一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法技术

本发明专利技术涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法，包括以下依次进行的步骤：将含血清甲基纤维素清液与胶原蛋白液混合获得细胞成球培养基；所述胶原蛋白液的原料包括PBS、I型鼠尾胶原、NaOH溶液和水；将血管内皮细胞、基础培养基和甲基纤维素清液混合，获得接种液；将接种液接种于位于培养皿中的细胞成球培养基中，形成若干小液滴；将培养皿倒置培养，并在培养皿上放置重物，经培养获得内皮细胞球。本技术方案可以解决现有技术的血管内皮细胞成球诱导培养的成球率不理想的技术问题，细胞球出芽后的芽体在显微镜下清晰，且降低了实验成本，为进行关于基因和药物对血管生成影响的研究创造了更优的条件。件。件。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，具体涉及一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法。

技术介绍

[0002]血管生成(Angiogenesis)是从已有的血管上通过出芽(Sprouting)的方式形成完整的血管网络的过程。基于球体的出芽试验是研究基因和药物对血管内皮细胞毛细血管样管形成影响的一种成熟可靠的方法。该方法的一个主要优点是可以在3D环境中研究血管生成。将血管内皮细胞以悬滴法培养形成球状体，并将这些球状体嵌入胶原中，24小时后分析管的形成，通过分析出芽数和出芽长度，可以研究基因或药物对血管生成的影响。但现有技术中，血管内皮细胞成球的方式并不稳定，且试验成本较高，出芽后的芽体在显微镜下不清晰，不容易观察到，给后续研究过程造成了阻碍。中国专利CN112961821A公开了一种高效三维培养血管内皮细胞的方法，包括以下步骤：a,配制甲基纤维素培养基；b,接种内皮细胞到低粘附平面形成悬滴；c,18
‑
24小时后收集内皮细胞微组织球体；d，内皮细胞微组织球体进行出芽实验检测其血管新生能力本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：S1配制细胞成球培养基：将含血清甲基纤维素清液与胶原蛋白液混合获得细胞成球培养基；所述胶原蛋白液的原料包括PBS、I型鼠尾胶原、NaOH溶液和水；S2细胞成球培养：将血管内皮细胞、基础培养基和甲基纤维素清液混合，获得接种液；将接种液接种于位于培养皿中的细胞成球培养基中，形成若干小液滴；将培养皿倒置培养，并在培养皿上放置重物，经培养获得内皮细胞球。2.根据权利要求1所述的一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法，其特征在于：在S2中，将培养皿倒置培养的方法为：接种后，盖上培养皿盖，将培养皿倒置，培养皿盖中盛放有PBS；将多个倒置的培养皿叠放，并在最顶层的培养皿上放置重物。3.根据权利要求1所述的一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法，其特征在于：在S2中，培养皿的规格为10cm；培养皿盖中盛放的PBS的体积为2mL；所述重物为盛放有10ml PBS的培养皿。4.根据权利要求3所述的一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法，其特征在于：在S2中，血管内皮细胞为人微血管内皮细胞、人脐静脉内皮细胞和小鼠脑微血管内皮细胞中的一种；在接种液中，血管内皮细胞和基础培养基的总和与甲基纤维素清液的体积比为4:1，每5mL接种液中含有1
×
106‑2×
106个血管内皮细胞；一个小液滴含有25μl接种液。5.根据权利要求4所述的一种诱导血管内皮细胞成球和出芽的方法，其特征在于：在S2中，培养获得内皮细胞球的条件为37℃、24h。6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨德琴，许媛，吴娜，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：