一种快速测定人血浆中舍曲林血药浓度的方法技术

本发明专利技术属分析化学领域，本发明专利技术公开了一种UPLC

【技术实现步骤摘要】
一种快速测定人血浆中舍曲林血药浓度的方法


[0001]本专利技术属于药代动力学分析
，具体涉及液质联用法测定人血浆中舍曲林血药浓度的方法。

技术介绍

[0002]盐酸舍曲林片属抗抑郁症药，体外是神经元强效和特异的 5
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羟色胺再摄取抑制剂，能导致动物体内5
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羟色胺效应的增强，从而产生抗抑郁作用。对去甲肾上腺素及多巴胺的神经元再摄取仅有极轻微的影响。本品不增强儿茶酚胺活性，对胆碱能受体、5
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羟色胺受体、多巴胺能受体、肾上腺素能受体、组织胺受体、GABA受体均没有亲和性，它没有兴奋作用，镇静作用，抗胆碱作用或心脏毒性。舍曲林主要是通过肝脏代谢，舍曲林和其代谢产物在人体内大部分被代谢。其最终代谢产物从粪便和尿中等量排泄，只有少量从尿中排出。
[0003]盐酸舍曲林的结构如下：仿制药物与原研药的人体生物等效性是近年来我国对仿制药的普遍要求，是我国仿制药国际化质量标准的要求，是仿制药品质的保证。生物等效性是利用药代动力学评价手段来评价服药后，体内药物的吸收、分布、代谢和排泄规律，并运用数学原理进行统计分析。随着生物分析水平的不断提高，对药代动力学分析方法的要求不断提高，药物的血药浓度检测技术成为药物体内一致性评价的重要技术。
[0004]以往舍曲林血药浓度一般使用200μL~500μL血浆样品，血浆用量大；内标物多为同系物，与舍曲林提取效率不一致；乙醚:异丙醇
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1:1、甲基叔丁基醚、正己烷等作为提取溶剂，毒性较大；分析仪器一般使用HPLC法，检测速度慢，灵敏度低。
[0005]本专利技术要解决的技术问题是采用少量血浆，用盐酸舍曲林
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d3同位素作为内标物。准确测定人体血浆中舍曲林的血药浓度，改善提取剂的毒性较大的问题，建立UPLC
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MS/MS快速灵敏的检测方法，根据分析方法得到的数据进行舍曲林药代动力学、生物等效性等一系列研究，达到利用少量血浆样品，快速准确的测定人血浆中舍曲林的目的。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种采用较少血浆用量，快速测定人血浆中舍曲林血药浓度的UPLC
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MS/MS方法。从而实现舍曲林血药浓度的测定，最终保证快速，准确的测定人血浆中舍曲林含量，为舍曲林仿制药一致性评价提供检测方法。
[0007]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种测定人血浆中舍曲林的UPLC
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MS/MS分析方法，包括如下步骤：1）建立标准曲线a配制标准溶液：精密称取盐酸舍曲林标准品适量置于1mL量瓶中，加入适量甲醇，溶解并稀释至刻度，配制成一定浓度的舍曲林储备液；再用稀释剂稀释得到一系列标准品溶液。
[0008]精密称取盐酸舍曲林
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d3标准品适量置于1mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成一定浓度的内标储备溶液，再用稀释剂稀释至10
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100ng/mL，作为内标工作溶液。
[0009]b建立标准曲线分别取一系列浓度的舍曲林标准溶液，分别加入到空白血浆中，涡旋混匀，加入内标工作溶液，进行样品前处理，进行UPLC
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MS/MS分析，以一系列浓度舍曲林浓度的峰面积与内标峰面积比为纵坐标，以舍曲林系列浓度作为横坐标，进行最小二乘法线性回归，建立标准曲线。
[0010]2）样品检测：待样品经过前处理后，进行UPLC
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MS/MS分析。
[0011]优选地，上文所述的前处理方法为，取空白血浆样品90~200μL，样品加入内标后，涡旋混匀，加入5~10倍体积的乙酸乙酯，涡旋提取。离心，取上清200
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800μL，氮气吹干，使用60%甲醇水（含0.05%甲酸）溶液复溶，即为供试品溶液，用于UPLC
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MS/MS进样分析。
[0012]前处理方法中，优选的，血浆样品90~200μL，优选95μL；优选的，内标工作溶液浓度为10
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100ng/mL，（优选100ng/mL）；优选的，所述涡旋混匀时间为10~30秒（优选20秒）；优选的，涡旋提取时间为4~12分钟（优选10分钟）；优选的，所述离心条件为8000~12000 rpm/分钟（优选10000rpm/分钟）；优选的，离心温度为2~8℃（优选4℃）；优选的，离心时间为5~10分钟（优选10分钟）；优选的，取上清200
