乳制品鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种乳制品鉴别方法，具体涉及一种鉴别乳制品中乳成分来源的方法，更具体而言，涉及一种基于等电聚焦电泳技术对乳制品中的乳清来源进行鉴别的方法。与现有技术相比，本发明专利技术利用（毛细管）等电聚焦分析乳制品中的乳清来源，根据不同物种蛋白间的等电点差异，可灵敏的分辨出羊乳清产品中是否掺入牛乳清，反之亦然。通过乳清蛋白判定乳清来源的方法，不受羊乳清生产工艺过程中使用牛来源凝乳酶的干扰，有效解决了检测假阳性高的问题。同时，本发明专利技术提供的鉴定方法操作简单，检测效率高且成本较低，可规模化应用于实际生产及分析中。可规模化应用于实际生产及分析中。可规模化应用于实际生产及分析中。

【技术实现步骤摘要】
乳制品鉴别方法


[0001]本专利技术属于检测或测量领域，涉及一种利用电泳原理的等电聚焦分析方法的应用，更具体而言，本专利技术涉及一种鉴别乳制品中乳成分来源的方法，更具体而言，涉及一种基于等电聚焦电泳技术对乳制品中的乳清来源进行鉴别的方法。

技术介绍

[0002]开发与母乳成分更为接近的乳粉一直是婴幼儿配方乳粉研究领域的热点问题。母乳中的乳清蛋白与酪蛋白的含量比约为8比2，而在牛奶和羊奶中，乳清蛋白与酪蛋白的含量比约为2比8。
[0003]因此，在使用牛奶或者羊奶生产婴幼儿配方乳粉时，会额外加入乳清粉来调节蛋白比例。由于羊乳清的价格比牛乳清高，因此会有出现在羊乳清中掺入牛乳清以降低成本的行为，或者生产企业意外的使用了错误的原料，而该行为可能引起商业道德、食品安全甚至法律合规方面的问题。尤其地，这样的行为也可能与标识单一动物来源蛋白的（婴幼儿）配方乳粉产品中要求单一动物来源蛋白的原则相违背。因此需要开发一种鉴别方法用于判断乳制品（例如配方乳粉）中的乳清来源。
[0004]目前已有的鉴别方法有以下三种：
①
《羊乳及其制品中牛和羊（山羊和绵羊）源性成分定性检测方法 （实时荧光PCR法和毛细管凝胶电泳法）》 团体标准，该方法通过酪蛋白来确定是否有羊奶掺杂牛奶，但是无法判别羊乳清蛋白中是否掺有牛乳清；
②
SN/T 2980
‑
2011动物产品中牛、山羊和绵羊源性成分三重实时荧光PCR检测方法，该方法通过不同来源的DNA片段特异性进行判别，但是由于在羊乳清的工业生产过程中往往使用牛来源的凝乳酶进行生产，导致该方法样品假阳性概率高，不能对产品真实性进行判断；
③
蛋白组学的方法，该方法主要利用蛋白质组学对产品中酶解后的肽段进行序列分析，通过与数据库比对，判断肽段的来源，从而判断是否有掺假行为，该方法成本极高，推广困难，只能作为高端实验室的实验方法，而不适合于规模化分析检测。
[0005]另外，等电点（isoelectric point，pI）是蛋白质的最重要的理化性质之一，每一种蛋白质都有其特定的pI，其能反应蛋白质的空间结构、均一性以及功能性结构的变化，准确测定蛋白质的pI值在蛋白基础研究、蛋白质药物以及食品功能蛋白表征方面有着重要意义。毛细管等电聚焦（Capillary Isoelectric Focusing，cIEF）是等电聚焦技术中的一种，是一种根据蛋白质等电点不同而进行蛋白分离的技术，是蛋白质等两性分子分析最有力的工具之一。例如，引用文献1利用等电聚焦电泳技术进行肉类品质品鉴，可以鉴别肉类品质的好坏，精确区分肉类的来源是属于放血屠宰还是溺亡或病死等非放血屠宰的家畜(禽)；引用文献2利用毛细管等电聚焦方法快速测定蛋白混合物（例如复合抗体药物）中的各组分含量。
[0006]然而目前，利用等电聚焦技术判断或鉴定乳制品中的涉及乳清的可能来源的问题或方法尚未有过公开报道。
[0007]引用文献：引用文献1：CN109916988A；引用文献2：CN104764787A。

