联合免疫用药物、温敏凝胶组合物、趋化因子颗粒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了联合免疫用药物、温敏凝胶组合物、趋化因子颗粒及其应用，本发明专利技术运用可注射温敏聚合物PLGA

【技术实现步骤摘要】
联合免疫用药物、温敏凝胶组合物、趋化因子颗粒及其应用


[0001]本专利技术涉及联合免疫用药物、温敏凝胶组合物、趋化因子颗粒及其应用。

技术介绍

[0002]以嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)为代表的过继细胞疗法(ACT)在血液癌症的治疗中取得了可喜的成绩，但对实体瘤如肺癌、乳腺癌、肝癌等的疗效依旧不尽如人意。在CAR
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T治疗中，将患者外周血中提取的T细胞进行基因改造，使其能特异性识别肿瘤细胞，在体外激活、增殖这些细胞后再回输至病人体内。目前过继T细胞在实体瘤治疗上遇到的主要制约因素有：1)过继T细胞对实体瘤的靶向性差；2)到达病灶处的过继T细胞不能有效浸润实体肿瘤；3)浸润肿瘤的过继T细胞在肿瘤微环境(Tumor microenvironment，TME)中受到癌细胞的免疫抑制，从而功能降低、数量减少。
[0003]有研究尝试使用趋化因子加强过继T细胞对实体肿瘤的靶向性。趋化因子能通过免疫细胞表面G蛋白偶联受体刺激免疫细胞迁移。细胞毒性CD8+T淋巴细胞(CTL)是消灭肿瘤细胞的主要细胞，在激活的CD8+T细胞和记忆性CD8+T细胞表面均有较高的CXC
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趋化因子受体3(CXCR3)表达，因此CXCR3介导的免疫细胞迁徙是抗肿瘤免疫的关键因素之一。CXCR3的主要配体为CXCL9、CXCL10和CXCL11。CXCL9又称γ干扰素诱导的单核因子(Monokine induced by gamma interferon，MIG)，位于人4号染色体上，受IFN
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γ诱导。但实体瘤的趋化因子表达较少，不能有效吸引T细胞迁移至实体肿瘤。