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800μL（优选700μL）；更具体的优选，样品前处理方法如下：取空白血浆95μL，加入100ng/mL同位素内标工作液5μL，涡旋混匀20秒，加入乙酸乙酯1mL，涡旋提取10分钟，于4℃，10000rpm/min条件下，离心分离10分钟，取上清溶液700μL，N2吹干，加入60%甲醇水（含0.05%甲酸）200μL涡旋4分钟复溶，取2μL进样分析。
[0013]另外，本方法优选的液质方法如下：色谱条件：流动相A为甲酸水溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱。流速为0.4 mL/min，色谱柱为C18色谱柱，柱温为40℃，进样室温度为6℃，分析时间为4分钟。
[0014]本专利技术所采用的色谱柱品牌为Waters、Apollo或YMC等。
[0015]流动相A为0.05%~0.2%甲酸水溶液，优选0.05%甲酸水溶液。
[0016]质谱条件：离子喷射电压：1500V；脱溶剂气温度：300
ꢀº
C；脱溶剂气流速：1000L/h；
锥孔气流速：150L/h；载气压力：7.0Bar；离子源为ESI，扫描方式为多离子反应监测（MRM）方式。
[0017]液质方法中，对于仪器品牌型号无特殊要求本专利技术采用Waters UPLC
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MS/MS液质联用仪器，其中，UPLC型号为ACQUITY UPLC I
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Class；MS型号为Xevo TQ
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S；工作站为Masslynx 。
[0018]色谱条件：流动相为A相：0.05%甲酸水溶液；B相：甲醇，流速0.4 mL/min，柱温：40
°
C，进样器温度：6
º
C。梯度洗脱程序下表所示：待测物和内标的保留时间如下表所示：质谱条件：本专利技术具有以下效益：本专利技术能够有效的测定人血浆中舍曲林的血药浓度，该方法血浆用量少，分析快速，提取效率高，方便快速并且灵敏度高，满足了临床药代动力学研究样本检测要求，为舍曲林生物等效性研究提供有效的生物样品检测方法。
[0019]具体实施方式：以下实施例用于进一步理解本专利技术，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本专利技术涉及的UPLC
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MS/MS方法测定人血浆中舍曲林血药浓度的方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
[0020]实施例1建立测定人血浆中舍曲林浓度的标准曲线标准工本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用较少血浆用量，快速测定人血浆中舍曲林血药浓度的UPLC
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MS/MS方法，其特征在于，包括如下步骤：1）配制舍曲林标准溶液、配制内标舍曲林
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d3内标溶液，建立标准曲线；2）测定血浆中舍曲林的浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）建立标准曲线a配制标准溶液：精密称取盐酸舍曲林标准品适量置于1mL量瓶中，加入适量甲醇，溶解并稀释至刻度，配制成一定浓度的舍曲林储备液；再用稀释剂稀释得到一系列标准品溶液。精密称取盐酸舍曲林
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d3标准品适量置于1mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成一定浓度的内标储备溶液，再用稀释剂稀释至10
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100ng/mL，作为内标工作溶液。b建立标准曲线分别取一系列浓度的盐酸舍曲林标准溶液，分别加入到空白血浆中，涡旋混匀，加入内标工作溶液，进行样品前处理，进行UPLC
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MS/MS分析，以一系列浓度舍曲林的峰面积与内标峰面积比作Y为纵坐标，以舍曲林系列浓度作为横坐标进行最小二乘法线性回归，建立标准曲线。 （2）样品检测：待样品经过前处理后，进行UPLC
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MS/MS分析。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述前处理方法为：取血浆样品适量，加入内标适量后，涡旋混匀，加入5~10倍体积的乙酸乙酯，涡旋提取。离心，取上清200
...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，王宇杰，郭夏，
申请(专利权)人：北京万全德众医药生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：