海洋益生元半乳岩藻聚糖的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种海洋益生元半乳岩藻聚糖的制备方法及应用。半乳岩藻聚糖的制备方法，

【技术实现步骤摘要】
海洋益生元半乳岩藻聚糖的制备方法及应用


[0001]本专利技术属于犬猫肠道保健食品
，特别是涉及一种海洋益生元半乳岩藻聚糖的提纯技术及其在调节犬猫肠道菌群平衡和肠道免疫上的应用。

技术介绍

[0002]动物的肠道菌群研究已经持续了几十年，在小鼠、鸡鸭、伴侣动物、猪牛羊、人等各种动物上均有一定的研究成果。不同动物的肠道菌群组成结构差异巨大，影响肠道菌群差异的原因除了物种本身之外，还受食物的影响，例如外源益生菌、益生元、多糖、短链脂肪酸（SCFAs）等都会影响肠道菌群的结构以及丰富度，除了食物之外，药物、年龄变化、环境变化以及情绪都能通过影响肠道菌群进而影响机体的免疫、代谢等功能。
[0003]近年来多糖的研究越来越多，多糖按照来源可分为植物性多糖、动物性多糖以及微生物多糖等，研究较多的是植物性多糖。例如在小鼠模型中，β
‑
(1,3)(1,4)葡聚糖的摄入能够降低小鼠肠道上皮细胞中炎症因子TNF
‑
α以及INF
‑
γ的表达量，此外饲喂富含多糖的食物能改变人类肠道固有菌群的结构。对犬猫来说，目前的研究主要是膳食纤维类型的非结构性多糖，例如黑色亚麻籽多糖（Black psyllium）在肠道内发酵程度较低，导致其利用度较低，主要发挥膳食纤维的生理功能。益生性的结构性多糖则研究较少，只有少量关于果寡糖、甘露寡糖和半乳寡糖等的研究，例如猫每天摄入含0.75%果寡糖的猫粮，能够减少粪便中大肠杆菌的浓度，并且增加双歧杆菌和乳酸菌等益生菌的浓度，表明能够改善猫的肠道菌群。不过犬摄入添加0.5%果寡糖的犬粮后，粪便中乳酸菌以及双歧杆菌的浓度无明显变化，说明犬猫对摄入同样多糖后所受益的菌群略有不同，而且不是所有多糖都有改善肠道功能的作用，有些多糖反而会增加猫的消化负担，猫的胰腺中没有乳糖酶和蔗糖酶，小肠黏膜中的麦芽糖酶的活性很低，所以猫对这些多糖的利用率均较低。另外，不同多糖调控肠道菌群的机制也尚未研究全面，通过调控肠道pH值、抑制有害菌活性增加有益菌数量、增加肠道屏障功能等因素均能改变肠道菌群，因此关于多糖与肠道的关系仍需深入研究，此外海洋益生元多糖对犬猫肠道健康的研究则更少。总体来说，小分子的结构性多糖具有可以被益生菌直接利用以及发挥免疫功能等特点，所以益生性的结构性多糖对犬猫肠道的研究具有市场应用的前景。
[0004]犬猫常见的健康问题包括软便腹泻、泌尿肾脏、口腔炎症、肥胖等，针对犬猫常见的健康问题尤其肠道问题开发新型特定的多糖将有助于提升犬猫的生命质量和健康水平。多糖的来源十分广泛，目前宠物市场使用的多糖多为果寡糖、半乳寡糖等，主要来自于植物或者奶制品，而关于海洋益生元例如海藻等来源的多糖研究则较少。
[0005]CN113041175A公开了一种源自鼠尾藻的半乳岩藻聚糖及其在犬猫口腔护理上的应用，但是未涉及半乳岩藻聚糖在犬猫肠道的功能作用。

