一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，属于生物技术领域。该方法包括利用物理方法将细菌样品的菌体外膜上的脂多糖释放出来，离心分别收集第一上清液和第一沉淀；将第一上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到脂多糖干粉，复溶得到脂多糖溶液，利用硫酸

【技术实现步骤摘要】
一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及对细菌荚膜多糖和脂多糖的分离定量方法。

技术介绍

[0002]细菌感染诱发的脓毒症，一直是免疫力低下人群死亡的重要原因，包括婴幼儿和重症疾病患者。据估计，全世界每年有3000万人患上脓毒症，每3
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4秒就有人死于脓毒症。在中国每年ICU收治的重症患者有五分之一遭受脓毒症，90天死亡率高达35.5%。脓毒症可以通过接种疫苗和清洁护理来预防，早期识别和治疗可将脓毒症死亡率降低50%，因此针对感染病原菌的研究必不可少。脓毒症患者感染的主要病原菌包括肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、肠道沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌等。这些病原菌的细胞表面都具有荚膜多糖（Capsular polysaccharide，CPS）或脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS），或两者都有，它们是细菌感染的重要毒力因子，也是疫苗和感染治疗的重要靶点。
[0003]荚膜多糖CPS是许多病原菌的细胞外膜结构，是位于细胞壁表面的一层松散的粘液物质，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：利用物理方法将细菌样品的菌体外膜上的脂多糖释放出来，离心分别收集第一上清液和第一沉淀；S2：将所述第一上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到脂多糖干粉，复溶得到脂多糖溶液，利用硫酸
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苯酚法定量脂多糖；S3：将所述第一沉淀用清洗液洗涤，然后加入表面活性剂处理后，离心收集第二上清液；S4：将所述第二上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到荚膜多糖干粉；S5：将所述荚膜多糖干粉加入低浓度盐酸复溶，室温孵育后，得到荚膜多糖溶液，利用糖醛酸内酯测定法定量荚膜多糖。2.根据权利要求1所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述步骤S1之前，还包括步骤S0：使用低浓度钠盐处理菌体。3.根据权利要求2所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述低浓度钠盐的用量为使得加入钠盐后的体系中钠盐的终浓度为50mM。4.根据权利要求1所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述步骤S1的物理方法为加入乙二胺四乙酸二钠。5.根据权利要求4所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述乙二胺四乙酸二钠浓度为50mM,pH值为8.0。6.根据权利要求1所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述步骤S2和S4去除蛋白和脂质杂质的方法为使用氯仿和正丁醇混合液。7.根据权利要求6所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述氯仿和正丁醇混合液中氯仿：正丁醇比例为5：1。8.根据权利要求1所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述步骤S2和S4中沉淀剂为乙醇。9.根据权利要求8所述的分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，其特征在于，所述乙醇加入量为使得加入后的体系中乙醇终浓度大于80%...

【专利技术属性】
技术研发人员：李维勤，郝海滨，林鸿，童智慧，杜德仁，许尧，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：