修饰的微核小体核心蛋白及其在核酸递送中的用途制造技术

本公开提供了涉及修饰的微核小体核心蛋白和/或核酸递送的组合物和方法。具体地，本公开尤其包括用于递送核酸的非病毒性蛋白质媒介物。在各种实施方案中，本文提供的非病毒性蛋白质媒介物包含(a)核酸结合结构域；(b)靶向结构域；(c)核酸释放结构域；以及任选地，(d)另外的结构域，包括例如稳定性结构域、寡聚化结构域和/或接头结构域中的一者或多者。在各种实施方案中，蛋白质媒介物包含一个或多个修饰残基。残基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】修饰的微核小体核心蛋白及其在核酸递送中的用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月13日提交的美国临时申请号63/009,124的权益，所述临时申请的公开内容以引用方式整体并入本文。

技术介绍

[0003]AAV载体被视为当前基因治疗的黄金标准，并且在各种临床试验中已显示出前景，包括用于例如视网膜基因治疗以及肝脏、CNS和/或其他组织中的全身基因治疗的临床试验。随着至少三种不同的基因治疗获得监管批准，该领域有望进一步发展，使得患者可以获得这些改变生命的治疗。然而，尽管AAV载体是业界的黄金标准，但它还具有一定的局限性。需要改进和/或替代性的核酸递送技术。