技术实现思路

[0004]本专利技术在于提供联合免疫用药物、温敏凝胶组合物、趋化因子颗粒及其应用，本专利技术在实体瘤旁注射CXCL9趋化因子颗粒、PD1单抗和温敏聚合物的混合溶液，体温下形成装载CXCL9趋化因子颗粒、PD1单抗的免疫调节温敏水凝胶，使所载药物可在瘤旁长期可控释放，提高免疫细胞的肿瘤靶向性和抗肿瘤杀伤力。肿瘤穿透肽iRGD可装载于温敏凝胶中或静脉注射，与免疫调节温敏凝胶联合使用，增强免疫细胞的肿瘤浸润能力。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：趋化因子颗粒，包括两亲性聚合物、趋化因子以及白蛋白载体，所述两亲性聚合物包括与白蛋白相结合的分子、亲水间隔基团以及与趋化因子反应的官能基团；
[0006]所述与白蛋白结合的分子包括亲脂二酰基链、亲脂酰基链、烷基链、脂肪酸、维生素E、含有AVGALEGPRNQDWLGVPRQL序列的多肽。
[0007]作为优选，所述亲水间隔基团的结构如下所示：
[0008][0009]其中，X为含有醚键的多个碳原子的碳链；
[0010]作为优选，所述与趋化因子反应的官能基团包括能够与趋化因子的氨基、巯基或二硫键反应的官能基团。
[0011]作为优选，所述与蛋白反应的官能基团如下所示：
[0012][0013]其中，Y为氧，或含有醚键的多个碳原子的碳链。
[0014]作为优选，所述与蛋白反应的官能基团如下所示：
[0015][0016]其中，Z为含有多个碳原子的碳链。
[0017]作为优选，所述趋化因子包括CXCL9、CXCL10和CXCL11中的一个或任意两个以上的组合。
[0018]作为优选，所述白蛋白载体的粒径为1～1400nm。
[0019]上述趋化因子颗粒的制备方法，包括如下步骤：
[0020]1)、将趋化因子和两亲性聚合物进行混合使其反应，得到趋化因子修饰体；
[0021]2)、用PBS配置BSA溶液和DTSSP溶液，BSA和DTSSP按照摩尔比1:(10～300)混合，进行搅拌反应，反应结束后进行离心处理，用PBS洗涤后制备得NP；
[0022]3)、向白蛋白载体NP中加入所述趋化因子修饰体进行反应，进而得到趋化因子颗粒。
[0023]上述所述的趋化因子颗粒的制备方法，包括如下步骤：
[0024]1)、将趋化因子和两亲性聚合物进行混合使其反应，得到趋化因子修饰体；
[0025]2)、将BSA溶液和DTSSP溶液混合使其反应，并将反应后的样品溶液进行离心处理，用PBS重悬后制备得SMP；
[0026]3)、向白蛋白载体SMP中加入所述趋化因子修饰体进行反应，进而得到趋化因子颗粒。
[0027]温敏凝胶组合物，包括上述所述的趋化因子颗粒、PD
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1单抗、以及温敏水凝胶。
[0028]温敏凝胶组合物，包括上述所述的趋化因子颗粒、PD
‑
1单抗、iRGD多肽或包含c(CRGDKGPDC)的多肽序列、以及温敏水凝胶。
[0029]联合免疫用药物，包括瘤边施用的上述所述的温敏凝胶组合物和静脉施用的iRGD或包含c(CRGDKGPDC)的多肽序列。
[0030]上述所述的趋化因子颗粒、上述所述的温敏凝胶组合物、上述所述的联合免疫用药物在过继细胞疗法和非过继细胞免疫疗法中的应用；其中，过继细胞包括CAR
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T细胞、CAR
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NK细胞、CAR
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M细胞、TCR
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T细胞、中性粒细胞；非过继细胞包括内生CD8
+
T细胞、内生CD4
+
T细胞、内生NK细胞、内生巨噬细胞、内生中性粒细胞。
[0031]iRGD能增强药物对肿瘤的靶向性和浸润能力。iRGD是由9个氨基酸残基c(CRGDKGPDC)组成的环状肽，全身循环过程中可以特异性与肿瘤细胞上过表达的整合素和神经纤毛蛋白
‑
1(NRP
‑
1)受体结合，激活NRP
‑
1，增加肿瘤血管和组织的通透性。
[0032]在TME中，肿瘤细胞通常会上调细胞表面PD
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L1的表达。当T细胞表面受体PD
‑
1与其
配体PD
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L1结合时，免疫检查点信号通路会被激活，从而细胞活性会受到抑制，降低T细胞的抗癌免疫力。免疫检查点抑制剂如PD
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1抗体(aPD1)和PD
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L1抗体都可以有效阻断PD
‑
1信号通路，从而恢复T细胞的活性。
[0033]可注射水凝胶体系可以局部、靶向递送药物和可控缓释药物，在提高药物疗效和减少全身毒性方面具有巨大潜力，且其生物相容性高，能够广泛应用于生物医学领域。温敏凝胶是超分子水凝胶中广泛的一类，通过疏水相互作用形成凝胶化。在一定温度范围内为液体，随着温度的变化可转化形成凝胶。
[0034]二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇(DSPE
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PEG)嵌段共聚物具有良好的生物相容性，应用过程中通常会引用羧基、氨基、马来酰亚胺或N
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羟基磺基琥珀酰亚胺等基团对DSPE<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.趋化因子颗粒，其特征是：包括两亲性聚合物、趋化因子以及白蛋白载体，所述两亲性聚合物包括与白蛋白相结合的分子、亲水间隔基团以及与趋化因子反应的官能基团；所述与白蛋白结合的分子包括亲脂二酰基链、亲脂酰基链、烷基链、脂肪酸、维生素E、或含有AVGALEGPRNQDWLGVPRQL序列的多肽。2.根据权利要求1所述的趋化因子颗粒，其特征是：所述亲水间隔基团的结构如下所示：其中，X为含有醚键的多个碳原子的碳链。3.根据权利要求1所述的趋化因子颗粒，其特征是：所述与趋化因子反应的官能基团包括能够与趋化因子的氨基、巯基或二硫键反应的官能基团。4.根据权利要求3所述的趋化因子颗粒，其特征是：所述与趋化因子反应的官能基团如下所示：其中，Y为氧，或含有醚键的多个碳原子的碳链。5.根据权利要求3所述的趋化因子颗粒，其特征是：所述与趋化因子反应的官能基团如下所示：其中，Z为含有多个碳原子的碳链。6.根据权利要求1所述的趋化因子颗粒，其特征是：所述趋化因子包括CXCL9、CXCL10和CXCL11中的一个或任意两个以上的组合。7.根据权利要求1所述的趋化因子颗粒，其特征是：所述白蛋白载体的粒径为1～1400nm。8.权利要求7所述的趋化因子颗粒的制备方法，其特征是：包括如下步骤：1)、将趋化因子和两亲性聚合物进行混合使其反应，得到趋化因子修饰体；2)、用PBS配置BSA溶液和DTSSP溶液，BSA和DTSSP按照摩尔比1:(10～300)混合，进行搅拌反应，反应结束后进行离心处理，用PBS洗涤后制备得NP；3)、向白蛋白载体NP中加入所述趋化因子修饰体进行反应，进而得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑毅然，韩文清，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：