一种用于治疗中枢神经系统损伤的仙人掌多糖提取物的制备方法技术方案

本发明专利技术公开了仙人掌多糖提取物在制备治疗中枢神经系统损伤药物中的新用途，本发明专利技术另一目的是提供一种仙人掌多糖提取物的制备方法。细胞增殖实验检测发现，仙人掌多糖提取物可促进神经元细胞增殖，减轻甲基苯丙胺引起的神经元损伤；能改善甲基苯丙胺引起的小鼠神经行为障碍以及学习记忆障碍，减少神经元丢失，并增加神经生长因子(BDNF)的表达。因此仙人掌多糖提取物对神经元损伤具有很好的保护作用，可用于中枢神经系统损伤的治疗。本发明专利技术专利试验证明，在获得三个多糖提取物组分中，MAP2组分即平均分子量为4.46

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗中枢神经系统损伤的仙人掌多糖提取物的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种用于治疗中枢神经系统损伤的仙人掌多糖提取物的制备方法。

技术介绍

[0002]米邦塔仙人掌(OpuntiaMilpaAlta)属仙人掌科、仙人掌属、双子叶植物，是墨西哥农业专家经过多年的种植、人工杂交、选育后培育出来的食用仙人掌品种。近年来的研究表明，仙人掌的药理作用已涉及到抑菌、抗炎、免疫、降血糖、抗癌及预防心脑血管疾病等范畴。仙人掌的诸多功效与其化学成分密切相关，主要包括多糖类、黄酮类、有机酸类、生物碱类和甾醇类等多种天然活性物质。从植物中提取的多糖是由多个单糖或单糖衍生物聚合而成的大分子化合物，具有抗肿瘤、免疫调节、抗疲劳、降血糖、抗病毒、抗氧化等生理活性。目前对于米邦塔仙人掌多糖的研究大多停留在提取方法和结构分析的阶段，各实验室对米邦塔仙人掌多糖结构特征的研究结果也存在一定差异，对于多糖的相对分子质量与生理活性之间关系的研究较少。米邦塔仙人掌中提取的多糖是一种天然的活性物质，目前其生理活性的研究主要停留在降血脂和降血糖方面，而对于米邦塔仙人掌多糖的抗氧化活性研究鲜见研究报道。而多糖是生物体内普遍存在的一类大分子物质，作为生命物质的组成成分之一，广泛参与细胞的各种生理活动的调节，特别在细胞识别、细胞间物质运输、免疫调节等生物学功能方面新的认识广泛引起人们的重视。近年来大量研究证实，许多多糖具有抗肿瘤、降血糖、抗凝血、抗炎、抗衰老及抗氧化等重要药理活性，已引起药理学家的极大关注，所以多糖也逐渐成为当今新药开发的重要方向之一。因为多糖来源广泛，而生物活性显著，毒副作用小，所以在医药方面具有广阔的开发和利用前景。有人预言：“21世纪将是多糖的世纪”。但是目前还没有文献报道米邦塔仙人掌多糖对中枢神经系统损伤尤其是毒品导致的脑组织损伤具有保护作用。

