本发明专利技术提供了一种
【技术实现步骤摘要】
一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法
[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，尤其涉及一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法。
技术介绍
[0002]目前，虽已在牡丹多种外植体培养中诱导出了愈伤组织，但不同基因型和外植体诱导成功率存在极大差异。近年来，愈伤组织诱导和增殖方法已较为成熟，主要的瓶颈问题之一是愈伤组织难以分化出健康的不定芽，而组织培养体系建立的最主要环节在于愈伤组织再分化过程。当前，大量研究仍以鳞芽为外植体这一直接器官发生途径来实现植株再生，通过体胚发生途径实现牡丹离体再生少有报道。有研究表明，诱导愈伤组织体胚发生进而再分化形成的再生植株可保持母株优良性状。
[0003]‘
凤丹
’
(Paeonia ostiiT.Hong et J.X.Zhang)因其籽油品质高成为目前新兴的木本油料植物之一。分株、嫁接等传统的繁殖方法，不能满足市场对优质牡丹种苗的需求。截至目前，
‘
凤丹
’
牡丹尚未建立起成熟稳定的组织培养体系，关键技术瓶颈之一是愈伤组织分化率低。因此，加快牡丹组织培养技术的研究，提高愈伤组织分化率，有利于牡丹快速育苗，保存母株的优良性状，为分子生物学育种研究提供基础。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法。本专利技术选用
‘
凤丹
’
无菌苗的子叶为外植体，配合优化组织培养方式，诱导体细胞胚再分化不定芽，可提高不定芽分化率，加快
‘
凤丹
’
牡丹快速育苗进程。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法，包括如下步骤：
[0007](1)取经浸泡、去皮、消毒处理后的
‘
凤丹
’
牡丹种子的种胚，接种于无菌苗诱导培养基，诱导培养，得到无菌苗；
[0008](2)取所述无菌苗的子叶接入体细胞胚诱导培养基，诱导培养，得到体细胞胚；
[0009](3)将所述体细胞胚接入再分化诱导培养基，诱导培养，得到不定芽。
[0010]优选的，步骤(1)中所述无菌苗诱导培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：蔗糖20～30g/L，琼脂5～8g/L，NAA 0.5～1.0mg/L，6
‑
BA 0.8～2.0mg/L和活性炭0.5～2.0mg/L，所述无菌苗诱导培养基的pH值为5.8～6.0。
[0011]优选的，步骤(2)中所述体细胞胚诱导培养基以MSB培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：蔗糖20～30g/L、琼脂5～8g/L、TDZ 0.2～1.0mg/L、2,4
‑
D 0.4～1.0mg/L，所述体细胞胚诱导培养基的pH值5.8～6.0。
[0012]优选的，步骤(3)中所述再分化诱导培养基为以MS培养基、WPM培养基或MBP培养基为基础培养基。
[0013]优选的，所述以MS培养基为基础培养基时，包括以下浓度的组分：蔗糖20～30g/L、琼脂5～8g/L，pH值为5.8～6.0。
[0014]优选的，以WPM培养基为基础培养基时，包括以下浓度的组分：琼脂5～8g/L、蔗糖20～30g/L，TDZ 0.1～0.8mg/L、2,4
‑
D 0.2～1.0mg/L，pH值为5.8～6.0。
[0015]优选的，以MBP培养基为基础培养基时，包括以下浓度的组分：琼脂5～8g/L、蔗糖20～30g/L，TDZ 0.2～1.0mg/L、2,4
‑
D 0.2～0.8mg/L，pH值为5.8～6.0。
[0016]优选的，步骤(1)～(3)中所述诱导培养的条件为：先进行暗培养，再进行光照培养；所述诱导培养的温度独立为24～25℃，相对湿度独立为85％～95％；所述光照培养的强度独立为2000～3000Lx，光照周期独立为14～18h/d。
[0017]优选的，步骤(1)中所述诱导培养的总时间为4～5周；步骤(2)中所述诱导培养的总时间为3～4周；步骤(3)中所述诱导培养的总时间为3～4周；其中，步骤(1)～(3)的暗培养时间独立为5～10d。
[0018]本专利技术提供了一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法。本专利技术以无菌苗的子叶为外植体诱导愈伤组织形成体细胞胚，缩短了
‘
凤丹
’
牡丹愈伤组织脱分化培养时间，加速不定芽的形成，在诱导体细胞胚再分化的培养过程中，改变基础培养基，发现MS培养基对诱导体细胞胚不定芽分化具有显著效果，提高了
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚分化效率；改变基础培养基后，去掉外源激素的添加，大大增强了体细胞胚不定芽分化效率，为提高
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚不定芽发生的研究提供良好的技术体系，为
‘
凤丹
’
牡丹组织培养体系建立提供了可靠的技术支持。
附图说明
[0019]图1为实施例1，体细胞胚接入再分化诱导培养基4周后分化的不定芽。
[0020]图2为实施例2，体细胞胚接入再分化诱导培养基4周后分化的不定芽。
[0021]图3为实施例3，体细胞胚接入再分化诱导培养基4周后分化的不定芽。
[0022]图4为实施例1、2、3的不定芽诱导培养结果数据对比统计图，其中WPM为实施例1，MBP为实施例2，MS为实施例3。
具体实施方式
[0023]本专利技术提供了一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法，包括如下步骤：
[0024](1)取经浸泡、去皮、消毒处理后的
‘
凤丹
’
牡丹种子的种胚，接种于无菌苗诱导培养基，诱导培养，得到无菌苗；
[0025](2)取所述无菌苗的子叶接入体细胞胚诱导培养基，诱导培养，得到体细胞胚；
[0026](3)将所述体细胞胚接入再分化诱导培养基，诱导培养，得到不定芽。
[0027]本专利技术取经浸泡、去皮、消毒处理后的
‘
凤丹
’
牡丹种子的种胚，接种于无菌苗诱导培养基，诱导培养，得到无菌苗。
[0028]在本专利技术中，所述
‘
凤丹
’
牡丹种子优选选取当年8月份新收取的，经过后熟后的种子。
[0029]在本专利技术中，所述浸泡优选使用蒸馏水。
[0030]在本专利技术中，所述浸泡的时间优选为2本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种
‘
凤丹
’
牡丹体细胞胚再分化生成不定芽的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取经浸泡、去皮、消毒处理后的
‘
凤丹
’
牡丹种子的种胚，接种于无菌苗诱导培养基，诱导培养，得到无菌苗；(2)取所述无菌苗的子叶接入体细胞胚诱导培养基，诱导培养，得到体细胞胚；(3)将所述体细胞胚接入再分化诱导培养基，诱导培养，得到不定芽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述无菌苗诱导培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：蔗糖20～30g/L，琼脂5～8g/L，NAA0.5～1.0mg/L，6
‑
BA 0.8～2.0mg/L和活性炭0.5～2.0mg/L，所述无菌苗诱导培养基的pH值为5.8～6.0。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述体细胞胚诱导培养基以MSB培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：蔗糖20～30g/L、琼脂5～8g/L、TDZ 0.2～1.0mg/L、2,4
‑
D 0.4～1.0mg/L，所述体细胞胚诱导培养基的pH值为5.8～6.0。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述再分化诱导培养基为以MS培养基、WPM培养基或MBP培养基...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯小改，张婉青，张红晓，薛娴，张亚冰，郭丽丽，宋程威，郭琪，王娜，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：
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