技术实现思路

[0004]本公开提供了尤其与多肽有关的组合物和方法，所述多肽能够与核酸分子缔合，其中多肽包含至少一个修饰氨基酸。在各种实施方案中，多肽可以用于例如将核酸分子递送给需要基因治疗的受试者。因此，本公开尤其包括能够与核酸分子缔合的修饰多肽，以及包含本文公开的修饰多肽连同缔合的核酸分子的组合物。在不希望受到任何特定科学理论束缚的情况下，本公开预期，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种工程改造的多肽，其包含核酸结合结构域和核酸释放结构域，其中所述工程改造的多肽的一个或多个氨基酸是修饰氨基酸，任选地其中修饰包括以下中的至少一者：(i)磷酸化；(ii)硫酸化；(iii)糖基化；(iv)异戊二烯化；(v)甲基化；(vi)唾液酸化；(vii)脂化和/或脂酰化；(viii)乙酰化；(ix)羟基化；(x)棕榈酰化；(xi)甘露糖基化；(xii)肉豆蔻酰化；(xiii)岩藻糖基化；(xiv)聚乙二醇化；和/或(xv)其任何组合。2.如权利要求1所述的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含靶向结构域。3.一种工程改造的多肽，其包含核酸结合结构域和靶向结构域，其中所述工程改造的多肽的一个或多个氨基酸是修饰氨基酸，任选地其中修饰包括以下中的至少一者：(i)磷酸化；(ii)硫酸化；(iii)糖基化；(iv)异戊二烯化；(v)甲基化；(vi)唾液酸化；(vii)脂化和/或脂酰化；(viii)乙酰化；(ix)羟基化；(x)棕榈酰化；(xi)甘露糖基化；(xii)肉豆蔻酰化；(xiii)岩藻糖基化；(xiv)聚乙二醇化；和/或(xv)其任何组合；其中工程改造的多肽任选地还包含核酸释放结构域。4.如权利要求1
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3中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽的两个
ID NO:423
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428中的任一者的序列的靶向结构域，其中所述靶向结构域被硫酸化。16.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是具有SEQ ID NO:429
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434中的任一者的序列的靶向结构域，其中所述靶向结构域被糖基化。17.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是具有SEQ ID NO:435
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440中的任一者的序列的靶向结构域，其中所述靶向结构域被异戊二烯化。18.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是具有SEQ ID NO:441
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446中的任一者的序列的靶向结构域，其中所述靶向结构域被甲基化。19.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是具有SEQ ID NO:447
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459中的任一者的序列的靶向结构域，其中所述靶向结构域被唾液酸化。20.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是细胞附着靶向结构域、β半乳糖结合结构域、岩藻糖结合结构域、肝素结合结构域、唾液酸结合结构域、糖蛋白结合结构域、碳水化合物结合结构域、溶血磷脂酸结合结构域、cAMP结合结构域、透明质酸结合结构域、硫酸软骨素结合结构域、整联蛋白结合结构域、核仁素结合结构域、胶原蛋白结合结构域、网格蛋白结合结构域、Fc受体结合结构域、肌动蛋白结合结构域、内吞基序、核定位信号或其组合。21.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是细胞附着靶向结构域。22.如权利要求21所述的工程改造的多肽，其中所述细胞附着靶向结构域是或包含包括以下的氨基酸序列：WGREERQ、NTQIH、WNNKTPH、TPH、VNRWS、XBBBXXBX、ARKKAAKA、QRR、SRR、WEPSRPFPVD、HRRTRKAPKRIRLPHIR、KRTGQYKLGSKTGPGQK、KKTK、KLRSQLVKK、RRRCGQKKK、BX(7)B、RIQNLLKITNLRIKFVK、KKEKDIMKKTI、KGE、RGD、RGDS、TTVVNPKYEGK、ERMSQIKRLLS、WRHRARS、GFOGER、LFDLM、WGREERQ、QSTEKRG、LPNTG或其组合。23.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是内化结构域。24.如权利要求23所述的工程改造的多肽，其中所述内化结构域是或包含包括以下的氨基酸序列：FXDXF、PPSY、FEDNFVP、YIRV、YADW、YTQV、KKRPKP、SSDDE、RRASS、(YXXL)2、LPLTG、LAFTG或其组合。25.如权利要求2
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13中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是细胞类型特异性靶向结构域。26.如权利要求25所述的工程改造的多肽，其中所述细胞类型特异性靶向结构域是或包含包括以下的氨基酸序列：ASSLNIA、KKEEEKKEEEKKEEE、LIFHKEQ、KFNKPFVFLI、QPEHSST、EYHHYNK、NGR、GEKGEP、KTKKK、KALKKK、KGKKK、CSVTCG、LRE、YKYNLNGRES、YRSL、KGGK7、KKKQYTSIHHG、KDEL、LADQDYTKTA或其组合。27.如权利要求2
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26中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述靶向结构域是修饰的靶向结构域，因为所述靶向结构域包含一个或多个修饰氨基酸。28.如权利要求1
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27中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述核酸释放结构域是或包含包括以下的氨基酸序列：GRKKRRQRRRPQ、KRH、KSVKKRSVSEIQ、NRRKKRAL、KFERQ、VRGP、NKDS、NRDN、ANNR或其组合。29.如权利要求1
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28中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述核酸释放结构域是修
饰的核酸释放结构域，因为所述核酸释放结构域包含一个或多个修饰氨基酸。30.如权利要求1
