【技术实现步骤摘要】
高通量冷冻电镜数据收集新方法
[0001]本专利技术涉及一种高通量冷冻电镜数据收集新方法。
技术介绍
[0002]冷冻电镜单颗粒三维重构技术是获取生物大分子高分辨三维结构的重要手段。单颗粒三维重构技术需要使用冷冻电镜获取同一均质样品足够多的高质量照片。然而现阶段有限的冷冻电镜机时与日益增加的用户需求之间的矛盾愈发凸显，所以不断提高冷冻电镜数据采集速度和数据质量是大多数冷冻电镜平台关注的两个核心问题。
[0003]在冷冻电镜数据收集过程中，需要不断重复的使成像目标移动到束斑中心位置进行成像。传统方式是移动电镜的样品台来完成这一过程。样品台的移动是通过机械齿轮传导过程完成的，所以样品台移动到目标位置后，齿轮会有一个张力导致样品台产生一个固有的漂移状态。为了获取高质量的数据，样品台移动后在获取图像前需要样品台稳定一段时间，释放张力，提高样品成像质量。稳定时间一般在8
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20s，占取30
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40％左右的数据收集时间，这是数据收集速度的一个限速步骤。使用配备K2相机(Gatan)的Titan...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高通量冷冻电镜数据收集新方法，其特征在于，包括以下步骤：1)冷冻样品的制备2)数据收集使用冷冻电镜配合自动收集软件进行数据收集；3)样品台移动方式样品台移动的方式由自动收集软件控制，移动方式采用：常规移动后反向移动0.1μm，再反向移动0.02
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0.08μm，然后稳定2s；4)使用软件对收集得到的数据进行漂移矫正,统计偏移量。2.根据权利要求1所述高通量冷冻电镜数据收集新方法，其特征在于，步骤1具体为：1.1)载网准备载网的型号为Au 1.2/1.3 300目，然后使用等离子清洗仪对该载网进行等离子清洗；1.2)蛋白样品准备使用表达纯化得到的膜蛋白LolCDE复合体作为测试样品，该蛋白浓度为2mg/ml；1.3)样品制备取3...
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