技术实现思路

[0008]专利技术要解决的问题基于以上现有技术中存在的，例如无法便利的检测乳清蛋白的可能来源，或者难以准确判断羊乳清蛋白中是否掺有牛乳清、乳清来源判断假阳性高以及检测成本高等问题，本专利技术旨在提供一种乳制品中乳成分、尤其是乳清成分来源的鉴定方法，根据乳清蛋白（尤其是其中的乳白蛋白）美拉德反应产物的特性，利用（毛细管）等电聚焦分析法便利地判断乳制品中乳清成分的来源，尤其地，适合用来判断羊乳制品中是否掺有牛乳清成分。
[0009]用于解决问题的方案本专利技术发现，可以通过以下的技术方案来解决上述技术问题：[1]. 本专利技术首先提供了一种乳制品中乳成分、尤其是乳清成分来源的鉴定方法，其包括如下步骤：提取的步骤，以提取所述乳制品中的乳清蛋白，从而得到含有乳清蛋白的成分（A）；等电聚焦分析的步骤，对所述成分（A）进行等电聚焦，并在所述等电聚焦后检测光吸收数据，所述检测光吸收数据包括检测：i. 是否存在等电点（pI）在4.69~4.79光吸收信号和/或检测该信号的强度；或者ii. 是否存在等电点（pI）在4.82
±
0.02或在pI=4.93
±
0.02光吸收信号和/或检测该信号的强度。
[0010][2]. 根据[1]所述的鉴定方法，其中，所述提取的步骤中去除酪蛋白以得到所述成分（A）。
[0011][3]. 根据[2]所述的鉴定方法，其中，所述成分（A）为包括乳清蛋白的水分散体系，并且，所述成分（A）中还去除了油脂和/或盐。
[0012][4]. 根据[1]~[3]任一项所述的鉴定方法，其中，所述提取的步骤中采用等电点沉淀法、膜过滤法、吸附分离法中的一种或多种的联用。
[0013][5]. 根据[1]～[3]任一项所述的鉴定方法，其中，所述等电聚焦分析前，还包括对所述成分（A）进行加热的步骤。
[0014][6]. 根据[1]～[3]任一项所述的鉴定方法，其中，所述等电聚焦分析的步骤中，使用毛细管等电聚焦仪器进行分析，所述毛细管等电聚焦仪器中的毛细管内壁经过改性处理。
[0015][7]. 根据[1]～[3]任一项所述的鉴定方法，其中，将所述等电聚焦在两性电解质以及任选的凝胶性成分、助溶剂、阳极稳定剂、阴极稳定剂中的一种或多种的存在下进行。
[0016][8]. 根据[1]～[3]任一项所述的鉴定方法，其中，所述光吸收数据为紫外光吸收
数据。
[0017][9]. 进一步，本专利技术也提供了一种鉴别方法，所述方法用于：鉴别源自于羊乳的产品中是否混入了源自于牛乳的成分；或鉴别源自于牛乳的产品中是否混入了源自于羊乳的成分，所述鉴别方法包括以上根据[1]～[8]任一项所述的鉴定方法。
[0018][10]. 羊和/或牛的α
‑
乳白蛋白及其酸性电荷异构体在鉴定乳制品中乳成分来源中的应用，所述鉴定的方法包括根据[1]～[8]任一项所述的鉴定方法。
[0019]专利技术的效果通过以上技术方案的实施，与现有技术相比，本专利技术取得了以下有益效果：（1）本专利技术利用（毛细管）等电聚焦分析乳制品中的乳清来源，根据不同物种蛋白间的等电点差异，可灵敏的分辨出羊乳清产品中是否掺入牛乳清，反之亦然。
[0020]（2）本专利技术提供的方法通过乳清蛋白判定乳清来源，不受羊乳清生产工艺过程中使用牛来源凝乳酶的干扰，有效解决了检测假阳性高的问题。
[0021]（3）本专利技术提供的鉴定方法操作简单，检测效率高且成本较低，可规模化应用于实际生产及分析中。
附图说明
[0022]图1：缓冲液盘的设置示意图。
[0023]图2：天然牛α
‑
Lac的毛细管等电聚焦图谱，其中横坐标为时间单位Minutes，纵坐标为吸光度单位AU。
[0024]图3：天然牛β
‑
Lg的毛细管等电聚焦图谱，其中横坐标为时间单位Minu本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳制品中乳成分来源的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：提取的步骤，以提取所述乳制品中的乳清蛋白，从而得到含有乳清蛋白的成分（A）；等电聚焦分析的步骤，对所述成分（A）进行等电聚焦，并在所述等电聚焦后检测光吸收数据，所述检测光吸收数据包括检测：i. 是否存在等电点（pI）在4.69~4.79光吸收信号和/或检测该信号的强度；或者ii. 是否存在等电点（pI）在4.82
±
0.02或在pI=4.93
±
0.02光吸收信号和/或检测该信号的强度。2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述提取的步骤中去除酪蛋白以得到所述成分（A）。3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述成分（A）为包括乳清蛋白的水分散体系，并且，任选地，所述成分（A）中还去除了油脂和/或盐。4.根据权利要求1～3任一项所述的鉴定方法，其特征在于，所述提取的步骤中采用等电点沉淀法、膜过滤法、吸附分离法中的一种或多种的联用。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：王象欣，解庆刚，崔东影，张影，高鹏，蒋士龙，张永久，陆思宇，
申请(专利权)人：黑龙江飞鹤乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：