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29中任一项所述的工程改造的多肽，其还包含聚精氨酸结构域。31.如权利要求30所述的工程改造的多肽，其中所述聚精氨酸结构域是修饰的聚精氨酸结构域，因为所述聚精氨酸结构域包含一个或多个修饰氨基酸。32.如权利要求1
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31中任一项所述的工程改造的多肽，其还包含核内化信号或核输入机制结合结构域。33.如权利要求32所述的工程改造的多肽，其中所述核内化信号或核输入机制结合结构域是或包含包括以下的氨基酸序列：KKKYKLK、KKRKLE、TRSK、HRKRKR、NKRKRK、AEKSKKK、RKSK、KRVK、KRK、LQQTPLHLAVI、RRPR、PRPR、RPPP、RKKRKGK、PAAKRVKLD、KLKIKRPVK、PKKKRKV、QRKRQK、DSPE、FQVT、QSTEKRG、RQGLID、环状RKKH或其组合。34.如权利要求32或权利要求33所述的工程改造的多肽，其中所述核内化信号或核输入机制结合结构域是修饰的核内化信号或核输入机制结合结构域，因为所述核内化信号或核输入机制结合结构域包含一个或多个修饰氨基酸。35.如权利要求1
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34中任一项所述的工程改造的多肽，其还包含稳定性结构域。36.如权利要求35所述的工程改造的多肽，其中所述稳定性结构域是或包含包括以下的氨基酸序列：YTRF、GDAY、LLEE、RKKRRQRRR、YKSL、YENF、FQDL、YIGSR、IKVAV或其组合。37.如权利要求35或36所述的工程改造的多肽，其中所述稳定性结构域是修饰的稳定性结构域，因为所述稳定性结构域包含一个或多个修饰氨基酸。38.如权利要求1
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37中任一项所述的工程改造的多肽，其还包含寡聚化结构域。39.如权利要求38所述的工程改造的多肽，其中所述寡聚化结构域选自表11的寡聚化结构域，任选地其中所述寡聚化结构域位于所述工程改造的多肽的C末端。40.如权利要求38或权利要求39所述的工程改造的多肽，其中所述寡聚化结构域是修饰的寡聚化结构域，因为所述寡聚化结构域包含一个或多个修饰氨基酸。41.如权利要求1
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40中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述多肽包含接头。42.如权利要求41所述的工程改造的多肽，其中所述接头是根据SEQ ID NO:154
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250中的任一者的接头。43.如权利要求41或42所述的工程改造的多肽，其中所述接头是修饰接头，因为所述接头包含一个或多个修饰氨基酸。44.如权利要求1
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43中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽的一个或多个氨基酸是磷酸化氨基酸。45.如权利要求44所述的工程改造的多肽，其中所述磷酸化氨基酸是丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸氨基酸。46.如权利要求44或权利要求45所述的工程改造的多肽，其中所述磷酸化氨基酸存在于接头结构域或靶向结构域中。47.如权利要求1
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43中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽的一个或多个氨基酸是硫酸化氨基酸。48.如权利要求47所述的工程改造的多肽，其中所述硫酸化氨基酸是丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸氨基酸。49.如权利要求47或权利要求48所述的工程改造的多肽，其中所述硫酸化氨基酸存在
于接头结构域或靶向结构域中。50.如权利要求1
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43中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽的一个或多个氨基酸是乙酰化氨基酸。51.如权利要求50所述的工程改造的多肽，其中所述乙酰化氨基酸是赖氨酸氨基酸。52.如权利要求50或权利要求51所述的工程改造的多肽，其中所述乙酰化氨基酸存在于接头结构域或靶向结构域中。53.如权利要求1
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43中任一项所述的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽的一个或多个氨基酸是甘露糖基化氨基酸。54.如权利要求53所述的工程改造的多肽，其中所述甘露糖基化氨基酸是丝氨酸氨基酸。55.如权利要求53或54所述的工程改造的多肽，其中所述甘露糖基化氨基酸存在于接头结构域或靶向结构域中。56.一种多核苷酸，其编码权利要求1
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55中任一项所述的工程改造的多肽的氨基酸序列。57.如权利要求56所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是DNA或RNA。58.一种载体，其包含权利要求56或57所述的多核苷酸。59.一种细胞，其包含权利要求1
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55中任一项所述的工程改造的多肽、权利要求56或57所述的多核苷酸，或权利要求58所述的载体。60.一种制备权利要求1
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55中任一项所述的工程改造的多肽的方法，所述方法包括在细胞中表达权利要求56
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58中任一项所述的多核苷酸。61.如权利要求60所述的方法，其还包括从所述细胞中分离所述工程改造的多肽。62.一种组合物，其包含：(i)至少一种多核苷酸，以及(ii)至少一种权利要求1
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55中任一项所述的工程改造的多肽。63.如权利要求62所述的组合物，其中所述至少一种多核苷酸是或包括DNA或RNA。64.如权利要求62或63所述的组合物，其中所述至少一种多核苷酸包括编码多肽的核苷酸序列。65.如权利要求62
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64中任一项所述的组合物，其中所述至少一种多核苷酸是或包括mRNA。66.如权利要求62或63所述的组合物，其中所述至少一种多核苷酸包括抑制性RNA。67.如权利要求66所述的组合物，其中所述抑制性RNA是gRNA、siRNA、m...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：加总生物公司，
类型：发明
国别省市：