一种具有类分子伴侣功能的固定化载体及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种具有类分子伴侣功能的柔性智能固定化载体及应用。本发明专利技术基于高通量筛选方法得到的柔性聚合物固定化载体对酶蛋白具有较高的亲和力和良好的选择性，可以代替传统的固定化载体；该固定化载体是由化学方法制备的柔性聚合物，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统固定化酶载体对酶蛋白选择性差、制备成本高、酶的催化活性降低等缺点。本发明专利技术制备的固定化载体为柔性聚合物，有利于适配酶的柔性构象，能够发挥分子伴侣功能，与变性失活的酶结合，利用柔性聚合物的特异性分子印迹空穴，无需外加条件和复杂的实验设备，能够恢复酶的结构和催化性能，实现变性酶的复性。实现变性酶的复性。实现变性酶的复性。

【技术实现步骤摘要】
一种具有类分子伴侣功能的固定化载体及应用


[0001]本专利技术属于酶的固定化
，特别涉及一种具有类分子伴侣功能的柔性智能固定化载体及应用。

技术介绍

[0002]酶对生命至关重要，承担着催化几乎所有新陈代谢过程的重要任务。酶是绿色生物制造的“芯片”，由于具有高选择性、高专一性和温和性等优点，在工业生物合成中极具价值。酶的高活性和稳定性是酶催化的普遍要求。但是酶在工程化应用中的主要缺点是在复杂应用环境下的稳定性差、易失活，例如温度和pH的改变、有机溶剂、小分子抑制剂、甚至其他蛋白质的存在会对酶的活性和稳定性产生影响。为了提高酶的性能，目前发展的解决方法包括酶的分子改造和酶的固定化，分别对酶分子本身和酶分子的环境进行改造。但酶活性与稳定性存在trade
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off效应，如何同时提高酶在复杂应用环境下的稳定性和活性仍是目前的研究难点。
[0003]常规的固定化酶载体大多为刚性，为酶提供的弛豫时间短，微环境与酶分子之间是非特异性相互作用，虽然可以提高酶的稳定性，但酶表观活性一般会有至少30
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有类分子伴侣功能的固定化载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤为：(1)将N
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叔丁基丙烯酰胺或N
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苯基丙烯酰胺溶在乙醇中，将N
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异丙基丙烯酰胺、功能单体、交联剂和引发剂溶在水中，以上反应物以不同比例混合，加入检测池中，超声通氮气5
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10min脱除混合液中的氧气后，在检测池底原位聚合反应得到聚合物薄层；反应后用水清洗聚合物薄层3
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5次，除去未反应的单体；(2)向检测池中加入酶溶液进行孵育，酶被固载到检测池底部的聚合物薄层上，除去上清液，测定固定在聚合物薄层上的酶的催化活力，筛选出对酶分子亲和力高和活力提升大的聚合物合成配方；(3)以步骤(2)筛选出来的配方配制原料，再加入模板剂和表面活性剂，超声通氮气5
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10min脱除混合液中的氧气后，搅拌聚合反应得到聚合物纳米颗粒，洗脱模板剂并透析纯化，获得具有类分子伴侣功能的固定化载体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的功能单体选自丙烯酸、衣康酸、甲基丙烯酸、N
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(3
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氨基丙基)甲基丙烯酰胺、(3
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丙烯酰胺丙基)三甲基氯化铵、1
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乙烯基咪唑、N
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[(3
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(二甲氨基)丙基]甲基丙烯酰胺、4
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乙烯基苯硼酸、丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟乙酯、N
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(2
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氨基乙基)丙烯酰胺、2
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甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱中的一种或几种；所述的交联剂为N,N'
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亚甲基双丙烯酰胺、N,N'
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乙烯基双丙烯酰胺和乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一种或几种；所述的引发剂为过硫酸铵、偶氮二异丁腈或四甲基乙二胺。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕永琴，李燕，殷德平，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：