技术实现思路

[0006]为了开发新来源的多糖提取物，本专利技术的目的是提供一种海洋益生元半乳岩藻聚
糖的制备方法及应用，可用于调节肠道菌群平衡和肠道免疫。
[0007]一种海洋益生元半乳岩藻聚糖的制备方法，
①
乙醇脱色：利用85%乙醇对鼠尾藻进行脱色处理，脱色三次后得到色素较低的乙醇；
②
酶解法提取多糖：纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶的质量比例为2:2:1，维持pH 5.71、温度52℃提取35min，将含有粗多糖的上清液转移到离心管，利用8000rpm离心7分钟浓缩粗多糖液，并使用3600Da透析袋对上清液透析24小时，烘干后得到鼠尾藻粗多糖；
③
分离并纯化鼠尾藻粗多糖：利用DEAE Sephadex A25和 Sephadex G
‑
200 柱，依次使用 0，0.1，0.3 M 的 NaCl 溶液洗脱样品，流速为 0.5mL/min，脱硫、烘干得到纯化后的半乳岩藻聚糖。
[0008]一种犬猫肠道保健食品，配方包括以下质量份数的原料，鸡腿肉70
‑
90份、半乳岩藻聚糖0.2
‑
0.8份、低聚果糖0.5
‑
1份、甘露寡糖0.1
‑
0.5份、酿酒酵母提取物1
‑
3份、丁酸钠0.01
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0.05份、溶菌酶0.5
‑
1份、维生素B族和胆碱复合物0.1
‑
0.5份、维生素E 0.1
‑
0.5份；其中半乳岩藻聚糖不超过总质量的0.8%，低聚果糖、甘露寡糖之和不超过口腔护理配方总质量的1%；所述的半乳岩藻聚糖根据所述的制备方法得到。
[0009]所述维生素B族的组分包括维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B12 。
[0010]一种所述的犬猫肠道保健食品的制备方法，冷冻鸡腿肉于
‑
7~5℃低温解冻12h，将解冻后的鸡腿肉滚揉切块，与半乳岩藻聚糖、低聚果糖、甘露寡糖、酿酒酵母提取物、丁酸钠、溶菌酶、维生素B族和胆碱复合物、矿物质拌匀成型；将混合好的鸡腿肉进行速冻，温度为零下35~零下25℃，时间为0.5
‑
6h，即可得到冻干产品，最后进行紫外杀菌，杀菌时间1min。
[0011]本专利技术的有益效果：1）优化了半乳岩藻聚糖的制备方法；拓展了其应用；2）该肠道保健食品配方制成的产品，有助于调节肠道菌群平衡并增强肠道免疫能力，预防犬猫腹泻，减少软便，增强肠道屏障的稳态。具体表现如下：海洋益生元半乳岩藻聚糖作为肠道有益菌的生长原料，通过促进肠道有益菌的定植，来调控菌群平衡，并且增强小肠上皮细胞的抗氧化功能改善肠道免疫能力，来预防腹泻与肠道疾病。半乳岩藻聚糖与低聚果糖、甘露寡糖共同组成复合型益生元，对肠道健康的调节能力更强，酿酒酵母提取物能够改善小肠运动和消化功能，溶菌酶具备杀菌的功能，维生素B族可以增强肠道免疫力。具体如表1：
。
附图说明
[0012]图1是海洋益生元半乳岩藻聚糖的红外光谱检测图。
[0013]图2是海洋益生元半乳岩藻聚糖的电喷雾质谱检测图。
[0014]图3是海洋益生元半乳岩藻聚糖的电磁共振检测图。
[0015]图4是海洋益生元半乳岩藻聚糖（英文名：Fucoidan）的预测结构图。
[0016]图5是海洋益生元半乳岩藻聚糖对氧化应激状态下IPEC
‑
J2细胞凋亡过程的影响。
[0017]图6海洋益生元半乳岩藻聚糖对氧化应激状态下IPEC
‑
J2细胞丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。
[0018]图7是扫描电镜（SEM）观察海洋益生元半乳岩藻聚糖对氧化应激状态下IPEC
‑
J2细胞形态的影响。
[0019]图8是海洋益生元半乳岩藻聚糖处理 IPEC
‑
J2细胞能够提高铁蛋白(FTH1)和抗氧化蛋白谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)表达，并降低铁自噬蛋白(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海洋益生元半乳岩藻聚糖的制备方法，其特征在于：
①
乙醇脱色：利用85%乙醇对鼠尾藻进行脱色处理，脱色三次后得到色素较低的乙醇；
②
酶解法提取多糖：纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶的质量比例为2:2:1，维持pH 5.71、温度52℃提取35min，将含有粗多糖的上清液转移到离心管，利用8000rpm离心7分钟浓缩粗多糖液，并使用3600Da透析袋对上清液透析24小时，烘干后得到鼠尾藻粗多糖；
③
分离并纯化鼠尾藻粗多糖：利用DEAE Sephadex A25和 Sephadex G
‑
200 柱，依次使用 0，0.1，0.3 M 的 NaCl 溶液洗脱样品，流速为 0.5mL/min，脱硫、烘干得到纯化后的半乳岩藻聚糖。2.一种犬猫肠道保健食品，其特征在于：配方包括以下质量份数的原料，鸡腿肉70
‑
90份、半乳岩藻聚糖0.2
‑
0.8份、低聚果糖0.5
‑
1份、甘露寡糖0.1
‑
0....

【专利技术属性】
技术研发人员：赵元羚，胡汪洋，李建伟，林诺君，王寒霜，刘波静，
申请(专利权)人：杭州阿尔法贝宠物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：