技术实现思路

[0003]本专利技术公开了仙人掌多糖提取物在制备治疗中枢神经系统损伤药物中的新用途，本专利技术另一目的是提供一种仙人掌多糖提取物的制备方法。
[0004]细胞增殖实验检测发现，仙人掌多糖提取物可促进神经元细胞增殖，减轻甲基苯丙胺引起的神经元损伤；能改善甲基苯丙胺引起的小鼠神经行为障碍以及学习记忆障碍，减少神经元丢失，并增加神经生长因子(BDNF)的表达。因此仙人掌多糖提取物对神经元损伤具有很好的保护作用，可用于中枢神经系统损伤的治疗。
[0005]申请人还发现，仙人掌多糖治疗中枢神经系统损伤的效果与多糖的制备方法和分子量大小有一定关系，按以下方法制备的仙人掌多糖提取物活性最强，该方法的步骤如下：新鲜米邦塔仙人掌
→
预处理
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仙人掌干粉
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热水提取
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离心
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取上清液，加4倍体积95％乙醇静置12h
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离心
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沉淀加500mL去离子水复溶
→
浓缩
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三氯乙酸法除蛋白质
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透析除杂
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取上清液，加4倍体积95％乙醇静置12h
→
离心
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分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀
3次
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冷冻干燥
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得到米邦塔仙人掌粗多糖；
[0006]处理中需要注意的是：S1、预处理：取新鲜米邦塔仙人掌洗净、去皮、切片，置于80℃烘箱内烘干，然后粉碎成粉末，过60目筛，以1∶2的料液比添加石油醚，脱脂脱色素后晾干，密封保存；
[0007]S2、热水提取：精确称取10g米邦塔仙人掌干粉，按设定水提条件(料液比、提取温度、提取时间)进行提取试验，得到粗多糖浸提液；
[0008]S3、采用三氯乙酸法除去蛋白质：等体积加入3％三氯乙酸溶液，搅拌均匀后于4℃静置12h，10000r/min离心10min，上清液用NaOH调pH至中性，重复操作3次；
[0009]S4、米邦塔仙人掌粗多糖含量测定采用苯酚－硫酸法测定粗多糖含量，以阿拉伯糖为标准品测定粗多糖中多糖含量；粗多糖得率＝粗多糖重量/仙人掌干粉重量
×
100％；
[0010]S5、通过单因素试验，分别考察料液比、提取温度、提取时间、提取次数对米邦塔仙人掌粗多糖得率的影响。根据单因素试验结果，以料液比、提取温度和提取时间为参数，以粗多糖得率为响应值，按照Design－Expert10.0分析软件中的Box－Behnken中心组合设计法，设计三因素三水平的响应面试验，并对数据进行分析，得到响应面回归方程，进一步寻找最优工艺参数。
[0011]进一步地，一种用于治疗中枢神经系统损伤的仙人掌多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述的米邦塔仙人掌多糖的纯化步骤如下：
[0012]S1、阴离子交换柱DEAE－纤维素－52纯化称取0.1gMAP，加入10mL蒸馏水充分搅拌溶解，10000r/min离心15min，上清液过DEAE－纤维素－52柱。上样吸附半个小时，用蒸馏水和0.5mol/LNaCl分别洗脱，流速2mL/min，每管收集8mL。用苯酚－硫酸法在482nm处测定每管吸光度，以试管编号为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制洗脱曲线。收集合并洗脱峰段溶液，旋蒸浓缩和透析脱盐后，进行冷冻干燥得到水洗脱部分多糖MAP1和盐洗脱部分多糖MAP2；
[0013]S2、阴离子交换柱DEAE－琼脂糖－CL－6B纯化称取0.05gMAP，加入10mL蒸馏水充分搅拌溶解后10000r/min离心15min，上清液过DEAE－琼脂糖－CL－6B柱。上样吸附半个小时，用蒸馏水洗3个柱体积，弃去，然后用0.1mol/LNaCl洗脱，流速1.5mL/min，每管收集6mL。其他步骤同上，冷冻干燥后得到MAP3；
[0014]S3、总糖和糖醛酸含量的测定分别取2mL0.03mg/mL的各多糖溶液，2mL阿拉伯糖各标准品溶液，向各管加入4％的苯酚溶液0.5mL，迅速滴加5mL浓硫酸，摇匀，冷却至室温，静置15min，测定其在482nm处的吸光度，另取2mL蒸馏水同法操作为参比。根据标准曲线计算样品中总糖的含量。分别取1mL0.5mg/mL的各多糖溶液，1mLD－半乳糖醛酸各标准品溶液，在冰水浴中分别加入浓硫酸溶液6mL，混匀，于80℃水浴加热20min，取出后立即冷却至室温，加入0.15％咔唑溶液0.2mL，摇匀，室温下保持2h后，在530nm处测定吸光度，用1mL蒸馏水作为参比；根据标准曲线计算样品中糖醛酸的含量。
[0015]本专利技术专利有益效果：试验证明，在获得三个多糖提取物组分中，MAP2组分即平均分子量为4.46
×
104～5.91
×
104的组分活性最强。本专利技术疗效确切，由于是天然产物，因此副作用少，安全可靠；所提供的制备方法产品收率高，活性成分含量高。
附图说明
[0016]图1为本专利技术一种用于治疗中枢神经系统损伤的仙人掌多糖提取物的制备方法的流程图。
[0017]图2为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗中枢神经系统损伤的仙人掌多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：新鲜米邦塔仙人掌
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预处理
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仙人掌干粉
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热水提取
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离心
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取上清液，加4倍体积95％乙醇静置12h
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离心
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沉淀加500mL去离子水复溶
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浓缩
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三氯乙酸法除蛋白质
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透析除杂
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取上清液，加4倍体积95％乙醇静置12h
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离心
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分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀3次
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冷冻干燥
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得到米邦塔仙人掌粗多糖；上述处理中需要注意的是：S1、预处理：取新鲜米邦塔仙人掌洗净、去皮、切片，置于80℃烘箱内烘干，然后粉碎成粉末，过60目筛，以1∶2的料液比添加石油醚，脱脂脱色素后晾干，密封保存；S2、热水提取：精确称取10g米邦塔仙人掌干粉，按设定水提条件(料液比、提取温度、提取时间)进行提取试验，得到粗多糖浸提液；S3、采用三氯乙酸法除去蛋白质：等体积加入3％三氯乙酸溶液，搅拌均匀后于4℃静置12h，10000r/min离心10min，上清液用NaOH调pH至中性，重复操作3次；S4、米邦塔仙人掌粗多糖含量测定采用苯酚－硫酸法测定粗多糖含量，以阿拉伯糖为标准品测定粗多糖中多糖含量；粗多糖得率＝粗多糖重量/仙人掌干粉重量
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100％；S5、通过单因素试验，分别考察料液比、提取温度、提取时间、提取次数对米邦塔仙人掌粗多糖得率的影响；根据单因素试验结果，以料液比、提取温度和提取时间为参数，以粗多糖得率为响应值，按照Design－Expert10.0分析软件中的B...

【专利技术属性】
技术研发人员：田亚彪，
申请(专利权)人：安徽倍利尔药业有限公司，
类型：发明
国别省市：