花期，人工授粉，当年10
‑
11月，授粉后约210 d，采收饱满、未开裂，果皮黄绿色的蒴果。
[0018]（2）超净工作台上，采用10%次氯酸钠溶液消毒处理蒴果30 min，无菌水清洗3次，切开6个蒴果，取出种子，放入已灭菌的带除菌过滤膜的培养盒中混匀。
[0019]（3）将3个培养盒放入干燥器中，采用硅胶进行种子脱水干燥处理，环境湿度控制在3%RH以下，干燥温度25℃，每500 g变色硅胶约脱水干燥处理18个铁皮石斛蒴果的种子，持续脱水处理至96 h，取出约0.20 g种子，测含水量为3.59%。
[0020]（4）将干燥种子在超净工作台上，快速转入无菌的冻存管中密封，环境温度4℃条件下贮存。
[0021]（5）种子贮存150 d后，测得种子活力为90.43%。
[0022]通常，种子含水量越低，贮存种子的寿命越长。当种子含水量小于5%时，称为种子超干贮存。但不同植物的种子耐脱水性存在较大差异。当种子含水量低于该植物的安全含水量下限，会发生种子的损伤。本专利技术通过研究发现，将含水量为3.59%的石斛种子在4℃储
存150天，仍能保持高活性。
[0023]相对于现有技术，常规种子保存90天后活力仅为52.21%的情况，本专利技术技术处理后石斛种子的超干保存显然延长了种子的保存期。
[0024]在本专利技术中，种子的干燥环境湿度和干燥温度需同时保证。
[0025]种子含水量检测方法：种子含水量测定采用高恒温烘干法，130℃鼓风干燥1 h 。
[0026]种子水分含量 =（M2
‑
M3)
ꢀ÷ꢀ
(M2
‑
M1)
ꢀ×
100%其中M1表示种子和铝盒盖的重量(g)，M2表示铝盒和铝盒盖及种子的烘干前重量（g），M3表示铝盒和铝盒盖及种子烘干后的重量（g）。
[0027]种子活力检测方法：采用0.3% H2O
2 浸泡处理种子30 min， 蒸馏水清洗3次，1％ TTC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛种子贮存方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌条件下，用吸水剂脱水干燥种子至含水量3.00
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7.00%；（2）将脱水干燥后的种子，在无菌环境中转入无菌的冻存管中，密封贮存。2.根据权利要求1所述的铁皮石斛种子贮存方法，其特征在于，步骤（1）中，干燥过程中环境湿度控制在1
‑
3%RH，干燥温度20
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25℃。3.根据权利要求1所述的铁皮石斛种子贮存方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：董志渊，杨丽英，胡明举，丛琨，石亚娜，石瑶，袁理春，王家金，
申请(专利权)人：云南省农业科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：