一种吸附固定化Patatin酯酶的纳米磁珠及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种吸附固定化Patatin酯酶的凝集素耦合的纳米磁珠及其制备方法，所述制备方法以Patatin酯酶为酶蛋白，以聚丙烯酸(PAA)

【技术实现步骤摘要】
一种吸附固定化Patatin酯酶的纳米磁珠及其制备方法


[0001]本专利技术涉及固定化酶制备
，具体涉及的是一种吸附固定化Patatin酯酶的Fe3O4‑
ConA凝集素耦合的纳米磁珠及其制备方法。

技术介绍

[0002]Patatin酯酶是最早从马铃薯中发现的一种新型脂肪酶，具有酯酰基水解酶活性(LAH)，对一系列脂质底物具有水解酶活性，包括磷酯。EPA和DHA分别为eicosahexaenoic acid(二十碳五烯酸)和docosahexaenoic acid(二十二碳六烯酸)的简称，EPA和DHA能有效降低心血管疾病发病率且EPA和DHA对视力以及大脑发育也有积极的作用。尽管EPA和DHA在海产品中较为常见，我国一些内陆地区的居民仍面临着缺乏EPA和DHA的情况。最新研究发现Patatin酯酶在鱼油加工中具有富集EPA和DHA的功能作用，因此在水产脂质加工中具有较大的应用潜力。
[0003]纳米材料是指在三维空间中至少有一维处于纳米尺寸或由它们作为基本单元构成的材料。纳米载体材料拥有超高的比表面积，因此相比于传统本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吸附固定化Patatin酯酶，其特征在于，以Patatin酯酶为酶蛋白，以聚丙烯酸(PAA)
‑
Fe3O4纳米磁珠为固定化载体。2.根据权利要求1所述的一种吸附固定化Patatin酯酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1 PAA
‑
Fe3O4纳米磁珠与ConA的偶联；S2 Patatin酶粗提取物的制备；S3恒温吸附；S4用磁力架分离得到吸附固定化的Patatin酯酶。S5将实验数据输入Design
‑
Expert软件中，利用Design
‑
Expert对数据进行计算分析，列回归数学模型，求极值，找最优实验条件。3.根据权利要求2所述的一种吸附固定化Patatin酯酶的制备方法，其特征在于，所述S1包括如下步骤：
①
取2～10mg纳米磁珠与200μLPAA
‑
Fe3O4溶液置于离心管中，称量前将磁珠放到超声清洗机处理至无明显黑色颗粒为止；
②
移液器吸取MEST溶液500μL置于每管，洗涤三次，每30s换一次MEST溶液。洗涤方法为：放置磁板前先在混合仪上混合均匀，再插上磁板，箭头朝上，待液体澄清后，用移液枪吸取上清；
③
羧基磁珠活化：移液器吸取配制好的50mg/mL的NHS 500μL置于每管，50mg/mL的EDC 500μL置于每管，混匀后放在旋转混合仪上室温条件下转10～30min；
④
磁...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴金鸿，涂兰兰，李华，张勇，许璟珅，施依，陈润莎，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：